Pwo DNA polymeráza - Pwo DNA polymerase

Viz také: Taq polymeráza, Pfu DNA polymeráza, Odvzdušněte DNA polymerázu, a Varianty PCR
DNA polymeráza
Identifikátory
OrganismusPyrococcus woesei
Symbolpol
UniProtP61876

Pwo polymeráza je termostabilní DNA polymeráza používané pro polymerázová řetězová reakce. Zkratka znamená Pyrococcus woesei, termofilní archaon, ze kterého byla izolována tato polymeráza. Tato polymeráza se při dosažení chyby rozbije uracil v DNA z prodloužení řetězce a díky této funkci readahead je syntetizováno méně defektních klonů DNA. Používá se mnohem méně než obvyklé Taq nebo Pfu polymerázy.[1] Tato DNA polymeráza, podobně jako jiné DNA polymerázy z Archaebacteria, je citlivá na zbytky Uracil v DNA a je silně inhibována zbytky dUTP nebo uracilu v DNA. Ostatní polymerázy v této třídě jsou Pfu, Vent, Deep Vent a Pfx.[2] Inhibice této třídy termostabilních DNA polymeráz omezuje jejich použití v některých aplikacích PCR, tj. Použití dUTP pro prevenci kontaminace přenosem, stejně jako aplikace zahrnující dU obsahující primery, jako jsou metody klonování bez ligázy nebo místně řízená mutageneze pomocí UNG.[3]

Reference

  1. ^ Ghasemi A, Salmanian AH, Sadeghifard N, Salarian AA, Gholi MK (září 2011). "Klonování, exprese a čištění Pwo polymerázy z Pyrococcus woesei". Iranian Journal of Microbiology. 3 (3): 118–22. PMC  3279813. PMID  22347593.
  2. ^ Lasken RS, Schuster DM, Rashtchian A (červenec 1996). „Archeobakteriální DNA polymerázy pevně váží DNA obsahující uracil“. The Journal of Biological Chemistry. 271 (30): 17692–6. doi:10.1074 / jbc.271.30.17692. PMID  8663453.
  3. ^ Rashtchian A, Thornton CG, Heidecker G (listopad 1992). "Nová metoda pro místně řízenou mutagenezi pomocí PCR a uracil DNA glykosylázy". Metody a aplikace PCR. 2 (2): 124–30. doi:10.1101 / gr.2.2.124. PMID  1477668.