Far-western blot - Far-western blot

The far-western blotnebo far-western blot, je molekulárně biologická metoda založená na technice western blot k detekci interakce protein-protein in vitro.[1][2] Zatímco západní skvrna používá sondu protilátky k detekci požadovaného proteinu, far-western blot používá sondu bez protilátky, která může vázat požadovaný protein. Zatímco se tedy Western blot používá k detekci určitých proteinů, používá se k detekci interakcí protein / protein dalekosáhlý blot.

Metoda

V konvenčním Western blotu Gelová elektroforéza se používá k oddělení proteinů od vzorku; tyto proteiny jsou poté přeneseny na membránu v kroku „blotování“. Při westernovém přenosu jsou specifické proteiny identifikovány pomocí protilátka sonda.

Far-western blot využívá neprotilátkové proteiny ke zkoumání požadovaného proteinu (proteinů) na blotu. Tímto způsobem lze identifikovat vazebné partnery sondy (nebo blotovaného) proteinu. Protein sondy se často vyrábí v E-coli pomocí klonování výrazu vektor.

Protein sondy lze poté vizualizovat obvyklými metodami - může být radioaktivně značený; může nést konkrétní afinitní značka jako Jeho nebo VLAJKA pro které existují protilátky; nebo může existovat proteinově specifická protilátka (proti proteinu sondy).

Protože buněčné extrakty jsou obvykle zcela denaturovány varem v detergentu dříve Gelová elektroforéza, tento přístup je nejužitečnější pro detekci interakcí, které nevyžadují nativní skládanou strukturu sledovaného proteinu.

Reference

  1. ^ Hall, Randy A. (2004). „Studium interakcí protein – protein pomocí Blot Overlay nebo Far Western Blot“. Interakce protein-protein. Metody v molekulární biologii. 261. 167–174. CiteSeerX  10.1.1.380.553. doi:10.1385/1-59259-762-9:167. ISBN  978-1-59259-762-8. PMID  15064457.
  2. ^ Machida, Kazuya; Mayer, Bruce J. (2009). "Detekce interakcí protein-protein pomocí Far-Western Blot". Blokování a detekce proteinů. Metody v molekulární biologii. 536. 313–329. doi:10.1007/978-1-59745-542-8_34. ISBN  978-1-934115-73-2. ISSN  1064-3745. PMID  19378071.

externí odkazy