Pfu DNA polymeráza - Pfu DNA polymerase

Termín virologie viz. Viz Jednotka tvořící plak.
Pfu DNA polymeráza
Identifikátory
OrganismusPyrococcus furiosus
Symbolpol
PDB4 Ahc
UniProtP61875

Pfu DNA polymeráza je enzym nacházející se v hypertermofilní látce archaeon Pyrococcus furiosus, kde funguje tak, že kopíruje organismus DNA během buněčného dělení. V laboratorním prostředí Pfu se používá k zesílení DNA v polymerázová řetězová reakce (PCR), kde enzym plní centrální funkci kopírování nového řetězce DNA během každého kroku prodloužení.

Je to rodina B. DNA polymeráza. Má RNáza H - jako 3'-5 'exonukleázová doména, typická pro polymerázu rodiny B, jako je DNA polymeráza II.[1]

Korektura schopnosti Pfu polymeráza

Pfu DNA polymeráza má ve srovnání s. Vynikající termostabilitu a korektury Taq DNA polymeráza. Na rozdíl od Taq DNA polymeráza, Pfu DNA polymeráza má 3 'až 5' exonukleáza korektura, což znamená, že když je DNA sestavena z 5 'konec na 3 'konec, aktivita exonukleázy se okamžitě odstraní nukleotidy misincorporated na 3 'konci rostoucího řetězce DNA. Tudíž, Pfu Fragmenty PCR generované DNA polymerázou budou mít méně chyb než Taq-generované inzerty PCR.

Komerčně dostupný Pfu obvykle vede k chybovosti 1 na 1,3 milionu párů bází a při amplifikaci 1 kb fragmentů pomocí PCR může poskytnout 2,6% mutovaných produktů. Nicméně, Pfu je pomalejší a obvykle vyžaduje 1–2 minuty na cyklus k amplifikaci 1 kB DNA při 72 ° C. Použitím Pfu DNA polymeráza v PCR reakcích také vede k produktům PCR s tupými konci.[2]

Pfu DNA polymeráza je tedy lepší než Taq DNA polymeráza pro techniky, které vyžadují vysoce věrnou syntézu DNA, ale lze je také použít ve spojení s Taq polymerázy k získání věrnosti Pfu s rychlostí Taq aktivita polymerázy.[3]

Dějiny

Vědci pod vedením Erica Mathura z biotechnologické společnosti Stratagene se sídlem v La Jolla, Kalifornie, objevili Pfu DNA polymerázu, která vykazuje výrazně vyšší věrnost replikace než Taq DNA polymeráza v roce 1991.[4] Dostali patenty na nedostatek exonukleáz Pfu a plné Pfu v roce 1996.[5]

Ostatní polymerázy z Pyrococcus kmeny jako „Deep Vent“ (Q51334) z kmene GB-D a Pwo DNA polymeráza také viděl použití.[3]

Reference

  1. ^ Pohled na protein InterPro: P61875
  2. ^ Agilent Technologies. „PfuTurbo DNA Polymerase Instruction Manual # 600250“ (PDF).
  3. ^ A b van Pelt-Verkuil E, van Belkum A, Hays JP (2008). "Taq a další termostabilní DNA polymerázy". Principy a technické aspekty amplifikace PCR. 103–18. doi:10.1007/978-1-4020-6241-4_7. ISBN  978-1-4020-6240-7.
  4. ^ Lundberg KS, Shoemaker DD, Adams MW, Short JM, Sorge JA, Mathur EJ (prosinec 1991). „Vysoce věrná amplifikace pomocí termostabilní DNA polymerázy izolované z Pyrococcus furiosus“. Gen. 108 (1): 1–6. doi:10.1016 / 0378-1119 (91) 90480-r. PMID  1761218.
  5. ^ US patent 5 489 523 , US patent 5 545 552

externí odkazy