Trichromové barvení - Trichrome staining

„Trichrome“ přeadresuje tady. Pro tři barevné vidění viz trichromacie. Pro album z roku 2002 a stejnojmennou kapelu viz Trichromy. U tříbarevných systémů viz CMY barva, RGB barva, a Barevný model RYB.
Nesmí být zaměňována s Trichome.

Trichromové barvení je histologické barvení metoda, která používá dva nebo více kyselá barviva ve spojení s a polykyselina. Barvení odlišuje tkáně jejich tónováním v kontrastních barvách. Zvyšuje kontrast mikroskopických rysů v buňkách a papírové kapesníky, což jim usnadňuje viditelnost při pohledu přes a mikroskop.

Slovo trichrom znamená „tři barvy“. První protokol barvení, který byl popsán jako „trichrom“, byl Malloryina trichromová skvrna, který se odlišně obarví erytrocyty do červené barvy, svalová tkáň do červené barvy a kolagen do modré barvy. Některé další trichromové barvicí protokoly jsou Massonova trichromová skvrna, Lilliein trichrom a Gömöri trichromová skvrna.

Účel

Bez trichromového zbarvení může být rozlišování jedné funkce od druhé extrémně obtížné. Hladká svalová tkáň je například těžké odlišit od kolagenu. Trichromová skvrna může svalovou tkáň zbarvit červeně a kolagenová vlákna zeleně nebo modře. Biopsie jater může mít mezi jaterními buňkami jemná kolagenová vlákna a množství kolagenu lze odhadnout na základě metody barvení. K odlišení svalu od kolagenu, alfa buněk hypofýzy od beta buněk, fibrinu od kolagenu a mitochondrie mimo jiné v čerstvých zmrazených svalových sekcích. Pomáhá při identifikaci zvýšení kolagenní tkáně (tj. Fibrotických změn), například v jaterní cirhóza a rozlišení nádorů vznikajících ze svalových buněk a fibroblastů.[1]

Postup

Techniky trichromového barvení používají dvě nebo více kyselá barviva. Normálně kyselá barviva by barvila stejné bazické proteiny, ale jejich postupným nanášením lze manipulovat se vzorem barvení. Polykyselina (např kyselina fosfomolybdenová nebo kyselina wolframofosforečná ) se používá k selektivnímu odstranění barviva. Předpokládá se, že polykyseliny se chovají jako barviva s vysokým obsahem molekulární váha: vytlačují snadno odstranitelné barvivo z kolagenu.

Obvykle červené barvivo ve zředěném stavu octová kyselina nejprve se aplikuje na vybarvení všech komponent. Poté se aplikuje polykyselina k odstranění červeného barviva z kolagenu a některých dalších složek vytěsněním. Aplikuje se druhé kyselé barvivo (modré nebo zelené) ve zředěné kyselině octové, které naopak vytěsňuje polykyselinu, což má za následek kolagen zbarvený kontrastní barvou oproti použitému počátečnímu barvivu. Pokud se mají barvit erytrocyty, aplikuje se před barvením červeným barvivem žluté nebo oranžové barvivo s malou molekulovou hmotností. Obvykle se nanáší z nasyceného roztoku v 80% ethanolu a často ve spojení s kyselinou pikrovou (samotnou barvou) a polykyselinou. Metody využívají drobné rozdíly v reakci tkání na barviva, hustotě, přístupnosti atd.

Nazývají se trichromové skvrny, ve kterých se postupně nanášejí barviva a polykyselina vícestupňové trichromy. V „jednokrokových“ metodách jsou všechna barviva - ať už s polykyselinou nebo bez ní - sloučena do jediného roztoku. Jedním z nejstarších jednokrokových přístupů k trichromovému barvení je van Giesonova metoda, která barví svaly a cytoplazma žlutá a kolagenová červená. Další je Gömöri trichromová skvrna, který úzce napodobuje Massonův trichrom. U metod „yellowsolve“ se nejprve aplikuje červené barvivo ve zředěné kyselině octové, poté se část velmi důkladně dehydratuje, aby nezůstala vlhkost. Červené barvivo se potom vytlačí žlutým barvivem v rozpouštědle, jako je cellosolve (2-ethoxy-ethanol). Název žluté řešení je směsicí pojmů žlutá a cellosolve. Phloxin-tartrazin společnosti Lendrum pro buněčné inkluze je jedním příkladem skvrny žluté barvy.

Barviva

Mezi barviva používaná pro barvení trichromem patří:

Červené
Kyselina fuchsinová, xylidin ponceau, chromotrop 2R, Biebrich šarlatový, ponceau 6R, phloxin
Modré a zelené
Světle zelená SF nažloutlá, Rychle zelená FCF, methylová modř, voda modrá
Žlutá
Kyselina pikrová, oranžová G., Martius žlutý, tartrazin, frézování žluté

externí odkazy

Viz také

Poznámky

  1. ^ Lamar Jones, M. „Speciální vzdělávací příručka pro skvrny“. Kapitola 10: Zvládnutí trichromové skvrny. Dako. Citováno 20. května 2011.

Reference

  • Baker JR (1958) Principy biologické mikrotechniky. Londýn: Methuen.
  • Horobin RW (1982) Histochemistry. Stuttgart: Gustav Fischer.
  • Horobin RW (1988) Understanding Histochemistry. Chichester: Ellis Horwood.
  • Kiernan JA (2008) Histologické a histochemické metody, 3. vydání. Bloxham: Scion.
  • Prento P (2009) Barvení makromolekul: možné mechanismy a příklady. Biotech. Histochem. 84: 139-158.
  • Puchtler H, Isler H (1958) Vliv kyseliny fosfomolybdenové na barvivost pojivových tkání různými barvivy. J. Histochem. Cytochem. 6: 265-270.
  • Reid PE, Iagallo M, Nehr S, Jankunis M, Morrow P (1993) Mechanismus technik pojivové tkáně. 1. Vliv koncentrace barviva a doby barvení na postupy aniontového barvení. Histochem. J. 25: 821-829.