Peptidyl-Asp metaloendopeptidáza - Peptidyl-Asp metalloendopeptidase - Wikipedia

Peptidyl-Asp metaloendopeptidáza
Identifikátory
EC číslo3.4.24.33
Číslo CAS55576-49-3
Databáze
IntEnzIntEnz pohled
BRENDAVstup BRENDA
EXPASYPohled NiceZyme
KEGGVstup KEGG
MetaCycmetabolická cesta
PRIAMprofil
PDB strukturRCSB PDB PDBe PDBsum

Peptidyl-Asp metaloendopeptidáza (ES 3.4.24.33, endoproteináza Asp-N, peptidyl-Asp metaloproteináza) je enzym.[1][2][3] Tento enzym katalýzy následující chemická reakce

Štěpení Xaa-Asp, Xaa-Glu a Xaa- kyselina cysteová vazby

Dějiny

Peptidyl-Asp metaloendopeptidáza byla poprvé objevena, když byla izolována ze supernatantu Pseudomonas fragi. Původně se předpokládalo, že tato bakterie produkuje pouze jednu proteinázu, ale později se zjistilo, že P. fragi může produkovat více než jeden druh proteinázy. To je zajímavé vzhledem ke skutečnosti, že jeden z identifikovaných mutantů má specifičnost štěpení, která byla dříve neznámá a může být použita při sekvenování proteinů. Tento enzym se stal komerčně dostupným jako endoproteináza (Asp-N).[4]

Přehled

Struktura se skládá z jednořetězcového proteinu s molekulovou hmotností 24 440 kDa při analýze hmotnostním spektrometrem. V gelu SDS leží pás v oblasti 27 000 kDa. Proteinová sekvence obsahuje HEXXH obrazec, který může být použit jako vazebné místo pro zinek. Patří do rodiny M72 MEROPS.[5] Tento enzym je užitečný, protože štěpí specifické peptidové vazby ve zbytcích kyseliny asparagové (Xaa-Cya) a kyseliny cysteinové (Xaa-Cya) na N-konci, avšak tento enzym není schopen štěpit kyselinu isoaspartovou. Štěpení kyseliny glutamové typicky vyžaduje specifické podmínky, ale je mnohem pomalejší než aspartylpeptidy. Toto štěpení lze regulovat snížením koncentrace enzymů v procesu trávení a zkrácením inkubační doby. Existuje několik způsobů, jak určit aktivitu tohoto enzymu. Toho lze dosáhnout provedením proteinázového testu s použitím proteinů jako substrátů pomocí fluorescenčního testu hledajícího samočinně poškozující škodlivý peptid.[6]

Sukcinimid je meziprodukt, který vzniká při ztrátě alfa uhlíku na Asp nebo Asn, jedná se o velmi specifickou událost, ke které dochází v Asp 58 a Asn 151 alfa krystalinu. To je běžné u beta amyloidů, které jsou přijímány od starších osob, což vede k domněnce, že existuje účast na této mutaci a stárnutí.[7] Bylo také prokázáno, že kyselina isoasparagová (isoAsp) má vliv na stárnutí, autoimunitní poruchy, rakovinu a neurodegeneraci. Tato kyselina vzniká, když asparagin prochází deaminací nebo dojde k izomerizaci kyseliny asparagové. To se týká farmaceutického průmyslu, protože to může způsobit agregaci nebo dokonce narušit aktivitu enzymu. Je však obtížné provést další výzkum z důvodu podobnosti hmotnostních a chemických vlastností isoAsp a Asp.[8]

Reference

  1. ^ Porzio MA, Pearson AM (březen 1975). "Izolace extracelulární neutrální proteinázy z Pseudomonas fragi". Biochimica et Biophysica Acta (BBA) - Enzymologie. 384 (1): 235–41. doi:10.1016/0005-2744(75)90112-6. PMID  236771.
  2. ^ Drapeau GR (únor 1980). "Substrátová specificita proteolytického enzymu izolovaného z mutantu Pseudomonas fragi". The Journal of Biological Chemistry. 255 (3): 839–40. PMID  7188696.
  3. ^ Ingrosso D, Fowler AV, Bleibaum J, Clarke S (srpen 1989). „Specifičnost endoproteinázy Asp-N (Pseudomonas fragi): štěpení na glutamylových zbytcích ve dvou proteinech“. Sdělení o biochemickém a biofyzikálním výzkumu. 162 (3): 1528–34. doi:10.1016 / 0006-291x (89) 90848-6. PMID  2669754.
  4. ^ Noreau J, Drapeau GR (prosinec 1979). "Izolace a vlastnosti proteázy z divokého typu a mutantních kmenů Pseudomonas fragi". Journal of Bacteriology. 140 (3): 911–6. doi:10.1128 / JB.140.3.911-916.1979. PMC  216733. PMID  42639.
  5. ^ Hagmann ML, Geuss U, Fischer S, Kresse GB (1995). "Peptidyl-Asp metaloendopeptidáza". Metody v enzymologii. 248: 782–7. doi:10.1016/0076-6879(95)48053-6. PMID  7674963.
  6. ^ Ellard JM, Zollitsch T, Cummins WJ, Hamilton AL, Bradley M (září 2002). „Zvýšení fluorescence enzymatickým štěpením interně zchlazených dendritických peptidů: citlivý test na endoproteinázu AspN“. Angewandte Chemie. 41 (17): 3233–6. doi:10.1002 / 1521-3773 (20020902) 41:17 <3233 :: AID-ANIE3233> 3.0.CO; 2-E. PMID  12207399.
  7. ^ Shujia Dai, David H. Lee, Nathaniel T. Kenton a Zhaohui Sunny Zhou (2013). Příručka proteolytických enzymů. Oxford: Academic Press. 1281–1285. ISBN  978-0-12-382219-2.CS1 maint: více jmen: seznam autorů (odkaz)
  8. ^ Wenqin Ni, Shujia Dai, Barry L. Karger a Zhaohui Sunny Zhou (16. srpna 2010). „Analýza kyseliny isoasparagové selektivní proteolýzou s hmotnostní spektrometrií Asp-N a disociací elektronů“. Analytická chemie. 82 (2010, 82 (17)): 7485–7491. doi:10.1021 / ac101806e. PMC  2936825. PMID  20712325.CS1 maint: více jmen: seznam autorů (odkaz)

externí odkazy