Zastavení indukovaného buněčného cyklu - Induced cell cycle arrest - Wikipedia

Zastavení indukovaného buněčného cyklu je použití a Chemikálie nebo genetická manipulace uměle zastavit postup skrz buněčný cyklus. Buněčné procesy jako duplikace genomu a buněčné dělení stop.[1] Může to být dočasné nebo trvalé.[1] Je to umělá aktivace přirozeně se vyskytující kontrolní body buněčného cyklu vyvolané exogenními podněty řízenými experimentátorem.

Modelové organismy

Některé indukované zástavy buněčného cyklu se provádějí v oocytech Xenopus (žába)

V kontextu akademického výzkumu se zástava buněčného cyklu obvykle provádí v modelové organismy a buněčné extrakty, jako např Saccharomyces cervisiae (droždí) nebo Xenopus oocyty (žabí vejce).[2][3] Žabí vaječné buněčné extrakty se hojně používají při výzkumu buněčného cyklu, protože jsou relativně velké, dosahují průměru 1 mm, a proto obsahují velké množství bílkovin, což usnadňuje měření jejich hladiny.[4]

Účely

Existuje řada důvodů, proč může výzkumník chtít dočasně nebo trvale zabránit pokroku v buněčném cyklu.

Synchronizace buněčného cyklu

V některých experimentech může výzkumník chtít řídit a synchronizovat čas, kdy skupina buněk postupuje do další fáze buněčného cyklu.[5] Buňky mohou být indukovány k zástavě, jakmile dorazí (v různých časových bodech) v určité fázi, takže když je zástava zrušena (například záchrana progrese buněčného cyklu zavedením jiné chemické látky), všechny buňky obnoví progresi buněčného cyklu v stejný čas. Kromě této metody působí jako vědecká kontrola protože když buňky obnoví buněčný cyklus, lze to použít ke zkoumání nutnost a dostatečnost.

Dalším důvodem, proč je synchronizace důležitá, je kontrola množství DNA obsahu, které se mění v různých částech buněčného cyklu na základě toho, zda došlo k replikaci DNA od posledního kola dokončené mitózy a cytokineze.[6]

Kromě toho synchronizace velkého počtu buněk do stejné fáze umožňuje sběr dostatečně velkých skupin buněk ve stejném cyklu pro použití v jiných testech, jako je například western blot a Sekvenování RNA.[7]

Oprava poškození DNA

Vědci možná zkoumají mechanismy Oprava poškození DNA. Vzhledem k tomu, že některé z níže uvedených mechanismů vyvolání zástavy buněčného cyklu zahrnují poškození DNA, umožňuje to vyšetřovat, jak buňka reaguje na poškození svého genetického materiálu.[8]

Identifikace in vivo funkce bílkovin

Genetické inženýrství buněk se specifickými genové knockouty může také vést k buňkám, které se zastaví v různých fázích buněčného cyklu. Mezi příklady patří:

  • G1: Saccharomyces cerevisiae kvasinky exprimující dominantní mutantní alely CDC28 zatčení v G1, což naznačuje, že CDC28 je nezbytný pro průchod za G1 fáze.[9]
  • S: Schizosaccharomyces pombe (štěpné kvasinky) exprimující teplotně citlivou mutantní formu Delta DNA polymerázy (pol delta ts03) zatčení ve fázi S.[10]
  • G2: Štěpné kvasinky exprimující některé mutantní formy CDC2 nemohl zatknout v G2 v reakci na poškození DNA, což naznačuje, že genový produkt je zahrnut v G2 zatknout.[11]
  • M: A mutantní obrazovka identifikovány začínající kvasinky s mitotickou zástavou CDC16, CDC23, a CDC27 jako klíčové geny, které při mutaci způsobí zástavu mitózy.[12]

G1 fázové zastavení

Fáze buněčného cyklu

G1 fáze je první ze čtyř fází buněčného cyklu a je součástí mezifáze. Zatímco v G1 buňka syntetizuje messenger RNA (mRNA) a proteiny v rámci přípravy na další kroky mezifáze vedoucí k mitóze. V člověku somatické buňky, buněčný cyklus trvá asi 18 hodin a G1 fáze tvoří asi 1/3 té doby.[13] Na druhou stranu, v žábě, mořský ježek, a ovocný let embrya, G.1 fáze je extrémně krátká a místo toho je mírná mezera mezi cytokinezí a S fází.[13]

Alfa faktor

α-faktor je a feromon vylučuje Saccharomyces cervisiae který zadržuje kvasinkové buňky v G1 fáze. Činí tak inhibici enzymu adenylátcykláza.[2] Enzym katalyzuje přeměnu adenosintrifosfát (ATP) do 3 ', 5'-cyklický AMP (cAMP) a pyrofosfát.[14]

Kontaktní inhibice

Kontaktní inhibice je metoda zadržování buněk, když sousední buňky přicházejí do vzájemného kontaktu. Výsledkem je jedna vrstva zadržených buněk zadržených buněk a jedná se o proces, který zejména chybí rakovinné buňky. Podezřelý mechanismus závisí na p27Kip1, a inhibitor cyklin-dependentní kinázy.[15] p27Kip1 v zadržovacích buňkách jsou zvýšené hladiny bílkovin. Tento přirozený proces lze napodobit v laboratoři prostřednictvím nadměrná exprese ze strany 27Kip1, což vede k indukované zástavě buněčného cyklu v G1 fáze.[16]

Mimosin

Mimosin je rostlina aminokyselina u kterého bylo prokázáno, že reverzibilně inhibuje progresi za G1 fáze v některých lidských buňkách, včetně lymfoblastoidní buňky.[5] Navrhovaným mechanismem účinku je železo / zinek chelátor který vyčerpává železo v buňce. To indukuje dvouřetězcové zlomy v DNA a inhibuje replikaci DNA. To může zahrnovat blokování působení železa závislého ribonukleotid reduktáza. Může také inhibovat transkripci serin hydroxymethyltransferáza, který má závislost na zinku.[17]

Sérová deprivace

V buněčné kultuře je sérum růstové médium ve kterém jsou buňky pěstovány a obsahuje virové živiny. Ukázalo se, že použití deprivace séra - částečné nebo úplné odstranění séra a jeho živin - k zastavení a synchronizaci progrese buněčného cyklu v G0 fáze, například v novorozenec savčí astrocyty[18] a lidské předkožka fibroblasty.[19]

Podobným způsobem je hladovění aminokyselin. Při pěstování v médiu bez některých esenciálních aminokyselin, jako je např methionin, některé buňky zatknou na počátku G1 fáze.[5]

Zastavení fáze S.

S fáze následuje G1 fáze přes G1/ S přechod a předchází G.2 fáze v mezifázi a je součástí buněčného cyklu, ve kterém se replikuje DNA. Protože přesná duplikace genomu je zásadní pro úspěšné dělení buněk, procesy, které se vyskytují během S-fáze, jsou přísně regulovány a široce konzervovány. Pre-replikační komplexy shromážděné před S fází jsou převedeny na aktivní replikační vidlice.[20] Řízení této konverze je Cdc7 a S-fáze cyklin-dependentní kinázy, které jsou oba upregulované po G1/ S přechod.[20]

Aphidicolin

Aphidicolin je antibiotikum izolované z houby Cephalosporum aphidicola. Je to reverzibilní inhibitor replikace eukaryotické nukleární DNA který blokuje postup kolem S fáze. Jeho mechanismem je inhibice DNA polymeráza A a D. Strukturální studie zjistila, že se předpokládá, že k tomu dochází vázáním alfa aktivního místa polymerázy a „rotací templátu guaninu“, což brání deoxycytidin trifosfát (dCTP) z vazby.[21] Tento blok fáze S indukuje apoptóza v HeLa buňky.[5]

2,3-DCPE

2 [[3- (2,3-dichlorfenoxy) propyl] amino] ethanol (2,3-DCPE) je a malá molekula která indukuje zastavení fáze S.[22] To bylo prokázáno u rakovinných buněčných linií a snižuje expresi B-buněčného lymfomu - extra velký (Bcl-XL ), antiapoptotický protein, který zabraňuje uvolňování mitochondriálního obsahu cytochrom c.

G2 fázové zastavení

G2 fáze je poslední částí mezifáze a přímo předchází mitóze. Do běžných buněk bude vložen, pouze pokud bude replikace DNA ve fázi S úspěšně dokončena. Je to období rychlého růstu buněk a syntézy bílkovin, během nichž se buňka připravuje na mitózu.

Zničení cyklinové mRNA

Cykliny jsou proteiny, které řídí progresi buněčným cyklem aktivací cyklin-dependentních kináz. Zničení buňky endogenní cyklinová poselská RNA může zastavit extrakty ze žabích vajec mezifáze a zabránit jim ve vstupu do mitózy.[3] Zavedení exogenní cyklinové mRNA je také dostatečné k záchraně progrese buněčného cyklu.[3] Jednou z metod této destrukce je použití antisense oligonukleotidy, kousky RNA, které se vážou na cyklinovou mRNA a zabraňují translaci mRNA na cyklinový protein.[23] To lze skutečně použít ke zničení fázově specifických cyklinů nad rámec G2 - například zničení cyklin D1 mRNA antisense oligonukleotidy brání progresi z G1 fáze do fáze S.[24]

Mitotická zástava

Mitóza je nefázovou součástí buněčný cyklus a generuje dvě dceřiné buňky

Mitóza je závěrečná část buněčného cyklu a sleduje mezifázi. Skládá se ze čtyř fází - profáze, metafáze, anafáze, a telofáze - a zahrnuje kondenzaci chromozomy v jádro, rozpuštění jaderný obal a oddělení sesterské chromatidy podle vlákna vřetena. Jak uzavírá mitóza, vlákna vřetena mizí a jaderná membrána se reformuje kolem každé ze dvou sad chromozomů. Po úspěšné mitóze se buňka fyzicky rozdělí na dvě identické dceřiné buňky v procesu zvaném cytokineze, a tím se uzavírá celé kolo buněčného cyklu. Každá z těchto nových buněk by pak mohla potenciálně znovu vstoupit do G1 fáze a zahájit buněčný cyklus znovu.[25]

Hydroxymočovina

Hydroxymočovina (HU) je a lék s malou molekulou který inhibuje enzym ribonukleotid reduktáza (RNR), zabraňující katalýze přeměny deoxyribonukleotidy (DNT) do ribonukleotidy. Předpokládá se, že existuje tyrosyl volné radikály v rámci RNR, který je deaktivován HU.[6][26] Volné radikály jsou nezbytné pro redukci DNT a jsou místo toho zachycovány HU.[27] Ukázalo se, že HU zastavuje buňky jak v S fázi (zdravé buňky), tak bezprostředně před cytokinezí (mutantní buňky).[26]

Nokodazol

Nokodazol je chemická látka, která interferuje s polymerací mikrotubulů.[28] Buňky ošetřené nocodazolem zastavují pomocí G2 nebo obsah DNA DNA ve fázi M, který lze ověřit průtokovou cytometrií. Z mikroskopie bylo zjištěno, že vstupují do mitózy, ale nemohou vytvářet vřetena nezbytná pro metafázi, protože mikrotubuly nemohou polymerovat.[29] Výzkum mechanismu naznačil, že potenciálně brání tubulinu ve tvorbě jeho alfa / beta heterodimeru.[30]

Taxol

Taxol funguje opačným způsobem než nokodazol, místo toho stabilizuje mikrotubulární polymer a brání jeho demontáži. Způsobuje také zastavení fáze M, protože vřeteno, které má oddělit sesterské chromatidy, se nedokáže rozebrat.[31][32] Působí prostřednictvím specifického vazebného místa na mikrotubulárním polymeru a jako takový nevyžaduje GTP nebo jiné kofaktory k indukci polymerace tubulinu.[33]

Teplota

Ukázalo se, že teplota reguluje progresi buněčného cyklu HeLa. Bylo zjištěno, že mitóza je nejcitlivější částí buněčného cyklu.[34] Mitotická zástava před cytokinézou byla viditelná akumulací buněk v mitóze při teplotách pod normální teplotou mezi 24–31 ° C (75,2–87,8 ° F).[34]

Ověření

Existuje několik metod, které lze použít k ověření, že buňky byly zadrženy ve správné fázi.

Průtoková cytometrie

Průtoková cytometrie je technika měření fyzikálních a chemických charakteristik populace buněk pomocí laserů a laserů fluorofor barviva kovalentně spojená s proteinovými markery.[35] Čím silnější je signál, tím více konkrétního proteinu je přítomno. Barvení s barvivy DNA propidium jodid nebo 4 ', 6'-diamidino-2-fenylindol (DAPI) umožňuje vymezení nebo třídění buněk mezi G1, S nebo G.2/ M fáze.[36]

Imunoblotování

Imunoblotování je detekce specifických proteinů ve vzorku tkáně nebo extraktu. Primární protilátky rozpoznávají a váží daný protein a přidávají se sekundární protilátky, které rozpoznávají primární protilátky. Sekundární protilátka je poté vizualizována barvením nebo imunofluorescence umožňující nepřímou detekci původního cílového proteinu.

K detekci přítomnosti lze provést imunoblotování cykliny, proteiny, které regulují buněčný cyklus.[37] Různé třídy cyklinů jsou regulovány nahoru a dolů v různých částech buněčného cyklu. Měření cyklinů z extraktu ze zadržené buňky může určit, v jaké fázi se buňka nachází. Například vrchol cyklin E protein by označoval G1/ S přechod, a cyklin A vrchol by označoval pozdní G2 fáze, a cyklin B vrchol by znamenal mitózu.[38]

Indikátor buněčného cyklu založený na fluorescenční ubikvitinaci (FUCCI)

FUCCI je systém, který využívá fázově specifické exprese proteinů a jejich buněčného cyklu degradace podle dráha ubikvitin-proteazom. Dva fluorescenční sondy - Cdt1 a Geminin konjugované s fluorescenčními proteiny - umožňují vizualizaci fáze buněčného cyklu, ve které se buňka nachází, v reálném čase.[39]

Reference

  1. ^ A b Li Y, Fan J, Ju D (1. ledna 2019). „15 - Neurotoxicita znepokojující mozkové systémy zaměřené na doručovací systémy“. V Gao H, Gao X (eds.). Systém podávání léků zaměřený na mozek. Akademický tisk. 377–408. doi:10.1016 / B978-0-12-814001-7.00015-9. ISBN  978-0-12-814001-7.
  2. ^ A b Liao H, Thorner J (duben 1980). „Feromonový pářící kvasinkový faktor inhibuje adenylátcyklázu“. Sborník Národní akademie věd Spojených států amerických. 77 (4): 1898–902. Bibcode:1980PNAS ... 77.1898L. doi:10.1073 / pnas.77.4.1898. PMC  348616. PMID  6246513.
  3. ^ A b C Murray AW, Kirschner MW (květen 1989). "Cyklinová syntéza řídí raný embryonální buněčný cyklus". Příroda. 339 (6222): 275–80. Bibcode:1989 Natur.339..275M. doi:10.1038 / 339275a0. PMID  2566917. S2CID  4352582.
  4. ^ Lodish H, Berk A, Zipursky SL a kol. (2000). „Oddíl 13.2: Biochemické studie s oocyty, vejci a časnými embryi“. Molekulární buněčná biologie (4. vydání). New York: W. H. Freeman. ISBN  0-7167-3136-3.
  5. ^ A b C d Krek W, DeCaprio JA (1995). "Synchronizace buněk". Metody v enzymologii. Elsevier. 254: 114–24. doi:10.1016/0076-6879(95)54009-1. ISBN  978-0-12-182155-5. PMID  8531680.
  6. ^ A b Koç A, Wheeler LJ, Mathews CK, Merrill GF (leden 2004). „Hydroxymočovina zastavuje replikaci DNA mechanismem, který chrání bazální bazální dNTP“. The Journal of Biological Chemistry. 279 (1): 223–30. doi:10,1074 / jbc.M303952200. PMID  14573610.
  7. ^ Purcell M, Kruger A, Tainsky MA (2014-12-15). "Profilování genové exprese replikativní a indukované stárnutí". Buněčný cyklus. 13 (24): 3927–37. doi:10.4161/15384101.2014.973327. PMC  4615143. PMID  25483067.
  8. ^ Singh A, Xu YJ (listopad 2016). "Mechanismy zabíjení buněk hydroxymočoviny". Geny. 7 (11): 99. doi:10,3390 / geny7110099. PMC  5126785. PMID  27869662.
  9. ^ Mendenhall MD, Richardson HE, Reed SI (červen 1988). „Dominantní negativní mutace proteinkinázy, které udělují fenotyp zástavy G1“. Sborník Národní akademie věd Spojených států amerických. 85 (12): 4426–30. Bibcode:1988PNAS ... 85.4426M. doi:10.1073 / pnas.85.12.4426. PMC  280442. PMID  3288995.
  10. ^ Uchiyama M, Galli I, Griffiths DJ, Wang TS (červen 1997). „Nová mutantní alela Schizosaccharomyces pombe rad26 je defektní v monitorování progrese S-fáze, aby se zabránilo předčasné mitóze“. Molekulární a buněčná biologie. 17 (6): 3103–15. doi:10.1128 / MCB.17.6.3103. PMC  232163. PMID  9154809.
  11. ^ al-Khodairy F, Carr AM (duben 1992). "DNA opravní mutanti definující dráhy kontrolního bodu G2 v Schizosaccharomyces pombe". Časopis EMBO. 11 (4): 1343–50. doi:10.1002 / j.1460-2075.1992.tb05179.x. PMC  556583. PMID  1563350.
  12. ^ Hwang LH, Murray AW (říjen 1997). „Nový kvasinkový screening mutantů pro zástavu mitózy identifikuje DOC1, nový gen zapojený do cyklinové proteolýzy“. Molekulární biologie buňky. 8 (10): 1877–87. doi:10,1091 / mbc.8.10.1877. PMC  25633. PMID  9348530.
  13. ^ A b Morgan DO (2007). Buněčný cyklus: principy řízení. New Science Press. ISBN  978-0-19-920610-0. OCLC  70173205.
  14. ^ Zhang G, Liu Y, Ruoho AE, Hurley JH (březen 1997). "Struktura katalytického jádra adenylylcyklázy". Příroda. 386 (6622): 247–53. Bibcode:1997 Natur.386..247Z. doi:10.1038 / 386247a0. PMID  9069282. S2CID  4329051.
  15. ^ Seluanov A, Hine C, Azpurua J, Feigenson M, Bozzella M, Mao Z a kol. (Listopad 2009). „Přecitlivělost na kontaktní inhibici poskytuje vodítko k rezistenci holých krys na rakovinu“. Sborník Národní akademie věd Spojených států amerických. 106 (46): 19352–7. Bibcode:2009PNAS..10619352S. doi:10.1073 / pnas.0905252106. PMC  2780760. PMID  19858485.
  16. ^ Li J, Yang XK, Yu XX, Ge ML, Wang WL, Zhang J, Hou YD (srpen 2000). "Nadměrná exprese p27 (KIP1) vyvolala zástavu buněčného cyklu ve fázi G (1) a následnou apoptózu v buněčné linii HCC-9204". World Journal of Gastroenterology. 6 (4): 513–521. doi:10,3748 / wjg.v6.i4.513 (neaktivní 2020-09-01). PMC  4723549. PMID  11819639.CS1 maint: DOI neaktivní od září 2020 (odkaz)
  17. ^ "Mimosin". www.drugbank.ca. Citováno 2019-12-13.
  18. ^ Langan TJ, Rodgers KR, Chou RC (2016-11-05). "Synchronizace savčích buněčných kultur pomocí sérové ​​deprivace". Synchronizace buněčného cyklu. Metody v molekulární biologii. 1524. Springer New York. 97–105. doi:10.1007/978-1-4939-6603-5_6. ISBN  978-1-4939-6602-8. PMID  27815898.
  19. ^ Narasimha AM, Kaulich M, Shapiro GS, Choi YJ, Sicinski P, Dowdy SF (červen 2014). „Cyklin D aktivuje supresor nádoru Rb mono-fosforylací“. eLife. 3: e02872. doi:10,7554 / eLife.02872. PMC  4076869. PMID  24876129.
  20. ^ A b Takeda DY, Dutta A (duben 2005). "Replikace DNA a postup v S fázi". Onkogen. 24 (17): 2827–43. doi:10.1038 / sj.onc.1208616. PMID  15838518.
  21. ^ Baranovskiy AG, Babayeva ND, Suwa Y, Gu J, Pavlov YI, Tahirov TH (prosinec 2014). "Strukturální základ pro inhibici replikace DNA aphidicolinem". Výzkum nukleových kyselin. 42 (22): 14013–21. doi:10.1093 / nar / gku1209. PMC  4267640. PMID  25429975.
  22. ^ Zhu H, Zhang L, Wu S, Teraishi F, Davis JJ, Jacob D, Fang B (červen 2004). „Indukce zástavy S-fáze a nadměrná exprese p21 malou molekulou 23- (2,3-dichlorfenoxy) propyl] amino] ethanolu v korelaci s aktivací ERK“. Onkogen. 23 (29): 4984–92. doi:10.1038 / sj.onc.1207645. PMID  15122344.
  23. ^ „Slovník pojmů rakoviny NCI“. Národní onkologický institut. 2011-02-02. Citováno 2019-12-13.
  24. ^ Saikawa Y, Kubota T, Otani Y, Kitajima M, Modlin IM (říjen 2001). „Antisense oligonukleotid Cyclin D1 inhibuje růst buněk stimulovaný epidermálním růstovým faktorem a indukuje apoptózu buněk rakoviny žaludku“. Japonský žurnál výzkumu rakoviny. 92 (10): 1102–9. doi:10.1111 / j.1349-7006.2001.tb01065.x. PMC  5926617. PMID  11676861.
  25. ^ "Mitóza - přehled | ScienceDirect Témata". www.sciencedirect.com. Citováno 2019-12-12.
  26. ^ A b Xu YJ, Singh A, Alter GM (listopad 2016). „Hydroxymočovina vyvolává zástavu cytokineze v buňkách exprimujících mutovanou sterol-14α-demethylázu v biosyntetické cestě ergosterolu“. Genetika. 204 (3): 959–973. doi:10.1534 / genetika.116.191536. PMC  5105871. PMID  27585850.
  27. ^ Platt OS (březen 2008). "Hydroxymočovina pro léčbu srpkovité anémie". The New England Journal of Medicine. 358 (13): 1362–9. doi:10.1056 / NEJMct0708272. PMID  18367739.
  28. ^ Kuhn M (březen 1998). „Mikrotubulové depolymerizující léky nokodazol a kolchicin inhibují absorpci Listeria monocytogenes makrofágy P388D1“. Mikrobiologické dopisy FEMS. 160 (1): 87–90. doi:10.1111 / j.1574-6968.1998.tb12895.x. PMID  9495017.
  29. ^ Kanthou C, Tozer GM (červen 2009). „Mikrotubulová depolymerizující činidla narušující cévy: nová terapeutická činidla pro onkologii a jiné patologické stavy“. International Journal of Experimental Pathology. 90 (3): 284–94. doi:10.1111 / j.1365-2613.2009.00651.x. PMC  2697551. PMID  19563611.
  30. ^ Xu K, Schwarz PM, Ludueña RF (únor 2002). "Interakce nocodazolu s tubulinovými izotypy". Výzkum vývoje léčiv. 55 (2): 91–96. doi:10,1002 / ddr.10023. ISSN  0272-4391.
  31. ^ Choi YH, Yoo YH (prosinec 2012). „Zastavení růstu a apoptóza vyvolaná taxolem je spojena s upregulací inhibitoru Cdk, p21WAF1 / CIP1, v lidských buňkách rakoviny prsu“. Zprávy o onkologii. 28 (6): 2163–9. doi:10.3892 / nebo 2012.2060. PMID  23023313.
  32. ^ Ikui AE, Yang CP, Matsumoto T, Horwitz SB (říjen 2005). „Nízké koncentrace taxolu způsobují mitotické zpoždění následované předčasnou disociací p55CDC od Mad2 a BubR1 a zrušením kontrolního bodu vřetena, což vede k aneuploidii“. Buněčný cyklus. 4 (10): 1385–8. doi:10,4161 / cc.4.10.2061. PMID  16138009.
  33. ^ Horwitz SB (1994). "Taxol (paclitaxel): mechanismy účinku". Annals of Oncology. 5 (Suppl 6): S3-6. PMID  7865431.
  34. ^ A b Rao PN, Engelberg J (květen 1965). "On Los Angeles Buňky: Vliv teploty na životní cyklus ". Věda. 148 (3673): 1092–4. Bibcode:1965Sci ... 148.1092R. doi:10.1126 / science.148.3673.1092. PMID  14289609. S2CID  27085343.
  35. ^ Picot J, Guerin CL, Le Van Kim C, Boulanger CM (březen 2012). „Flow cytometry: retrospective, fundamentals and recent instrumentation“. Cytotechnologie. 64 (2): 109–30. doi:10.1007 / s10616-011-9415-0. PMC  3279584. PMID  22271369.
  36. ^ Pozarowski P, Darzynkiewicz Z (01.07.2004). "Analýza buněčného cyklu průtokovou cytometrií". Kontroly kontrolního bodu a rakovina. Metody v molekulární biologii. 281. Humana Press. str. 301–11. doi:10.1385/1-59259-811-0:301. ISBN  978-1-59259-811-3. PMID  15220539.
  37. ^ Jenkins CW, Xiong Y (1996). "Imunoprecipitace a imunoblotování ve studiích buněčného cyklu". Buněčný cyklus - materiály a metody. Springer Berlin Heidelberg. 250–263. doi:10.1007/978-3-642-57783-3_22. ISBN  978-3-540-58066-9.
  38. ^ "Cyclin - přehled | Témata ScienceDirect". www.sciencedirect.com. Citováno 2019-12-12.
  39. ^ „Indikátor buněčného cyklu založený na fluorescenční ubikvitinaci (FUCCI)“. MBL International. Citováno 2019-12-12.

externí odkazy