Stálost vůči kyselinám - Acid-fastness

Mycobacterium tuberculosis (obarvený červeně) ve tkáni (modrý).

Stálost vůči kyselinám je fyzická vlastnost jisté bakteriální a eukaryotický buňky, stejně jako některé subcelulární struktury, konkrétně jejich odolnost vůči odbarvování kyselinami během laboratoře barvení postupy.^[1][2] Jakmile jsou tyto organismy obarveny jako součást vzorku, mohou odolávat odbarvovacím postupům na bázi kyselin a / nebo ethanolu, které jsou běžné v mnoha protokolech o barvení, proto název kyselinově rychlé.^[2]

Mechanismy odolnosti vůči kyselinám se u jednotlivých druhů liší, ačkoli nejznámější příklad je v rodu Mycobacterium, který zahrnuje druhy odpovědné za tuberkulózu a malomocenství. Stálost vůči kyselinám Mykobakterie je kvůli vysoké kyselina mykolová obsah jejich buněčné stěny, který je zodpovědný za vzor barvení špatné absorpce následovaný vysokou retencí. Některé bakterie mohou být také částečně kyselé, např Nocardia.

Kyselinovzdorné organismy je obtížné charakterizovat pomocí standardních mikrobiologických technik, ačkoli je lze obarvit pomocí koncentrovaných barviv, zvláště když je proces barvení kombinován s teplem. Některé, jako např Mykobakterie, lze obarvit Gramovo barvení, ale neberou dobře krystalovou violet a vypadají tak světle fialově, což může ještě potenciálně vést k nesprávné grampozitivní identifikaci.^[3]

Nejběžnější barvicí technikou používanou k identifikaci kyselinovzdorných bakterií je Skvrna Ziehl-Neelsen, ve kterých jsou kyselinovzdorné druhy obarveny jasně červeně a jasně vystupují na modrém pozadí. Další metodou je Kinyounova metoda, ve kterém jsou bakterie obarveny jasně červeně a jasně vystupují na zeleném pozadí. Rychle kyselé Mykobakterie lze také zobrazit pomocí fluorescenční mikroskopie pomocí specifických fluorescenčních barviv (barvivo auramin-rhodamin, například).^[4] Vejce parazitické plicní motolice Paragonimus westermani jsou ve skutečnosti zničeny skvrnou, což může bránit diagnostice u pacientů, kteří mají příznaky podobné TBC^{[Citace je zapotřebí ]}.

Některé techniky rychlého barvení kyselinou

• Skvrna Ziehl – ​​Neelsen (klasické a upravené typy bělidel)^[5]
• Kinyounská skvrna
• Pro barvoslepé (nebo na pozadí, kde je detekce červených bakterií obtížná), Victoria modrá lze nahradit carbol fuchsin a kyselina pikrová lze použít jako skvrnu namísto methylenová modř a lze použít zbytek techniky Kinyoun.^[6]
  • Různé techniky barvení bakteriálních spór pomocí Kenyonu, např.
    • Moellerova metoda
    • Dornerova metoda^[7] (odbarvovač kyselého alkoholu) bez Schaeffer – Fulton^[8] modifikace (odbarvit vodou)^[9]
    • Metoda čisticího prostředku používající neiontový Tergitol 7 polyglykol ether povrchově aktivní látky typu NP-7 ^[10]
• Fite skvrna^[11]
  • Fite-Faraco skvrna^[12][13]
  • Skvrna Wade Fite^[14]
• Ellis a Zabrowarny skvrna^[15][16] (bez fenolu / kyseliny karbolové)
• Skvrna Auramin-rhodamin
• Skvrna na Auramin fenol

Pozoruhodné kyselinovzdorné struktury

Velmi málo struktur je kyselinovzdorných; díky tomu je barvení na stálost vůči kyselinám zvláště užitečné při diagnostice. Následují pozoruhodné příklady struktur, které jsou kyselinovzdorné nebo modifikované kyselinovzdorné:

• Všechno mykobakterie - M. tuberculosis, M. leprae, M. smegmatis a atypické Mycobacterium
• Aktinomycety (zejména některé aerobní) s kyselinou mykolovou v buněčné stěně (pozn Streptomyces nemít); nesmí být zaměňována s Actinomyces, což je nekysele rychlý rod aktinomycete
  • Nocardia (slabě kyselinově rychlý; odolává odbarvování se slabšími koncentracemi kyseliny)
  • Rhodococcus
  • Gordonia (aktinomycete)
  • Tsukamurella
  • Dietzia
• Vedoucí spermie
• Bakteriální spory, viz Endospore
• Legionella micdadei
• Určité buněčné inkluze, např.
  • Cytoplazmatická inkluzní tělíska viděná v
    • Neurony ve vrstvě 5 mozkové kůry neuronální ceroidní lipofuscinóza (Battenova choroba ).
  • Jaderná inkluzní tělesa vidět v
    • Otrava olovem
    • Otrava vizmutem.
• Oocysty některých kokcidián paraziti ve stolici, například:
  • Cryptosporidium parvum,^[17]
  • Isospora belli^[18]
  • Cyclospora cayetanensis.^[19]
• Několik dalších parazitů:
  • Sarcocystis
  • Taenia saginata vejce skvrna dobře, ale Taenia solium vejce ne (lze použít k rozlišení)
  • Hydatidové cysty, zejména jejich "háčky"skvrna nepravidelně skvrnou ZN, ale vyzařuje jasně červenou fluorescenci pod zeleným světlem a může pomoci detekci na středně těžkém pozadí nebo s omezenými háčky.^[20]
• Plísňové kvasinkové formy jsou nekonzistentně obarveny Acid-fast barvivem, které je pro houby považováno za barvivo s úzkým spektrem.^[21] Ve studii o kyselé stálosti hub^[22] 60% blastomyces a 47% histoplazmy vykázalo pozitivní cytoplazmatické barvení buněk podobných kvasinkám a Cryptococcus nebo candida se nezbarvily a velmi vzácné barvení bylo pozorováno v endocpórách Coccidioides.

Reference

Příklady online protokolů

• Ziehl-Neelsen protokol (PDF formát).
• Střídat Ellis & Zabrowarny metoda pro barvení AFB.