Míchací studie - Mixing study

Míchací studie jsou testy prováděné na krevní plazma pacientů nebo testovaných subjektů k rozlišení nedostatků faktorů od inhibitory faktorů, jako lupus antikoagulant nebo specifické inhibitory faktorů, jako je protilátky namířeno proti faktor VIII. [1]Základním účelem těchto testů je zjistit příčinu prodloužení Protrombinový čas (PT), Částečný čas tromboplastinu, nebo někdy z trombinový čas (TT). Studie směšování využívají skutečnosti, že hladiny faktorů, které jsou 50 procent normální, by měly dávat normální Protrombinový čas (PT) nebo Částečný čas tromboplastinu (PTT) výsledek.[2] Faktorově deficitní plazma (Adsorbed Plasma & Aged Plasma atd.) Se používají ve směšovacích studiích. Plazma se známými nedostatky faktorů je komerčně dostupná, ale je velmi nákladná, proto se často připravuje v laboratoři a lze ji potom použít pro experimenty s mícháním.

Testovací metoda

Čerstvá normální plazma má všechny krevní koagulační faktory s normálními hladinami. Plazma od pacientů užívajících perorální antikoagulancia (Warfarin atd.) po dobu 48-72 hodin chybí Faktor VII. Adsorbovaná plazma nebo plazma od pacientů užívajících perorální antikoagulancia (Warfarin atd.) po dobu jednoho týdne nebo více má nedostatek faktoru II, faktoru VII, faktoru IX a faktoru X. Zestárlá plazma má nedostatek Faktor V & Faktor VIII C. Sérum má nedostatek faktorů I, V a VIIIC.

Pokud je problémem prostý nedostatek faktoru, výsledkem smíchání pacientovy plazmy 1: 1 s plazmou, která obsahuje 100% normální hladiny faktoru, je ve směsi hladina ≥ 50% (řekněme, že pacient má aktivitu 0%; průměr 100% + 0% = 50%).[3] PT nebo PTT budou normální (směšovací studie ukazuje korekci). Oprava mícháním indikuje nedostatek faktoru; opomenutí indikuje inhibitor. Provedení trombinového času na testovací plazmě může poskytnout užitečné další informace pro interpretaci testů míchání.

Oprava protrombinového času

Protrombinový čas (PT) lze opravit následovně:[4][5]

Nedostatek / abnormalita faktoruProtrombinový čas korigovaný smícháním s
Normální plazmaAdsorbovaná plazmaVěková plazmaKumarinová plazma
Faktor I.AnoAnoAnoAno
Faktor IIAnoČástečnýAnoAno
Faktor VAnoAnoNeAno
Faktor VIIAnoNeAnoNe
Faktor XAnoNeAnoAno
AntikoagulanciaNeNeNeNe

Korekce parciálního tromboplastinového času

Částečný čas tromboplastinu (PTT) lze opravit následovně:[4]

Nedostatek / abnormalita faktoruČástečný čas tromboplastinu korigovaný smícháním s
Normální plazmaAdsorbovaná plazmaVěková plazma
Faktor VIIICAnoAnoNe
Faktor IXAnoNeAno
Faktor XIAnoAnoAno

Časově závislé inhibitory

Některé inhibitory jsou časově závislé. Jinými slovy, nějakou dobu trvá, než protilátka reaguje a deaktivuje přidaný koagulační faktor. Test srážlivosti provedený bezprostředně po smíchání vzorků může ukázat korekci, protože protilátka neměla čas na inaktivaci svého cílového faktoru. Test provedený po inkubaci směsi po dobu 1 až 2 hodin při 37 ° C ukáže významné prodloužení doby srážení získané po okamžitém promíchání. Nespecifické inhibitory jako lupus antikoagulant obvykle nejsou časově závislé; okamžitá směs se prodlouží. Mnoho specifických inhibitorů faktorů je časově závislých a inhibitor nebude detekován, pokud se test po inkubaci nezopakuje (inhibitory faktoru VIII jsou tím známé).[6]

Abnormální výsledky koagulačních testů

Běžným problémem je nevysvětlitelné zvýšení PT a / nebo PTT. Pokud je to pozorováno, měl by se test opakovat s čerstvým vzorkem. Další úvaha je heparin. Je možné, že vzorek krve byl omylem odebrán běžící čarou. Interference heparinu lze detekovat absorpcí heparinu pryskyřicí („Heparsorb“) nebo použitím enzym trávit heparin („Hepzyme[7]“). Také pacient Dějiny je třeba zkontrolovat, zejména s ohledem na antikoagulační použití nebo nemoc jater. Pokud je abnormální výsledek reprodukován na čerstvém vzorku a z historie není zřejmé vysvětlení, měla by být provedena studie míchání. Pokud studie míšení ukazuje korekci a žádné prodloužení inkubace, je třeba hledat nedostatek faktorů, počínaje VIII a IX. Vitamin K. - je třeba zvážit faktory nezávislé na vitaminu K a nezávislé na vitaminu, aby se vyloučilo, že budou náhodné nebo skryté warfarin požití.

Inhibitor

Pokud se studie míchání nezdaří, měl by být přidán inhibitor.[8][9] Nejběžnějším inhibitorem je nespecifický inhibitor, jako je a lupus antikoagulant.[8] Proveďte test k prokázání protilátky závislé na fosfolipidech, jako je a destička neutralizační postup. Vyskytují se spontánní specifické inhibitory proti faktorům srážení (tj. Ne v hemofilici ), nejčastěji proti faktoru VIII.[10] K tomu může dojít u pacientů s systémový lupus erythematodes, monoklonální gamapatie, jiný malignity, v době těhotenství a bez zjevného důvodu (idiopatické ). Tito pacienti mohou mít zničující krvácení. Úkolem je určit konkrétní konkrétní faktor a zjistit, jak vysoký je titr. Pokud má pacient inhibitor s nízkým titrem, zkuste ho přemoci vysokými dávkami faktoru. Pokud má pacient vysokou protilátku proti faktor VIII, zkuste prasečí faktor VIII nebo protrombin komplexní koncentráty[11] zastavit krvácení. Prednison často časem titr sníží. Intravenózní imunoglobulin údajně také pomáhá, ale nezdá se, že by fungoval u hemofiliků s inhibitorem.

Reference

  1. ^ Lanzkowsky P (06.06.2005). Manuál dětské hematologie a onkologie. Elsevier. ISBN  978-0-08-049731-0.
  2. ^ Devreese KM (2007). „Interpretace studií míchání normální plazmy v laboratorní diagnostice lupusových antikoagulancií“. Výzkum trombózy. 119 (3): 369–76. doi:10.1016 / j.thromres.2006.03.012. PMID  16704874.
  3. ^ Hoffman R, Benz EJ, Silberstein LE, Heslop H, Anastasi J, Weitz J (2013-01-01). Hematologie: Základní principy a praxe. Elsevier Health Sciences. ISBN  978-1-4377-2928-3.
  4. ^ A b Gupta P, Menon PS, Ramji S, Lodha R (2015-08-31). Učebnice pediatrie PG: Svazek 2: Infekce a systémové poruchy. JP Medical Ltd. ISBN  9789351529552.
  5. ^ Med Lab Tech Vol 1, 2 / e. Tata McGraw-Hill Education. 2010. ISBN  978-0-07-007659-4.
  6. ^ Bain BJ, Bates I, Laffan MA (2016-08-11). Elektronická kniha o praktické hematologii Dacie a Lewise. Elsevier Health Sciences. ISBN  9780702069253.
  7. ^ „Heparinová neutralizace“. www.clinlabnavigator.com. Citováno 2018-05-13.
  8. ^ A b „Smysl studia míchání“. George King Bio-Medical, Inc.. 2016-01-07. Citováno 2018-05-13.
  9. ^ McPherson RA, Pincus MR (06.09.2011). E-kniha o Henryho klinické diagnostice a léčbě laboratorními metodami. Elsevier Health Sciences. ISBN  978-1455726844.
  10. ^ Franchini M, Castaman G, Coppola A, Santoro C, Zanon E, Di Minno G, Morfini M, Santagostino E, Rocino A (červenec 2015). „Získané inhibitory faktorů srážlivosti: doporučení AICE pro diagnostiku a léčbu“. Krevní transfuze = Trasfusione del Sangue. 13 (3): 498–513. doi:10.2450/2015.0141-15. PMC  4614303. PMID  26192778.
  11. ^ Lusher JM (2000). "Inhibitorové protilátky proti faktoru VIII a faktoru IX: management". Semináře o trombóze a hemostáze. 26 (2): 179–88. doi:10,1055 / s-2000-9821. PMID  10919411.