Endoglykosidáza H - Endoglycosidase H

Mannosyl-glykoprotein endo-beta-N-acetylglukosaminidáza
Identifikátory
EC číslo3.2.1.96
Číslo CAS37278-88-9
Databáze
IntEnzIntEnz pohled
BRENDAVstup BRENDA
EXPASYPohled NiceZyme
KEGGVstup KEGG
MetaCycmetabolická cesta
PRIAMprofil
PDB strukturRCSB PDB PDBe PDBsum

Enzym Endoglykosidáza H (ES 3.2.1.96, Endo-β-N-acetylglukosaminidáza H, N, N'-diacetylchitobiosyl beta-N-acetylglukosaminidáza, mannosyl-glykoprotein endo-beta-N-acetylglukosamidáza, di-N-acetylchitobiosyl beta-N-acetylglukosaminidáza, endo-beta-acetylglukosaminidáza, endo-beta- (1-> 4) -N-acetylglukosaminidáza, mannosyl-glykoprotein 1,4-N-acetamidodeoxy-beta-D-glykohydroláza, endoglykosidáza S., endo-N-acetyl-beta-D-glukosaminidáza, endo-N-acetyl-beta-glukosaminidáza, endo-beta-N-acetylglukosaminidáza D, endo-beta-N-acetylglukosaminidáza F, endo-beta-N-acetylglukosaminidáza H, endo-beta-N-acetylglukosaminidáza L., glykopeptid-D-manosyl-4-N- (N-acetyl-D-glukosaminyl) 2-asparagin 1,4-N-acetyl-beta-glukosaminohydroláza, endoglykosidáza H) je enzym s systematické jméno glykopeptid-D-manosyl-N4- (N-acetyl-D-glukosaminyl) 2-asparagin 1,4-N-acetyl-beta-glukosaminohydroláza.[1][2][3][4][5][6] Je to velmi specifické endoglykosidáza který štěpí asparagin -propojená manóza bohatá oligosacharidy, ale ne vysoce zpracované komplexní oligosacharidy z glykoproteiny. Používá se pro výzkumné účely k deglykosylaci glykoproteinů.

Struktura a činnost

Endoglykosidáza H se izoluje z Streptomyces plicatus nebo Streptomyces griseus.Své molekulární váha je 29 000 Daltonů. Primární struktura je popsána Robbinsem 1984.[7]

Endoglykosidáza H štěpí vazbu v jádru diacetylchitobiózy teoligosacharidu mezi dvěma N-acetylglukosamin (GlcNAc) podjednotky přímo proximálně k asparaginovému zbytku, generující zkrácenou molekulu cukru s jedním N-acetylglukosaminovým zbytkem zbývajícím na asparaginu.[8]

Deglykosyláty manózových glykoproteinů, ale rozsah a rychlost deglykosylace závisí do značné míry na povaze glykoproteinů. Rychlost deglykosylace může být zvýšena denaturací glykoproteinů (např. Karboxymethylací, sulfitolýzou nebo zahříváním za přítomnosti dodecylsulfát sodný). Přidání 0,1 M 2-merkaptoethanolu vysoce zvyšuje aktivitu enzymu proti glykoproteinům obsahujícím inter- nebo intra-molekulární disulfidové můstky, na rozdíl od detergentů, jako je Triton X-100, n-oktylglukosid nebo zwitteriontové detergenty.[9]

Biochemické aplikace

Endoglykosidáza H (Endo H) je běžně používána buněčnými biology k monitorování posttranslační modifikace v Golgiho aparát. Většina proteinů určených pro buněčný povrch je přeloženo podle ribozomy do drsnosti endoplazmatické retikulum (ER) a přemístěny do Golgi. Po vstupu do ER je molekula obsahující 14 podjednotek cukru spojena en bloc s asparaginem selektivním způsobem pomocí enzymu oligosacharyl transferáza. Právě tato oligosacharidová molekula je modifikována řadou enzymů, jak se protein pohybuje v různých kompartmentech Golgiho aparátu. Endoglykosidáza H je schopna štěpit každou strukturu tohoto oligosacharidu, když je zpracován, dokud nedojde k enzymu Golgi alfa-manosidáza II odstraní dva manóza podjednotky. Protože všechny pozdější oligosacharidové struktury jsou rezistentní na štěpení Endo H, je enzym široce používán k hlášení rozsahu zpracování oligosacharidů, kterým prošel požadovaný protein.[10]

Reference

  1. ^ Chien S, Weinburg R, Li S, Li Y (1977). "Endo-β-N-acetylglukosaminidáza z fíkového latexu ". Biochem. Biophys. Res. Commun. 76: 317–323. doi:10.1016 / 0006-291x (77) 90727-6.
  2. ^ Koide N, Muramatsu T (srpen 1974). "Endo-beta-N-acetylglukosaminidáza působící na sacharidové skupiny glykoproteinů. Čištění a vlastnosti enzymu z Diplococcus pneumoniae". The Journal of Biological Chemistry. 249 (15): 4897–904. PMID  4152561.
  3. ^ Pierce RJ, Spik G, Montreuil J (červen 1979). "Cytosolická lokalizace aktivity endo-N-acetyl-beta-D-glukosaminidázy v játrech a ledvinách potkanů". The Biochemical Journal. 180 (3): 673–76. doi:10.1042 / bj1800673. PMC  1161109. PMID  486141.
  4. ^ Pierce RJ, Spik G, Montreuil J (leden 1980). „Demonstrace a cytosolická lokalizace aktivity endo-N-acetyl-beta-D-glukosaminidázy směrem k substrátu asialo-N-acetyl-laktosaminového typu v játrech potkana“. The Biochemical Journal. 185 (1): 261–4. doi:10.1042 / bj1850261. PMC  1161293. PMID  7378051.
  5. ^ Tai T, Yamashita K, Ogata-Arakawa M, Koide N, Muramatsu T, Iwashita S, Inoue Y, Kobata A (listopad 1975). „Strukturální studie dvou glykopeptidů ovalbuminu ve vztahu ke specificitě endo-beta-N-acetylglukosaminidázy“. The Journal of Biological Chemistry. 250 (21): 8569–75. PMID  389.
  6. ^ Tarentino AL, Plummer TH, Maley F (únor 1974). „Uvolňování intaktních oligosacharidů ze specifických glykoproteinů endo-beta-N-acetylglukosaminidázou H“. The Journal of Biological Chemistry. 249 (3): 818–24. PMID  4204553.
  7. ^ Robbins PW, Trimble RB, Wirth DF, Hering C, Maley F, Maley GF, Das R, Gibson BW, Royal N, Biemann K (červen 1984). "Primární struktura enzymu Streptomyces endo-beta-N-acetylglukosaminidáza H". The Journal of Biological Chemistry. 259 (12): 7577–83. PMID  6429133.
  8. ^ Endoglykosidáza H, severní hvězda
  9. ^ Trimble RB, Maley F (září 1984). „Optimalizace hydrolýzy N-vázaných oligosacharidů s vysokým obsahem manózy endo-beta-N-acetylglukosaminidázou H“. Analytická biochemie. 141 (2): 515–22. doi:10.1016/0003-2697(84)90080-0. PMID  6437277.
  10. ^ Alberts B (2002). Molekulární biologie buňky (4. vydání). New York: Garland. ISBN  978-0-8153-4072-0.

externí odkazy

Zavřete enzymy

Endoglykosidázy F a D, štěpte Glc-Nac

PNGase F (Peptid-N4- (N-acetyl-beta-glukosaminyl) asparagin_amidáza)