Zobrazení kvasinek - Yeast display
Zobrazení kvasinek (nebo kvasnicový povrchový displej) je proteinové inženýrství technika, která používá výraz rekombinantní proteiny zabudovaný do buněčné stěny droždí pro izolaci a inženýrství protilátky.[1]
Rozvoj
Technika zobrazování kvasinek byla poprvé publikována laboratoř profesora K. Dane Wittrupa.[2] Technologie byla prodána Abbott Laboratories v roce 2001.[3]
Jak to funguje
Požadovaný protein je zobrazen jako fúze s proteinem Aga2p na povrchu kvasinek. Protein Aga2p je přirozeně používán kvasinkami ke zprostředkování kontaktů mezi buňkami během páření kvasinkových buněk. Zobrazení proteinu prostřednictvím Aga2p jako takové promítá protein pryč z buněčného povrchu a minimalizuje potenciální interakce s jinými molekulami na buněčné stěně kvasinek. Využití magnetické separace a průtoková cytometrie ve spojení s knihovnou pro zobrazení kvasinek je vysoce efektivní metoda pro izolaci vysoké afinity protein ligandy proti téměř všem receptor přes řízená evoluce.
Výhody a nevýhody
Výhody kvasnicového displeje oproti ostatním in vitro evoluční metody zahrnují eukaryotickou expresi a zpracování, mechanismy kontroly kvality eukaryotické sekreční dráhy, minimální účinky avidity a kvantitativní skrínink knihovny prostřednictvím třídění buněk aktivované fluorescencí (FACS). Kvasinky jsou eukaryotické organismy, které umožňují složité posttranslační modifikace proteinů, které nejsou schopny poskytnout žádné jiné knihovny.
Nevýhody zahrnují menší velikosti mutantní knihovny ve srovnání s alternativními metodami a diferenciální glykosylace v kvasinkách ve srovnání s buňkami savců. Tyto nevýhody neomezovaly úspěch kvasinkového displeje pro řadu aplikací, včetně inženýrství nejvyšší monovalentní vazebné afinity k ligandu, která byla doposud hlášena pro upravený protein (Boder, E.T. 2000). V současné době již není dostupná knihovna pro zobrazení kvasinek vytvořená společností Boder, protože buněčná linie INVSc1 od společnosti Invitrogen již není k dispozici kvůli problémům s IP.
Alternativní metody pro vývoj bílkovin in vitro jsou savčí displej, fágový displej, ribozomový displej, bakteriální displej, a Zobrazení mRNA.
Reference
- ^ Gai, S Annie; Wittrup, K Dane (2007). "Kvasnicový povrchový displej pro proteinové inženýrství a charakterizaci". Aktuální názor na strukturní biologii. 17 (4): 467–473. doi:10.1016 / j.sbi.2007.08.012. ISSN 0959-440X. PMC 4038029. PMID 17870469.
- ^ Boder, Eric T .; Wittrup, K. Dane (1997). "Displej kvasinek pro screening knihoven kombinatoriálních polypeptidů". Přírodní biotechnologie. 15 (6): 553–557. doi:10.1038 / nbt0697-553. ISSN 1087-0156. PMID 9181578. S2CID 23922281.
- ^ http://www.news.uiuc.edu/NEWS/01/1221biodisplaytechnology.html
Další čtení
- Boder, E. T., Wittrup, K. D.; Biotechnol. Prog., 1998, 14, 55–62.
- Boder E.T., Midelfort K.S., Wittrup K.D .; Proc Natl Acad Sci, 2000, 97 (20): 10701-10705.
- Graff, C.P., Chester, K., Begent, R., Wittrup, K.D .; Prot. Eng. Des. Sel., 2004, 17, 293–304.
- Feldhaus M, Siegel R .; Metody v molekulární biologii 263: 311–332 (2004).
- Weaver-Feldhaus, Jane M; Lou, Jianlong; Coleman, James R; Siegel, Robert W; Marks, James D; Feldhaus, Michael J (2004). "Páření kvasinek pro kombinatorické generování Fab knihovny a povrchové zobrazení". FEBS Dopisy. 564 (1–2): 24–34. doi:10.1016 / S0014-5793 (04) 00309-6. ISSN 0014-5793. PMID 15094038. S2CID 29737912.