Elektroblotování - Electroblotting

Schematické znázornění přenosového zásobníku.[1]

Elektroblotování je metoda v molekulární biologie /biochemie /imunogenetika převést bílkoviny nebo nukleové kyseliny na membránu pomocí PVDF nebo nitrocelulóza, po Gelová elektroforéza.[2][3] Protein nebo nukleovou kyselinu lze poté dále analyzovat pomocí sond, jako jsou specifické protilátky, ligandy jako lektiny nebo skvrny. Tuto metodu lze použít se všemi polyakrylamidovými a agarózovými gely. Alternativní technikou pro přenos proteinů z gelu je kapilární blotování.

Rozvoj

Tato technika byla patentována v roce 1989 Williamem J. Littlehalesem pod názvem „Technika elektroblotu pro přenos vzorků z polyakrylamidové elektroforézy nebo podobného gelu na membránu.[1][4]

Postup elektroblotu

Tato technika spoléhá na proud a roztok přenosového pufru k pohonu proteinů nebo nukleových kyselin na membránu. Po elektroforéze je nastaven standardní přenosový systém polosuchého blotování. Stoh je sestaven v následujícím pořadí od katody po anodu: houba | tři listy filtračního papíru namočené v přenosovém pufru | gel | PVDF nebo nitrocelulózová membrána tři listy filtračního papíru namočené v přenosovém pufru | mycí houba. Je nezbytností, aby membrána byla umístěna mezi gelem a kladně nabitou anodou, protože proud a vzorek se budou pohybovat tímto směrem. Jakmile je stoh připraven, umístí se do přenosového systému a po vhodnou dobu se podle použitých materiálů aplikuje proud vhodné velikosti.

Typicky je elektroforetický gel obarven Coomassie Brilliant Blue po přenosu zajistit, aby bylo přeneseno dostatečné množství materiálu. Protože si proteiny mohou během blotování zachovat nebo znovu získat část své struktury, mohou reagovat se specifickými protilátky což vedlo k tomuto termínu imunoblotování. Alternativně mohou proteiny reagovat s ligandy jako lektiny což vedlo k tomuto termínu afinita blot.

Viz také

Reference

  1. ^ A b R C Dubey (2014). Pokročilá biotechnologie. Nakladatelství S. Chand. str. 199–. ISBN  978-81-219-4290-4.
  2. ^ David Sheehan (30. dubna 2013). Fyzikální biochemie: Principy a aplikace. John Wiley & Sons. str. 206–. ISBN  978-1-118-68748-2.
  3. ^ M. P. Bansal (1. ledna 2013). Molekulární biologie a biotechnologie: základní experimentální protokoly. Energetický a zdrojový institut (TERI). str. 141–. ISBN  978-81-7993-379-4.
  4. ^ „Patent USA 4840714“. Archivovány od originál dne 29. 9. 2007. Citováno 2007-05-24.

externí odkazy