Objev a vývoj inhibitorů NS5A - Discovery and development of NS5A inhibitors

Genom HCV. NS5A ve spodním řádku, druhý zprava.

Nestrukturální protein 5A Inhibitory (NS5A) jsou přímo působící antivirová činidla (DAA), která cílí virové proteiny a jejich vývoj byl vyvrcholením zvýšeného porozumění virový životní cyklus v kombinaci s pokrokem v technologii objevování drog.[1][2] Nicméně, jejich mechanismus účinku je složitá a není plně pochopena.[2] Inhibitory NS5A byly středem pozornosti, když se objevily jako součást první léčebné léčby virus hepatitidy C. (HCV) infekce v roce 2014.[3] Příznivé vlastnosti byly zavedeny prostřednictvím různých strukturálních změn a strukturní podobnosti mezi inhibitory NS5A, které jsou klinicky schválené, jsou snadno patrné.[4][5] Navzdory nedávnému zavedení řady nových antivirotik odpor je stále problém a tyto inhibitory se proto vždy používají v kombinace s jinými léky.[6][7]

Virus hepatitidy C.

HCV je a jednořetězcový RNA virus pozitivního smyslu u kterého bylo prokázáno, že se replikuje v hepatocyty lidí i šimpanzů. Jeden HCV polyprotein je přeložen a poté štěpen buněčnými a virovými proteázy do tří strukturní proteiny (jádro, E1 a E2) a sedm nestrukturální proteiny (str. NS2, NS3, NS4A, NS4B, NS5A a NS5B ).[8][9]

HCV patří mezi hlavní příčiny nemoc jater okolo světa. Přenáší se krví a nejčastěji se stahuje pomocí infikovaných jehel.[10] Pacienti trpící chronickou infekcí HCV jsou významně ohroženi cirhóza a hepatocelulární karcinom, což jsou hlavní příčiny úmrtí infikovaných.[11][12]

Virus existuje již více než tisíc let a byl klasifikován do šesti známých genotypy, z nichž každý obsahuje četné podtypy. Sedmá zůstává necharakterizovaná. Smluvní genotyp určuje, které konkrétní způsoby léčby jsou životaschopné.[13]

NS5A receptor

Základní struktura a chemické vlastnosti

NS5A je velký hydrofilní fosfoprotein který je nezbytný pro životní cyklus HCV a nachází se ve spojení s membránovými vezikuly indukovanými virem, nazývaným membránová síť.[14][15] NS5A je protein bohatý na prolin složený z přibližně 447 aminokyseliny, který je rozdělen do tří domén.[16][17] Tyto domény jsou spojeny dvěma sekvencemi s nízkou složitostí, které jsou buď serine- nebo prolin -bohatý.[18] Doména I je doména vázající zinek a rentgenové krystalografické studie ukázaly alternativní dimerní konformace domény I NS5A.[19][20][21] Doména II a III jsou nestrukturované, což ukazují studie NMR.[16][22] Doméně I předchází doména N-terminál amfipatický spirála což umožňuje, aby se protein spojil s endoplazmatické retikulum - odvozené membrány.[22][23][24] Ačkoli rentgenové krystalografické studie odhalily dimerní konformace domény NS5A1, nedávné studie strukturní charakterizace řešení ukázaly, že proteiny NS5A tvoří struktury vyššího řádu dimerními podjednotkami domény NS5A 1. [25] Kromě toho celkový strukturální model NS5A zdůrazňuje variabilitu vnitřních konformací domén D2 a D3 mezi genotypy HCV.[26] Proto stále probíhá debata o tom, která konformace NS5A je funkční a také cílená inhibitory NS5A.

NS5A existuje hlavně ve dvou odlišných fosforylovaný formy, hypofosforylovaný a hyperfosforylovaný forma, ale přesná funkce fosforylace nebyla stanovena.[17][18][27]

Funkce

Protein NS5A hraje důležitou roli v replikace virové RNA, virové shromáždění a komplexní interakce s buněčnými funkcemi.[2][17] Protein byl zapojen do modulace obrany hostitele, apoptóza, buněčný cyklus, a dráhy reagující na stres.[27] Jeho funkce a úplná struktura však musí být ještě objasněna.[16]

Zdá se, že NS5A je klíčem ke spuštění tvorby membránového pásu v nepřítomnosti jiných podobných nestrukturálních proteinů.[15] Mnoho proteinů v hostitelské buňce může být ovlivněno NS5A, např. fosfatidylinositol 4-kináza IIIα (PI4KIIIα), a kináza potřebné pro replikaci HCV. Tato kináza se účastní biosyntéza z fosfatidylinositol 4-fosfát (PI4P) interakcí s NS5A, který stimuluje jeho aktivitu a zdá se, že zlepšuje integritu membránového pásu.[15][28][29]

V poslední době se díky ústřední roli NS5A při virové proliferaci stalo cílem vývoj léků. V důsledku toho byla zavedena nová antivirová činidla pro léčbu HCV.[2]

Mechanismus účinku

Inhibitory NS5A byly vyvinuty k cílení na protein NS5A. Tyto inhibitory dosáhly významného snížení hladin HCV RNA v krvi, a lze je proto považovat za účinná antivirotika. Jejich mechanismus působení je považován za různorodý, ale přesný mechanismus není zcela objasněn.[2][30] Většina studií předpokládá, že inhibitory NS5A působí ve dvou základních fázích životního cyklu HCV; replikace genomové RNA a shromáždění virionů. Další studie navrhují alteraci faktorů hostitelské buňky jako možný třetí mechanismus.[2][15][31]

NS5A předpokládá se inhibitor mechanismus účinku. Inhibitor se váže na doménu 1 NS5A a brání RNA z vazby, a tím narušení replikace RNA.[24]

Struktura inhibitorů NS5A je charakterizována dimerní symetrie. To naznačuje, že inhibitory NS5A působí na dimery NS5A.[32] Ukázala to řada modelových studií daklatasvir, který je inhibitorem NS5A, se váže pouze na dimer NS5A "back-to-back" a že vazba musí být symetrická. Další modelové studie ukázaly, že je možná vazba na jiné konformace NS5A asymetrické vazba.[30] Výzkum ukázal, že cílem daklatasviru je s největší pravděpodobností doména I NS5A.[31] I když mechanismus není zcela objasněn, bylo prokázáno, že inhibitory downregulate Hyperfosforylace NS5A, která vede k potlačení replikace HCV a jeho zpracování polyproteinů, a vede k neobvyklému umístění proteinu.[31][33] Dosud se předpokládalo, že tato inhibice vyžaduje pouze doménu I NS5A, ale nikoli domény II a III.[33] Nedávné studie však ukázaly, že obě domény I a II jsou relevantní pro toto narušení replikace RNA.[34]

Zdá se, že inhibitory NS5A dále narušují tvorbu nových komplexů replikázy, což vede k postupnému zpomalení syntézy virové RNA. Účinek na dříve vytvořené komplexy ještě musí být prokázán.[34][35]

Dostupné důkazy naznačují, že inhibitory NS5A modifikují umístění NS5A uvnitř buňky. To může způsobit neobvyklé sestavení vedoucí k nesprávně tvarovaným virům.[2] Některé studie odhalily, že inhibice shromáždění virů hraje při redukci RNA důležitější roli než redukce replikace viru.[35][36]

Studie prokázaly, že inhibitory NS5A blokují tvorbu membránového pásu, který chrání viry genom a představuje hlavní weby pro replikaci a shromažďování virů.[15][31][37] Předpokládá se, že tento mechanismus je nezávislý na replikaci RNA, ale zdá se, že je ovlivněn inhibitory NS5A blokujícími tvorbu komplexu PI4KIIIα-NS5A, což je nezbytné pro syntézu PI4P, což má za následek sníženou integritu membránové pavučiny, a proto sníženou HCV RNA replikace.[15][28][38]

Dějiny

Výzkum HCV učinil v posledních letech velký pokrok díky objevu a klinickému vývoji mnoha nových léků proti HCV. Mezi těmito léky jsou DAA, které zahrnují inhibitory NS5A.[39]Bylo zjištěno, že inhibitory NS5A jsou zvláště účinné při léčbě HCV, kde se používají v kombinaci s jinými inhibitory proteázy, jako jsou inhibitory NS5B (např. sofosbuvir ), pegylované interferony (např. peginterferon alfa-2a ) a ribonukleové analogy (např. ribavirin ).[40][41][42] Stále přítomné riziko viru kmeny rozvíjející se odpor je hlavním faktorem, proč se používají v kombinaci s jedním nebo více doplňkovými léky.[43]

Nepříznivé účinky a rozsáhlé a komplikované lékové režimy spojené s nízkou mírou dodržování předpisů byly překážkou ve vývoji antivirové léčby. Kombinace inhibitorů NS5A a NS5B přinesla v tomto ohledu pozitivní výsledky.[44]

Objev a vývoj drog

Objev

V současné době (25. července 2016) jsou čtyři NS5A klinicky schválené inhibitory, zatímco existuje mnoho dalších ve vývoji nebo prochází klinické testy. Daklatasvir byl prvním klinicky schváleným inhibitorem NS5A. Strukturní podobnosti lze vidět mezi daklatasvirem a novějšími inhibitory, jak je znázorněno modře. Daclatasvir vyvinul Bristol-Myers Squibb, ledipasvir podle Gilead Sciences, ombitasvir podle AbbVie Inc. a elbasvir podle Merck & Co. [4][39]

Objev inhibitorů NS5A se uskutečnil v kontextu snahy o léčbu HCV. NS5A je mezi sedmi nestrukturálními proteiny, které tvoří komplex s virovou RNA v infikovaných buňkách k zahájení replikace HCV.[45] Výzkum HCV přinesl několik DAA včetně inhibitorů NS3A, NS4A a NS5B a také inhibitorů NS5A.[46]

Rozvoj

Vývoj antivirových léčiv schopných interferovat s proteiny odpovědnými za replikaci viru byl úzce spojen s pokrokem v technikách stanovení účinné buněčná kultura potřebné systémy obrazovka pro ně.[46]

V roce 1999 došlo k průlomu, kdy došlo k úplnému konsensuálnímu genomu naklonovaný Bylo zjištěno, že z HCV RNA se replikuje na vysokých úrovních, když transfektovaný do lidského hepatomu buněčná linie.[47] Tato metoda byla od té doby vylepšena použitím mutací adaptivních na buněčnou kulturu, které zvyšují replikaci RNA.[48]

Screening nyní vytvořil řadu inhibitorů NS5A, které byly začleněny do léčby HCV. První v této nové třídě léků byl daklatasvir, který dostal FDA schválení v roce 2015.[49] Od té doby byly schváleny další léky, mezi nimi zejména ledipasvir, které spolu se sofosbuvirem zahrnují lék na HCV Harvoni.[50][51]

Přestože se inhibitory NS5A ukázaly jako účinné antivirotika, musí být používány společně s doplňkovými antivirotiky kvůli tomu, jak rychle vedou k vývoji rezistentní mutace pokud je uveden jako jediný agent.[52] To formovalo zaměření vývoje inhibitorů NS5A, z nichž asymetrické varianty metabolizovat Kromě jiných objevů se objevily i analogie s komplementárními profily rezistence.[53]

Vztah struktura-aktivita

Strukturální podobnosti mezi inhibitory jsou snadno patrné.[4] Přídavky centrálního jádra jsou obvykle symetrické a mají znak imidazol -prolinová struktura.[5] Přírodní L-konfigurace prolin deriváty bylo shledáno kritickým pro inhibici, protože nepřirozené D-konfigurace měl drasticky slabší aktivitu. The potence inhibitorů byla odpovídajícím způsobem citlivá na změny v amin uzavírací prvek. Tato pozorování naznačují, že aminová oblast molekuly hraje důležitou roli v inhibiční aktivitě.[54]

Mezi příznivé vlastnosti inhibitoru NS5A patří vysoká účinnost a dlouhá plazma poločas rozpadu za účelem dosažení dávky jednou denně. Bylo zjištěno, že mírně asymetrické přílohy, jak je vidět v ledipasviru, mají výrazné výhody pro optimalizaci účinnosti inhibitoru a farmakokinetika.[50] Struktura centrálního jádra mění rozteč a projekci příloh, jakož i polohu lipofilita v centrálním jádru, což zejména ovlivňuje inhibiční aktivitu. Struktury s kondenzovanými centrálními kruhy trvale vykazují vyšší inhibiční aktivitu, zatímco méně lipofilní centrální jádra poskytují slabší aktivitu.[4] Symetrické bis-imidazolové struktury, jako je daklatasvir, pociťují ztrátu účinnosti fluoren je nahrazeno pro biaryl skupina. Tato substituce také vede k vážným problémům se stabilitou.[50][55] Menší lipofilní konektor, jako je difluormethylen, však generuje nejúčinnější inhibitor v asymetrické struktuře. Kromě toho poskytuje vylepšené biologická dostupnost a příznivější poločas rozpadu v plazmě. Tam je také pozoruhodné zvýšení účinnosti, když fenyl je nahrazen naftyl jako centrální jádro. Toto zvýšení je významně vyšší u asymetrické struktury než u symetrické struktury.[50][54] V asymetrických strukturách je rozdíl v účinnosti mezi fenyl-alkyn inhibitory prokazuje důležitost polohy lipofilnosti. Centrálněji umístěný alkyn, který je méně lipofilní spojkou než fenyl, zlepšuje účinnost.[4][5][50]

Účinek strukturálních změn v centrálním jádru (představovaném jako X) a symetrický benzimidazol -benzimidazolová struktura na inhibiční aktivitu[4][50]

Symetrická struktura .png

StrukturaAktivita
XIC50 (nM)Inhibiční aktivita

Chemická struktura one.png

>44Žádný

Chemická struktura two.png

>44Žádný

Chemická struktura three.png

11Velmi slabá

Chemická struktura four.png

1.7Slabý

Chemická struktura pět.png

0.50Mírný

Chemická struktura six.png

3.7Slabý

Chemická struktura seven.png

0.11Mírný

Chemická struktura osm.png

0.20Mírný
Účinek strukturálních změn v centrálním jádru (představovaném jako X) an asymetrické imidazol -benzimidazol struktura na inhibiční aktivitu[4][50]

Symetrická struktura two.png

StrukturaAktivita
XIC50 (nM)Inhibiční aktivita

Chemická struktura nine.png

>44Žádný

Chemická struktura ten.png

0.071Mírný

Chemická struktura elleven.png

2.5Slabý

Chemická struktura dvanáct.png

0.38Mírný

Chemická struktura třináct.png

0.20Mírný

Chemická struktura čtrnáct.png

0.17Mírný

Chemická struktura fifteen.png

0.040Silný
Účinek strukturálních změn v centrálním jádru (představovaném jako X) a symetrický imidazol -biaryl -imidazolová struktura na inhibiční aktivitu[4][50]

Nesymetrická struktura.png

StrukturaAktivita
XIC50 (nM)Inhibiční aktivita
CH20.094Silný
CO0.30Mírný
C (CH3)21.2Slabý

Odpor

Potenciální rezistence vůči HCV proti lékům DAA vzbuzuje obavy.[6] Mezi HCV kvazidruhy existují již existující varianty s potenciálem udělit rezistenci na inhibitory NS5A, aniž by byly dříve vystaveny těmto lékům. Obecně platí, že replikace těchto variant probíhá pouze v nepatrných množstvích, což je činí současnými technikami nedetekovatelnými. Na druhou stranu je možné selektivně pěstovat imunitní varianty v přítomnosti inhibitorů NS5A.[2] Odolnost proti HCV se vyznačuje určitým únikovým vzorem. Tento vzorec je často spojován s aminokyselinovými substitucemi, které viru propůjčují silnou rezistenci na léčivo, aniž by došlo ke zhoršení virové kondice.[2][56] Bylo zjištěno, že inhibitory NS5A mají relativně nízkou prahovou hodnotu pro rezistenci a bylo prokázáno, že varianty, které jsou spojeny s rezistencí na NS5A, vydrží u pacientů po ukončení léčby až šest měsíců.[57] Kombinované terapie proto produkují vyšší účinnost a kratší léčebné období.[7]

Budoucí výzkum a nové generace inhibitorů NS5A

Vývojáři DAA budou v následujících letech čelit předvídatelným výzvám. Terapeutické mezery pro jednotlivce trpící komplikujícími potížemi, jako je chronické onemocnění ledvin a cirhóza bude muset být přemostěna. Kratší terapie s mírnějšími vedlejšími účinky by přinesly větší adherenci a rýsuje se stále přítomné spektrum rezistence na léky. Vysoce adaptivní HCV se vyvinul do řady různých genomů, které je třeba všechny adekvátně léčit, nejlépe pangenotypickými režimy.[58]

Některé z těchto výzev již mají v dohledu možná řešení. Inhibitor proteázy ABT-493 a inhibitor NS5A nové generace ABT-530 jsou považovány za aktivní proti všem genotypům HCV, včetně těžko léčitelného genotypu 3.[42][58] In vitro vykazovala ABT-530 účinnost proti variantám spojeným s rezistencí, které jsou imunní vůči prvním generacím inhibitorů NS5A, včetně ledipasviru, daklatasviru a ombitasvir.[42] Protože tohle kombinace léků má další kvalitu vylučování z jater, slibuje, že pacienti trpící chronickým onemocněním ledvin a HCV by mohli v blízké budoucnosti dostat bezpečnou léčbu bez použití sofosbuviru.[58]

Připravují se nejméně tři kombinace léků pro léčbu HCV v letech 2016–2017: Sofosbuvir v kombinaci s velpatasvir, ABT-493 v kombinaci s ABT-530 a grazoprevir v kombinaci s elbasvir, z nichž velpatasvir, ABT-530 a elbasvir jsou inhibitory NS5A.[7]

Viz také

Reference

  1. ^ Gogela, Neliswa A .; Lin, Ming V .; Wisocky, Jessica L .; Chung, Raymond T. (12. března 2015). „Posílení našeho chápání současných terapií pro virus hepatitidy C (HCV)“. Aktuální zprávy o HIV / AIDS. 12 (1): 68–78. doi:10.1007 / s11904-014-0243-7. PMC  4373591. PMID  25761432.
  2. ^ A b C d E F G h i Pawlotsky, Jean-Michel (srpen 2013). „Inhibitory NS5A při léčbě hepatitidy C“. Journal of Hepatology. 59 (2): 375–382. doi:10.1016 / j.jhep.2013.03.030. PMID  23567084.
  3. ^ Do, Albert; Mittal, Yash; Liapakis, AnnMarie; Cohen, Elizabeth; Chau, Hong; Bertuccio, Claudia; Sapir, Dana; Wright, Jessica; Eggers, Carol; Drozd, Kristine; Ciarleglio, Maria; Deng, Yanhong; Lim, Joseph K .; Jhaveri, Ravi (27. srpna 2015). „Autorizace léčivých přípravků pro sofosbuvir / ledipasvir (Harvoni) pro chronickou infekci HCV v kohortě v reálném světě: nová bariéra v kaskádě péče o HCV“. PLOS ONE. 10 (8): e0135645. doi:10.1371 / journal.pone.0135645. PMC  4552165. PMID  26312999.
  4. ^ A b C d E F G h Tong, Ling; Yu, Wensheng; Coburn, Craig A .; Meinke, Peter T .; Nair, Anilkumar G .; Dwyer, Michael P .; Chen, Lei; Selyutin, Oleg; Rosenblum, Stuart B .; Jiang, Yueheng; Fells, James; Hu, Bin; Zhong, Bin; Soll, Richard M .; Liu, Rong; Agrawal, Sony; Xia, Ellen; Zhai, Ying; Kong, Rong; Ingravallo, Paul; Nomeir, Amin; Asante-Appiah, Ernest; Kozlowski, Joseph A. (červenec 2016). „Alternativní vývoj jádra kolem tetracyklické indolové třídy inhibitorů HCV NS5A“. Dopisy o bioorganické a léčivé chemii. 26 (20): 5132–5137. doi:10.1016 / j.bmcl.2016.07.057. PMID  27634194.
  5. ^ A b C Lemm, J. A .; Leet, J. E.; O'Boyle, D. R .; Romine, J. L .; Huang, X. S .; Schroeder, D. R .; Alberts, J .; Cantone, J. L .; Sun, J.-H .; Nower, P. T .; Martin, S. W .; Serrano-Wu, M. H .; Meanwell, N. A .; Snyder, L. B .; Gao, M. (16. května 2011). „Objev silných inhibitorů viru hepatitidy C NS5A s dimerními strukturami“. Antimikrobiální látky a chemoterapie. 55 (8): 3795–3802. doi:10.1128 / AAC.00146-11. PMC  3147613. PMID  21576451.
  6. ^ A b Fridell, R. A .; Qiu, D .; Wang, C .; Valera, L .; Gao, M. (28. června 2010). „Analýza rezistence inhibitoru NS5A viru hepatitidy C BMS-790052 v systému in vitro replikonu“. Antimikrobiální látky a chemoterapie. 54 (9): 3641–3650. doi:10.1128 / AAC.00556-10. PMC  2935007. PMID  20585111.
  7. ^ A b C Asselah, Tarik; Boyer, Nathalie; Saadoun, David; Martinot-Peignoux, Michele; Marcellin, Patrick (leden 2016). „Přímo působící antivirotika k léčbě infekce virem hepatitidy C: optimalizace současné léčby bez IFN a budoucí perspektivy“. Liver International. 36: 47–57. doi:10.1111 / liv.13027. PMID  26725897.
  8. ^ Halliday, John; Klenerman, Paul; Barnes, Eleanor (9. ledna 2014). „Očkování proti viru hepatitidy C: blížící se úhybnému cíli“. Odborná recenze vakcín. 10 (5): 659–672. doi:10,1586 / erv.11.55. PMC  3112461. PMID  21604986.
  9. ^ Grakoui, A; Wychowski, C; Lin, C; Feinstone, SM; Rice, C M (1. března 1993). „Exprese a identifikace produktů štěpení polyproteinů viru hepatitidy C“. Journal of Virology. 67 (3): 1385–1395. doi:10.1128 / JVI.67.3.1385-1395.1993. ISSN  0022-538X. PMC  237508. PMID  7679746.
  10. ^ Chan, Juliana (květen 2014). „Hepatitida C“. Nemoc za měsíc. 60 (5): 201–212. doi:10.1016 / j.disamonth.2014.04.002. PMID  24863270.
  11. ^ Seeff, Leonard B. (listopad 2002). "Přirozená historie chronické hepatitidy C". Hepatologie. 36 (5): s35 – s46. doi:10.1053 / jhep.2002.36806. PMID  12407575.
  12. ^ Liang, T. Jake; Rehermann, Barbara; Seeff, Leonard B .; Hoofnagle, Jay H. (15. února 2000). „Patogeneze, přírodní historie, léčba a prevence hepatitidy C“. Annals of Internal Medicine. 132 (4): 296–305. doi:10.7326/0003-4819-132-4-200002150-00008. PMID  10681285.
  13. ^ Pybus, O. G .; Barnes, E .; Taggart, R .; Lemey, P .; Markov, P. V .; Rasachak, B .; Syhavong, B .; Phetsouvanah, R .; Sheridan, I .; Humphreys, I. S .; Lu, L .; Newton, P. N .; Klenerman, P. (29. října 2008). „Genetická historie viru hepatitidy C ve východní Asii“. Journal of Virology. 83 (2): 1071–1082. doi:10.1128 / JVI.01501-08. PMC  2612398. PMID  18971279.
  14. ^ Tellinghuisen, T. L .; Foss, K. L .; Treadaway, J. C .; Rice, C. M. (21. listopadu 2007). "Identifikace reziduí požadovaných pro replikaci RNA v doménách II a III proteinu NS5A viru hepatitidy C". Journal of Virology. 82 (3): 1073–1083. doi:10.1128 / JVI.00328-07. PMC  2224455. PMID  18032500.
  15. ^ A b C d E F Reghellin, V .; Donnici, L .; Fenu, S .; Berno, V .; Calabrese, V .; Pagani, M .; Abrignani, S .; Peri, F .; De Francesco, R .; Neddermann, P. (15. září 2014). „Inhibitory NS5A narušují tvorbu komplexu NS5A-fosfatidylinositol 4-kinázy III a způsobují pokles hladin fosfatidylinositol 4-fosfátu a cholesterolu v membránách souvisejících s virem hepatitidy C“. Antimikrobiální látky a chemoterapie. 58 (12): 7128–7140. doi:10.1128 / AAC.03293-14. PMC  4249536. PMID  25224012.
  16. ^ A b C Yamasaki, Lilian HT; Arcuri, Helen A; Jardim, Ana Carolina G; Bittar, Cintia; de Carvalho-Mello, Isabel Maria VG; Rahal, Paula (2012). „Nové poznatky týkající se struktury / funkce HCV-NS5A a indikace genotypových rozdílů“. Virology Journal. 9 (1): 14. doi:10.1186 / 1743-422X-9-14. PMC  3271958. PMID  22239820.
  17. ^ A b C Masaki, T .; Matsunaga, S .; Takahashi, H .; Nakashima, K .; Kimura, Y .; Ito, M .; Matsuda, M .; Murayama, A .; Kato, T .; Hirano, H .; Endo, Y .; Lemon, S. M .; Wakita, T .; Sawasaki, T .; Suzuki, T. (23. dubna 2014). „Zapojení hyperfosforylace viru hepatitidy C NS5A zprostředkované kasein kinázou I - při produkci infekčního viru“. Journal of Virology. 88 (13): 7541–7555. doi:10.1128 / JVI.03170-13. PMC  4054430. PMID  24760886.
  18. ^ A b Ross-Thriepland, D .; Harris, M. (20. listopadu 2013). „Pohledy na složitost a funkčnost fosforylace viru hepatitidy C NS5A“. Journal of Virology. 88 (3): 1421–1432. doi:10.1128 / JVI.03017-13. PMC  3911623. PMID  24257600.
  19. ^ Rice, Charles M .; Marcotrigiano, Joseph; Tellinghuisen, Timothy L. (květen 2005). „Struktura domény vázající zinek základní složky replikázy viru hepatitidy C“. Příroda. 435 (7040): 374–379. doi:10.1038 / nature03580. ISSN  1476-4687. PMC  1440517. PMID  15902263.
  20. ^ Cronin, Ciarán N .; Wells, Peter A .; Hickey, Michael J .; Brodsky, Oleg; Láska, Robert A. (2009-05-01). "Krystalová struktura nové dimerní formy proteinu NS5A domény I z viru hepatitidy C". Journal of Virology. 83 (9): 4395–4403. doi:10.1128 / JVI.02352-08. ISSN  1098-5514. PMC  2668466. PMID  19244328.
  21. ^ Lambert, Sebastian M .; Langley, David R .; Garnett, James A .; Angell, Richard; Hedgethorne, Katy; Meanwell, Nicholas A .; Matthews, Steve J. (01.06.2014). „Krystalová struktura domény NS5A 1 z genotypu 1a odhaluje nové stopy mechanismu účinku dimerních inhibitorů HCV“. Věda o bílkovinách. 23 (6): 723–734. doi:10.1002 / pro.2456. ISSN  1469-896X. PMC  4093949. PMID  24639329.
  22. ^ A b Foster, T. L .; Belyaeva, T .; Stonehouse, N. J.; Pearson, A. R .; Harris, M. (30. června 2010). „Všechny tři domény viru hepatitidy C, nestrukturální protein NS5A, přispívají k vazbě RNA“. Journal of Virology. 84 (18): 9267–9277. doi:10.1128 / JVI.00616-10. PMC  2937630. PMID  20592076.
  23. ^ Fridell, R. A .; Qiu, D .; Valera, L .; Wang, C .; Rose, R.E .; Gao, M. (18. května 2011). "Odlišné funkce NS5A u replikace RNA viru hepatitidy C odhalené studiemi s inhibitorem NS5A BMS-790052". Journal of Virology. 85 (14): 7312–7320. doi:10.1128 / JVI.00253-11. PMC  3126594. PMID  21593143.
  24. ^ A b Ascher, David B .; Wielens, Jerome; Nero, Tracy L .; Doughty, Larissa; Morton, Craig J .; Parker, Michael W. (23. dubna 2014). „Silné inhibitory hepatitidy C se vážou přímo na NS5A a snižují jeho afinitu k RNA“. Vědecké zprávy. 4: 4765. doi:10.1038 / srep04765. PMC  3996483. PMID  24755925.
  25. ^ Beldar, Serap; Manimekalai, Malathy Sony Subramanian; Cho, Nam-Joon; Baek, Kwanghee; Grüber, Gerhard; Yoon, Ho Sup (2018). „Vlastní asociace a konformační variace NS5A domény 1 viru hepatitidy C“. Journal of General Virology. 99 (2): 194–208. doi:10.1099 / jgv.0.001000. PMID  29300159.
  26. ^ Badillo, Aurelie; Receveur-Brechot, Véronique; Sarrazin, Stéphane; Cantrelle, François-Xavier; Delolme, Frédéric; Fogeron, Marie-Laure; Molle, Jennifer; Montserret, Roland; Bockmann, Anja (07.06.2017). "Celkový strukturální model proteinu NS5A z viru hepatitidy C a modulace mutacemi udávajícími odolnost replikace viru na cyklosporin A". Biochemie. 56 (24): 3029–3048. doi:10.1021 / acs.biochem.7b00212. PMID  28535337.
  27. ^ A b Xiong, Wei; Yang, Jie; Wang, Mingzhen; Wang, Hailong; Rao, Zhipeng; Zhong, Cheng; Xin, Xiu; Mo, Lin; Yu, Shujuan; Shen, Chao; Zheng, Congyi; Diamond, M. S. (15. července 2015). „Vinexin β interaguje s virem hepatitidy C NS5A a moduluje jeho hyperfosforylaci za účelem regulace šíření virů“. Journal of Virology. 89 (14): 7385–7400. doi:10.1128 / JVI.00567-15. PMC  4473562. PMID  25972535.
  28. ^ A b Reiss, Simon; Rebhan, Ilka; Backes, Perdita; Romero-Brey, Ines; Erfle, Holger; Matula, Petr; Kaderali, Lars; Poenisch, Marion; Blankenburg, Hagen; Hiet, Marie-Sophie; Longerich, Thomas; Diehl, Sarah; Ramirez, Fidel; Balla, Tamas; Rohr, Karl; Kaul, Artur; Bühler, Sandra; Pepperkok, Rainer; Lengauer, Thomas; Albrecht, Mario; Eils, Roland; Schirmacher, Peter; Lohmann, Volker; Bartenschlager, Ralf (leden 2011). „Nábor a aktivace lipid kinázy virem hepatitidy C NS5A je nezbytný pro integritu oddělení membránové replikace“. Mobilní hostitel a mikrob. 9 (1): 32–45. doi:10.1016 / j.chom.2010.12.002. PMC  3433060. PMID  21238945.
  29. ^ Lim, Y.-S .; Hwang, S. B. (5. února 2011). „Protein NS5A viru hepatitidy C interaguje s fosfatidylinositol 4-kinázou typu III a reguluje šíření virů“. Journal of Biological Chemistry. 286 (13): 11290–11298. doi:10.1074 / jbc.M110.194472. PMC  3064185. PMID  21297162.
  30. ^ A b Ahmed, Marawan; Pal, Abhishek; Houghton, Michael; Barakat, Khaled (3. srpna 2016). „Komplexní výpočetní analýza pro vazebné režimy inhibitorů NS5A viru hepatitidy C: otázka symetrie“. Infekční choroby ACS. 2 (11): 872–881. doi:10.1021 / acsinfecdis.6b00113. PMID  27933783.
  31. ^ A b C d Issur, Moheshwarnath; Götte, Matthias (6. listopadu 2014). „Vzory rezistence spojené s inhibitory HCV NS5A poskytují omezený přehled o vazbě na léky“. Viry. 6 (11): 4227–4241. doi:10,3390 / v6114227. PMC  4246218. PMID  25384189.
  32. ^ Lambert, Sebastian M .; Langley, David R .; Garnett, James A .; Angell, Richard; Hedgethorne, Katy; Meanwell, Nicholas A .; Matthews, Steve J. (červen 2014). „Krystalová struktura domény NS5A 1 z genotypu 1a odhaluje nové stopy mechanismu účinku dimerních inhibitorů HCV“. Věda o bílkovinách. 23 (6): 723–734. doi:10.1002 / pro.2456. PMC  4093949. PMID  24639329.
  33. ^ A b Qiu, D .; Lemm, J. A .; O'Boyle, D. R .; Sun, J.-H .; Nower, P. T .; Nguyen, V .; Hamann, L. G .; Snyder, L. B .; Deon, D. H .; Ruediger, E .; Meanwell, N. A .; Belema, M .; Gao, M .; Fridell, R. A. (27. července 2011). „Účinky inhibitorů NS5A na fosforylaci NS5A, zpracování a lokalizaci polyproteinů“. Journal of General Virology. 92 (11): 2502–2511. doi:10.1099 / vir.0.034801-0. PMID  21795470.
  34. ^ A b Belema, Makonen; Lopez, Omar D .; Bender, John A .; Romine, Jeffrey L .; St. Laurent, Denis R .; Langley, David R .; Lemm, Julie A .; O’Boyle, Donald R .; Sun, Jin-Hua; Wang, Chunfu; Fridell, Robert A .; Meanwell, Nicholas A. (13. března 2014). "Objev a vývoj komplexních inhibitorů replikace viru hepatitidy C NS5A". Journal of Medicinal Chemistry. 57 (5): 1643–1672. doi:10,1021 / jm401793m. PMID  24621191.
  35. ^ A b Guedj, J .; Dahari, H .; Rong, L .; Sansone, N. D .; Nettles, R.E .; Cotler, S. J .; Layden, T. J .; Uprichard, S.L .; Perelson, A. S. (19. února 2013). „Modelování ukazuje, že daklatasvir s inhibitorem NS5A má dva způsoby působení a poskytuje kratší odhad poločasu viru hepatitidy C“. Sborník Národní akademie věd. 110 (10): 3991–3996. doi:10.1073 / pnas.1203110110. PMC  3593898. PMID  23431163.
  36. ^ McGivern, David R .; Masaki, Takahiro; Williford, Sara; Ingravallo, Paul; Feng, Zongdi; Lahser, Frederick; Asante-Appiah, Ernest; Neddermann, Petra; De Francesco, Raffaele; Howe, Anita Y .; Lemon, Stanley M. (srpen 2014). „Kinetické analýzy odhalují silnou a časnou blokádu sestavy viru hepatitidy C inhibitory NS5A“. Gastroenterologie. 147 (2): 453–462.e7. doi:10.1053 / j.gastro.2014.04.021. PMC  4107048. PMID  24768676.
  37. ^ Neufeldt, Christopher J .; Joyce, Michael A .; Van Buuren, Nicholas; Levin, Aviad; Kirkegaard, Karla; Gale Jr., Michael; Tyrrell, D. Lorne J .; Wozniak, Richard W .; Kuhn, Richard J. (10. února 2016). „Membranózní web vyvolaný virem hepatitidy C a související zařízení pro jaderný transport omezují přístup receptorů pro rozpoznávání vzorů na stránky replikace virů“. PLOS patogeny. 12 (2): e1005428. doi:10.1371 / journal.ppat.1005428. PMC  4749181. PMID  26863439.
  38. ^ Berger, Carola; Romero-Brey, Inés; Radujkovic, Danijela; Terreux, Raphael; Zayas, Margarita; Paul, David; Harak, Christian; Hoppe, Simone; Gao, Min; Penin, Francois; Lohmann, Volker; Bartenschlager, Ralf (listopad 2014). „Inhibitory NS5A podobné daklatasviru blokují časnou biogenezi virů hepatitidy C - továrny na membránovou replikaci, nezávislé na RNA replikaci“. Gastroenterologie. 147 (5): 1094–1105.e25. doi:10.1053 / j.gastro.2014.07.019. PMID  25046163.
  39. ^ A b Zhang, Xingquan (leden 2016). „Přímí agenti anti-HCV“. Acta Pharmaceutica Sinica B. 6 (1): 26–31. doi:10.1016 / j.apsb.2015.09.008. PMC  4724659. PMID  26904396.
  40. ^ Fung, A .; Jin, Z .; Dyatkina, N .; Wang, G .; Beigelman, L .; Deval, J. (14. dubna 2014). „Účinnost začlenění a ukončení řetězce určuje inhibiční účinnost 2'-modifikovaných nukleotidových analogů proti polymerázě viru hepatitidy C“. Antimikrobiální látky a chemoterapie. 58 (7): 3636–3645. doi:10.1128 / AAC.02666-14. PMC  4068585. PMID  24733478.
  41. ^ Bruder Costa, Juliana; Dufeu-Duchesne, Tania; Leroy, Vincent; Bertucci, Inga; Bouvier-Alias, Magali; Pouget, Noelle; Brevot-Lutton, Ophelie; Bourliere, Marc; Zoulim, Fabien; Plumas, Joel; Aspord, Caroline; Chemin, Isabelle A (27. června 2016). „Pegylovaný interferon α-2a spouští funkci NK-buněk a specifické reakce T-buněk u pacientů s chronickou infekcí HBV bez sérokonverze HBsAg“. PLOS ONE. 11 (6): e0158297. doi:10.1371 / journal.pone.0158297. PMC  4922676. PMID  27348813.
  42. ^ A b C Poordad, Fred; Landis, Charles S .; Asatryan, Armen; Jackson, Daniel F .; Ng, Teresa I .; Fu, Bo; Lin, Chih-Wei; Yao, Betty; Kort, Jens (srpen 2016). „Vysoká antivirová aktivita inhibitoru NS5A ABT-530 s paritaprevirem / ritonavirem a ribavirinem proti infekci virem hepatitidy C genotypu 3“. Liver International. 36 (8): 1125–1132. doi:10.1111 / liv.13067. PMC  5067610. PMID  26778412.
  43. ^ Gaudieri, Silvana; Rauch, Andri; Pfafferott, Katja; Barnes, Eleanor; Cheng, Wendy; McCaughan, Geoff; Shackel, Nick; Jeffrey, Gary P .; Mollison, Lindsay; Baker, Ross; Furrer, Hansjakob; Günthard, Huldrych F .; Freitas, Elizabeth; Humphreys, Isla; Klenerman, Paul; Mallal, Simon; James, Ian; Roberts, Stuart; Nolan, David; Lucas, Michaela (duben 2009). „Rezistence na léky proti viru hepatitidy C a imunitní adaptace: význam pro novou antivirovou terapii“. Hepatologie. 49 (4): 1069–1082. doi:10,1002 / hep.22773. PMID  19263475.
  44. ^ Archer, Melissa; Steinvoort, Carin; Oderda, Gary. „AKTUALIZACE: Nová kombinace látek s hepatitidou C“ (PDF). Utahské ministerstvo zdravotnictví. Archivovány od originál (PDF) dne 27. prosince 2016. Citováno 8. září 2016.
  45. ^ Blight, K. J. (8. prosince 2000). "Efektivní zahájení replikace HCV RNA v buněčné kultuře". Věda. 290 (5498): 1972–1974. doi:10.1126 / science.290.5498.1972. PMID  11110665.
  46. ^ A b Conte, Immacolata; Giuliano, Claudio; Ercolani, Caterina; Narjes, Frank; Koch, Uwe; Rowley, Michael; Altamura, Sergio; Francesco, Raffaele De; Neddermann, Petra; Migliaccio, Giovanni; Stansfield, Ian (březen 2009). „Syntéza a SAR piperazinyl-N-fenylbenzamidů jako inhibitorů replikace RNA viru hepatitidy C v buněčné kultuře“. Dopisy o bioorganické a léčivé chemii. 19 (6): 1779–1783. doi:10.1016 / j.bmcl.2009.01.066. PMID  19216075.
  47. ^ Lohmann, V. (2. července 1999). „Replikace subgenomových RNA viru hepatitidy C v buněčné linii hepatomu“. Věda. 285 (5424): 110–113. doi:10.1126 / science.285.5424.110. PMID  10390360.
  48. ^ Lohmann, V .; Hoffmann, S .; Herian, U .; Penin, F .; Bartenschlager, R. (1. března 2003). „Virové a buněčné determinanty replikace RNA viru hepatitidy C v buněčné kultuře“. Journal of Virology. 77 (5): 3007–3019. doi:10.1128 / JVI.77.5.3007-3019.2003. PMC  149776. PMID  12584326.
  49. ^ „FDA schvaluje novou léčbu chronických infekcí hepatitidou C genotypu 3“. FDA. 27. července 2015. Citováno 29. září 2016.
  50. ^ A b C d E F G h Link, John O .; Taylor, James G .; Xu, Lianhong; Mitchell, Michael; Guo, Hongyan; Liu, Hongtao; Kato, Darryl; Kirschberg, Thorsten; Sun, Jianyu; Squires, Neil; Parrish, Jay; Keller, Terry; Yang, Zheng-Yu; Yang, Chris; Matles, Mike; Wang, Yujin; Wang, Kelly; Cheng, Guofeng; Tian, ​​Yang; Mogalian, Erik; Mondou, Elsa; Cornpropst, Melanie; Perry, Jason; Desai, Manoj C. (13. března 2014). „Objev ledipasviru (GS-5885): silný perorální inhibitor NS5A pro léčbu infekce virem hepatitidy C jednou denně“. Journal of Medicinal Chemistry. 57 (5): 2033–2046. doi:10,1021 / jm401499g. PMID  24320933.
  51. ^ Keating, Gillian M. (3. dubna 2015). „Ledipasvir / Sofosbuvir: Přehled jeho použití při chronické hepatitidě C“. Drogy. 75 (6): 675–685. doi:10.1007 / s40265-015-0381-2. PMID  25837989. S2CID  31943736.
  52. ^ Nakamoto, Shingo (2014). „Inhibitory NS5A viru hepatitidy C a mutace rezistence na léky“. World Journal of Gastroenterology. 20 (11): 2902–12. doi:10,3748 / wjg.v20.i11.2902. PMC  3961994. PMID  24659881.
  53. ^ Boucle, Sebastien; Tao, Sijia; Amblard, Franck; Stanton, Richard A .; Nettles, James H .; Li, Chengwei; McBrayer, Tamara R .; Whitaker, Tony; Coats, Steven J .; Schinazi, Raymond F. (září 2015). „Návrh, syntéza a hodnocení nových molekul anti-HCV, které dodávají intracelulárně tři vysoce účinné inhibitory NS5A“. Dopisy o bioorganické a léčivé chemii. 25 (17): 3711–3715. doi:10.1016 / j.bmcl.2015.06.031. PMC  4538959. PMID  26099532.
  54. ^ A b Romine, Jeffrey L .; St. Laurent, Denis R .; Leet, John E .; Martin, Scott W .; Serrano-Wu, Michael H .; Yang, Fukang; Gao, Min; O’Boyle, Donald R; Lemm, Julie A .; Sun, Jin-Hua; Nower, Peter T .; Huang, Xiaohua (Stella); Deshpande, Milind S .; Meanwell, Nicholas A .; Snyder, Lawrence B. (10. března 2011). „Inhibitory HCV NS5A: Od iminothiazolidinonů k symetrickým stilbenům“. Dopisy ACS pro léčivou chemii. 2 (3): 224–229. doi:10,1021 / ml 1002647. PMC  4017990. PMID  24900306.
  55. ^ Shi, Junxing; Zhou, Longhu; Amblard, Franck; Bobeck, Drew R .; Zhang, Hongwang; Liu, Peng; Bondada, Lavanya; McBrayer, Tamara R .; Tharnish, Phillip M .; Whitaker, Tony; Coats, Steven J .; Schinazi, Raymond F. (květen 2012). "Syntéza a biologické hodnocení nových silných a selektivních inhibitorů HCV NS5A". Dopisy o bioorganické a léčivé chemii. 22 (10): 3488–3491. doi:10.1016 / j.bmcl.2012.03.089. PMID  22507961.
  56. ^ Strahotin, Cristina Simona; Babich, Michael (2012). „Variabilita hepatitidy C, vzorce rezistence a dopad na léčbu“. Pokroky ve virologii. 2012: 267483. doi:10.1155/2012/267483. PMC  3407602. PMID  22851970.
  57. ^ Owens, Christopher M .; Brasher, Bradley B .; Polemeropoulos, Alex; Rhodin, Michael H. J .; McAllister, Nicole; Wong, Kelly A .; Jones, Christopher T .; Jiang, Lijuan; Lin, Kai; Nebo Yat Sun (říjen 2016). „Profil preklinické a klinické rezistence EDP-239, nového inhibitoru viru hepatitidy C NS5A“. Antimikrobiální látky a chemoterapie. 60 (10): 6216–6226. doi:10.1128 / AAC.00815-16. PMC  5038316. PMID  27503644.
  58. ^ A b C Feld, Jordan J .; Foster, Graham R. (říjen 2016). „Druhá generace přímo působících antivirotik - očekáváme zásadní vylepšení?“. Journal of Hepatology. 65 (1): S130 – S142. doi:10.1016 / j.jhep.2016.07.007. PMID  27641983.