H&E skvrna - H&E stain

Sítnice (část oko ) obarvené hematoxylin a eosin, buněčná jádra obarvená modrofialově a extracelulární materiál obarvený růžově.

Skvrna hematoxylinem a eosinem nebo barvení hematoxylinem a eosinem (často zkráceno jako: H&E skvrna nebo HE skvrna) je jednou z hlavních tkání skvrny použito v histologie.[1][2][3] Je to nejpoužívanější skvrna lékařská diagnóza[1] a je často Zlatý standard.[4] Například když a patolog dívá se na biopsie podezřelého rakovina, histologický řez je pravděpodobně obarvený H&E.

H&E je kombinace dvou histologických skvrn: hematoxylin a eosin. Hematoxylin obarví buňku jádra modrá a eosin skvrny na extracelulární matrix a cytoplazma růžová, přičemž ostatní struktury získávají různé odstíny, odstíny a kombinace těchto barev.[5][6] Skvrna ukazuje obecné rozložení a distribuci buněk a poskytuje obecný přehled o struktuře vzorku tkáně.[7]Patolog tedy může snadno rozlišovat mezi jadernou a cytoplazmatickou částí buňky.

Tato kombinace skvrn byla poprvé představena v roce 1876 A. Wissowzským.[8][7]

Použití

Procedura barvení H&E je hlavním barvivem v histologii[3][7][2][5] částečně proto, že to lze udělat rychle,[7] není drahý a barví tkáně takovým způsobem, že značné množství mikroskopická anatomie[9][10] je odhaleno,[7][5][4] a lze je použít k diagnostice široké škály histopatologické podmínky.[8] Výsledky barvení H&E nejsou příliš závislé na použité chemikálii opravit tkáň nebo drobné nesrovnalosti v laboratorním protokolu,[11] a tyto faktory přispívají k jeho rutinnímu použití v histologii.[7]

Barvení H&E neposkytuje vždy dostatečný kontrast k rozlišení všech tkání, buněčných struktur nebo distribuce chemických látek,[9] a v těchto případech se používají konkrétnější skvrny a metody.[10][7]

Způsob aplikace

Hlavní články: Histologie § Příprava vzorků, a Hematoxylin
Stojan podložních sklíček vyjmutých z lázně hematoxylinového barviva.

Existuje mnoho způsobů, jak připravit roztoky (formulace) hematoxylinu používané v postupu H&E,[11][12][6] kromě toho existuje mnoho laboratorní protokoly pro výrobu diapozitivů obarvených H&E,[9] z nichž některé mohou být specifické pro určitou laboratoř.[7] Ačkoli neexistuje standardní postup,[11][9] výsledky podle konvence jsou přiměřeně konzistentní v tom, že buněčná jádra jsou obarvena modře a cytoplazma a extracelulární matrix jsou obarveny růžově.[7] Histologické laboratoře mohou také upravit množství nebo typ barvení pro konkrétního patologa.[7]

Poté, co byly odebrány tkáně (často jako biopsie ) a pevné, jsou obvykle dehydratované a zalité roztaveným materiálem parafinový vosk, výsledný blok je namontován na a mikrotom a nakrájíme na tenké plátky.[6] Plátky se připevní na podložní sklíčka mikroskopu, přičemž se vosk odstraní rozpouštědlem a plátky tkáně připojené ke sklíčkům se rehydratují a jsou připraveny k barvení.[6] Alternativně je nejpoužívanějším barvivem barvivo H&E Mohsova operace ve kterých jsou tkáně obvykle zmrzlé, řezané na a kryostat (mikrotom, který řeže zmrzlou tkáň), zafixovaný v alkoholu a poté obarven.[9]

Metoda barvení H&E zahrnuje aplikaci hematoxylin smíchané s kovovou solí, nebo mořidlo, často následuje opláchnutí ve slabém kyselém roztoku k odstranění přebytečných skvrn (diferenciace), následován bluing mírně zásaditý voda.[13][8][14] Po aplikaci hematoxylinu je tkáň obarvený s eosinem (nejčastěji eosin Y ).[6][8][7]

Výsledek

Hematoxylin hlavně barví jádra z buňky modrá nebo tmavě fialová,[6][15][14] spolu s několika dalšími tkáněmi, jako je keratohyalin granule a kalcifikovaný materiál. Eosin obarví cytoplazma a některé další struktury včetně extracelulární matrix jako kolagen[5][7][14] až v pěti odstínech růžové.[8] The eosinofilní (látky obarvené eosinem)[5] struktury se obvykle skládají z intracelulárních nebo extracelulárních bílkoviny. The Lewy těla a Malloryho těla jsou příklady eosinofilních struktur. Většina cytoplazma je eozinofilní a je vykreslen růžově.[10][15] červené krvinky jsou zabarveny intenzivně červeně.

Režim akce

Ačkoli hematein, an oxidovaný forma hematoxylinu,[5][16][14] je aktivní barvivo (v kombinaci s mořidlem), skvrna se stále označuje jako hematoxylin.[8][13] Hematoxylin v kombinaci s mořidlem (nejčastěji hliníkem kamenec ) je často považován za „podobný“[10] základní, kladně nabitý, nebo kationtový skvrna.[5] Eosin je aniontový (záporně nabité) a kyselé skvrny.[5][10] Barvení jader pomocí hemalum (kombinace hliníkových iontů a hemateinu)[14] je obvykle způsobena vazbou komplexu barvivo-kov na DNA, ale po extrakci DNA lze získat jaderné zabarvení[14] z tkáňových řezů. Mechanismus se liší od mechanického barvení základními (kationtovými) barvivy, jako je thionin nebo toluidinová modř.[10] Barvení bazickými barvivy probíhá pouze z roztoků, které jsou méně kyselé než hemalum, a je mu zabráněno předchozí chemickou nebo enzymatickou extrakcí nukleových kyselin. Existují důkazy, které naznačují, že souřadnicové vazby, podobné těm, které drží pohromadě hliník a hematein, váží komplex hemalu na DNA a na karboxyskupiny proteinů v jaderném systému chromatin.

Struktury nemusí být kyselé ani zásadité, abychom je mohli nazývat bazofilní a eosinofilní; terminologie je založena na afinitě buněčných složek k barvivům. Jiné barvy, např. ve vzorku mohou být žluté a hnědé; jsou způsobeny vnitřními pigmenty, jako jsou melanin. Bazální laminae je třeba obarvit PAS skvrna nebo některé stříbrné skvrny, pokud musí být dobře viditelné. Retikulární vlákna také vyžadují stříbrnou skvrnu. Hydrofobní struktury také mají tendenci zůstat čiré; obvykle jsou bohaté na tuky, např. adipocyty, myelin kolem neuronu axony, a Golgiho aparát membrány.

Příklady H&E obarvených tkání

  • Chrupavka, buněčná jádra (modrofialová), extracelulární materiál (růžová).

  • Duktální karcinom in situ (DCIS) v prsní tkáni, buněčná jádra (modrofialová), extracelulární materiál (růžová).

  • Plicní tkáň převzato z emfyzém trpěliví. Buněčná jádra (modrofialová), červené krvinky (jasně červená), další buněčná těla a extracelulární materiál (růžová) a vzduchové mezery (bílá).

  • Svalová tkáň, buněčná jádra (modrofialová), extracelulární materiál (růžová).

  • Bazocelulární karcinom z kůže, buněčná jádra (modrofialová), extracelulární materiál (růžová).

Reference

  1. ^ A b Titford, M. (2005). "Dlouhá historie hematoxylinu". Biotechnika a histochemie. 80 (2): 73–80. doi:10.1080/10520290500138372. PMID  16195172.
  2. ^ A b Smith C (2006). „Náš dluh vůči dřevinu: historie hematoxylinu“. MLO Med Lab Obs. 38 (5): 18, 20–2. PMID  16761865.
  3. ^ A b Dapson RW, Horobin RW (2009). „Barviva z pohledu dvacátého prvního století“. Biotech Histochem. 84 (4): 135–7. doi:10.1080/10520290902908802. PMID  19384743.
  4. ^ A b Rosai J (2007). „Proč mikroskopie zůstane základním kamenem chirurgické patologie“. Lab Invest. 87 (5): 403–8. doi:10.1038 / labinvest.3700551. PMID  17401434.
  5. ^ A b C d E F G h Chan JK (2014). „Skvělé barvy hematoxylin-eosinového barviva v diagnostické chirurgické patologii“. Int J Surg Pathol. 22 (1): 12–32. doi:10.1177/1066896913517939. PMID  24406626.
  6. ^ A b C d E F Stevens, Alan (1982). „Hematoxyliny“. In Bancroft, John; Stevens, Alan (eds.). Teorie a praxe histologických technik (2. vyd.). Longman Group Limited. p. 109.
  7. ^ A b C d E F G h i j k l Wittekind D (2003). "Tradiční barvení pro rutinní diagnostickou patologii, včetně role kyseliny tříslové. 1. Hodnota a omezení barvení hematoxylin-eosinem". Biotech Histochem. 78 (5): 261–70. doi:10.1080/10520290310001633725. PMID  14989644.
  8. ^ A b C d E F Titford, Michael (2009). „Pokrok ve vývoji mikroskopických technik pro diagnostickou patologii“. Journal of Histotechnology. 32 (1): 9–19. doi:10.1179 / his.2009.32.1.9. ISSN  0147-8885.
  9. ^ A b C d E Larson K, Ho HH, Anumolu PL, Chen TM (2011). „Barvivo tkáně hematoxylinu a eosinu v Mohsově mikrografické chirurgii: recenze“. Dermatol Surg. 37 (8): 1089–99. doi:10.1111 / j.1524-4725.2011.02051.x. PMID  21635628.CS1 maint: více jmen: seznam autorů (odkaz)
  10. ^ A b C d E F Ross, Michael H .; Pawlina, Wojciech (2016). Histologie: text a atlas: s korelovanou buněčnou a molekulární biologií (7. vydání). Wolters Kluwer. 984 s. ISBN  978-1451187427.
  11. ^ A b C Schulte EK (1991). „Standardizace biologických barviv a skvrn: úskalí a možnosti“. Histochemie. 95 (4): 319–28. PMID  1708749.
  12. ^ Llewellyn BD (2009). „Jaderné barvení hematoxylinem kamence“. Biotech Histochem. 84 (4): 159–77. doi:10.1080/10520290903052899. PMID  19579146.
  13. ^ A b Ortiz-Hidalgo C, Pina-Oviedo S (2019). „Hematoxylin: Mesoamerica's Gift to Histopathology. Palo de Campeche (Logwood Tree), Pirates's Most Desired Treasure, and Nenahraditelná tkáňová skvrna“. Int J Surg Pathol. 27 (1): 4–14. doi:10.1177/1066896918787652. PMID  30001639.
  14. ^ A b C d E F Kiernan JA (2018). „Zahrnuje progresivní jaderné barvení hemalem (kamenec hematoxylin) DNA a jaká je povaha komplexu barvivo-chromatin?“. Biotech Histochem. 93 (2): 133–148. doi:10.1080/10520295.2017.1399466. PMID  29320873.
  15. ^ A b Leeson, Thomas S .; Leeson, C. Roland (1981). Histologie (Čtvrté vydání). W. B. Saunders Company. p. 600. ISBN  978-0721657042.
  16. ^ Kahr, Bart; Lovell, Scott; Subramony, Anand (1998). "Průběh těžby dřeva". Chirality. 10 (1–2): 66–77. doi:10.1002 / chir.12.

Další čtení

  • Kiernan JA (2008) Histologické a histochemické metody: teorie a praxe. 4. vyd. Bloxham, Velká Británie: Scion.
  • Lillie RD, Pizzolato P, Donaldson PT (1976) Jaderné skvrny rozpustnými metachromovými mořidlovými barvivy. Účinek chemických reakcí blokujících endgroup a umělé zavádění kyselých skupin do tkání. Histochemistry 49: 23–35.
  • Llewellyn BD (2009) Jaderné barvení alum-hematoxylinem. Biotech. Histochem. 84: 159–177.
  • Puchtler H, Meloan SN, Waldrop FS (1986) Aplikace současných chemických konceptů na barvení kovem-hemateinem a -brazileinem. Histochemistry 85: 353–364.

externí odkazy

Protokol