Léčba HIV pomocí nukleázy se zinkovým prstem - Zinc finger nuclease treatment of HIV

Vzhledem k tomu, že antiretrovirová terapie vyžaduje celoživotní léčebný režim, vyhledejte trvalejší léčbu HIV infekce právě probíhá.[1] Je možné syntetizovat nukleotidy zinkových prstů se složkami zinkových prstů, které se selektivně (téměř selektivně) váží na konkrétní části DNA. Koncepčně by se cílení a úpravy mohly zaměřit na hostitelské buněčné koreceptory pro HIV nebo na provirovou HIV DNA.

Hostujte buněčné společné receptory pro HIV

Bylo také pozorováno, že 20% kavkazské populace má mutaci tzv CCR5-Δ32 (frekvence 0,0808 pro homozygotní alelu), která brání CCR5 chemokin receptorový protein, který je hlavním prostředkem virového přístupu do buňky, od jeho exprese na povrchu CD4+ T-buňky.[2][3][4][5][6] Jednotlivci, kteří jsou homozygotní pro tuto mutaci, jsou imunní vůči kmenům HIV, které používají receptor CCR5 k přístupu do buňky, zatímco u těch, které jsou pro tuto mutaci heterozygotní, bylo zjištěno, že snižují plazmatickou virovou zátěž a zpomalují progresi AIDS.[7][8] Kombinací těchto faktů vědci navrhli novou metodu léčby HIV. Tato metoda se pokouší léčit infekci narušením genu CCR5, například zavedením CCR5-Δ32 mutace pomocí rekombinantní adenovirový vektor nebo vynucení opravy DNA nehomologickým spojením konců, které je náchylné k chybám a vede k nefunkčnímu genu. V důsledku toho vede k expresi nefunkčních CCR5 koreceptorů na CD4+ T buňky zajišťující imunitu proti infekci.[9][7][10][11]

The nukleázy zinkového prstu které byly syntetizovány pro tuto léčbu, jsou vyráběny kombinací FokI Omezení typu II endonukleázy se zinkovanými prsty.[9][12] Počet zinkových prstů připojených k endonukleáza řídí specificitu ZFN, protože jsou konstruovány tak, aby se přednostně vázaly na specifické sekvence bází v DNA. Každý ZFN je tvořen několika zinkovými prsty a jedním nukleáza enzym.[9]

Provirová HIV DNA

Objevila se nedávná a jedinečná aplikace technologie ZFN k léčbě HIV, jejímž cílem je necílit mutagenezi na hostitelský genom, ale spíše na provirovou HIV DNA.[13] Autoři této práce čerpali inspiraci z vrozeného obranného mechanismu proti bakteriím infikujícím virům zvaným bakteriofágy, přítomným u bakterií vybavených systémy restrikčních modifikací (R-M). Tyto bakterie vylučují restrikční enzym (REase), který rozpoznává a opakovaně štěpí kolem palindromických sekvencí v xenogenních DNA bakteriofágů nebo jednoduše fágů, dokud není deaktivován. Další podpora tohoto přístupu spočívá ve skutečnosti, že lidský genom obsahuje z velké části zbytky retrovirových genomů, které byly inaktivovány několika mechanismy, z nichž některé se podobají působení ZFN. Nemělo by proto být překvapením, že počáteční práce vedoucí k použití technologie ZFN tímto způsobem se točily kolem a zahrnovaly izolaci a testování HIV / SIV zaměřených na REázy odvozené od bakterií, jejichž nespecifičnost (kvůli jejich krátkému rozpoznání sekvence) je bohužel učinil toxickými pro hostitelský genom. Druhá potenciální toxicita hostitelského genomu, kterou představují REázy získané ze surových bakterií, omezila jejich aplikaci na ex-vivo způsoby prevence HIV, zejména syntetické nebo živé mikrobicidy. Následně však byla jedinečná specifičnost nabízená ZFN rychle rozpoznána a využita, což připravilo cestu nové strategii útoku na HIV in-vivo (prostřednictvím cílové mutageneze provirové HIV DNA), který je podobný způsobu, jakým to dělají bakterie vybavené systémy R-M, aby deaktivoval cizí DNA přicházejících fágových genomů. Protože latentní provirová DNA HIV rezidentní v klidových paměťových CD4 buňkách tvoří hlavní bariéru eradikace HIV vysoce aktivní antivirovou terapií (HAART), spekuluje se, že tento přístup může nabídnout „funkční lék“ na HIV. ex-vivo (manipulace s prekurzory kmenových nebo autologních T buněk) a in-vivo prováděcí platformy jsou prozkoumávány. Rovněž se doufá, že při použití u osob neinfikovaných HIV by tato strategie mohla nabídnout genomovou vakcínu proti HIV a dalším virům. Podobné práce probíhají u vysoce rizikových HPV (se záměrem zvrátit cervikální neoplazii) [14] stejně jako s HSV-2 (s cílem dosáhnout úplného vyléčení genitálního oparu) [15][16][17][18][19][20][21][22][23]

Vazba zinkovým prstem

Katalytická doména FokI musí dimerizovat, aby štěpila DNA v cílovém místě, a vyžaduje, aby existovaly dvě sousedící nukleázy se zinkovým prstem (viz obrázek), které se nezávisle vážou na konkrétní kodon ve správné orientaci a vzdálenosti. Výsledkem je, že dvě vazebné události ze dvou nukleáz se zinkovým prstem umožňují specifické cílení DNA.[24] Specifičnost úpravy genomu je důležitá pro úspěšnou aplikaci nukleázy se zinkovým prstem. Důsledek štěpení mimo cíl může vést ke snížení účinnosti modifikace na cíl vedle dalších nežádoucích změn.[24]

Přesné složení ZFN, které mají být použity k léčbě HIV je stále neznámý. Vazba ZFN pro změnu Zif268 Genelink však byl dobře studován a je uveden níže, aby ilustroval mechanismus, kterým se doména ZFN se zinkovým prstem váže na DNA.[25][26]

Aminový konec alfa šroubovice část zinkových prstů cílí na hlavní drážky DNA spirála a váže se poblíž CCR5 genové umístění FokI na vhodném místě pro štěpení DNA.[9][25][26]

Zinkové prsty jsou opakované strukturní proteinové motivy s funkcí rozpoznávání DNA, které zapadají do hlavních rýh DNA.[25] Tři zinkové prsty jsou umístěny v půlkruhovém uspořádání nebo ve tvaru písmene C.[26] Každý zinkový prst je tvořen antiparalelními beta listy a an alfa šroubovice, držené pohromadě iontem zinku a hydrofobními zbytky.[25][26]

Atom zinku je omezen v a čtyřboká konformace prostřednictvím koordinace Cys3, Cys6, His19 a His23 a vzdálenosti vazby zinek-síra 2,30 +/- 0,05 angstromů a vzdáleností vazeb zinek-dusík 2,0 +/- 0,05 Angstromů.[26][27][28]

Každý prst zinku má arginin (arg) aminokyselina vyčnívající z alfa šroubovice, který tvoří vodíkovou vazbu s dusíkem 7 a kyslíkem 6 z guanin (gua), který je umístěn na 3 'konci vazebného místa.[25][26][28] Vazba arg-gua je stabilizována kyselina asparagová ze 2. zbytku, který umístí dlouhý řetězec arginin přes a vodíková vazba solný most interakce.[25][29]

Ve zbytku 3 druhého (tj. Prostředního) zinkového prstu histidin 49 tvoří a vodíková vazba s koplanárem guanin v základním páru 6. Stohování Histidin proti Tymin v základním páru 5 omezuje konformační schopnost Histidin 49 vedoucí ke zvýšené specificitě pro histidin-guanin vodíková vazba.[25][26]

Na 6. zbytku mají prsty 1 a 3 arginin darování dvojice poplatků Vodíkové vazby na dusík 7 a kyslík 6 guaninu na 5 'konci, což zvyšuje sekvenci rozpoznávání místa zinkových prstů.[25][26]

Kontakty s páteří DNA

The histidin koordinován s atomem zinku, který je také sedmým zbytkem v alfa šroubovice zinkových prstů koordinuje zinkový iont prostřednictvím jeho Nε a Vodíkové vazby s fosfodiester kyslík přes Nδ na primárním řetězci DNA.[25][26][29]

Navíc histidin konzervovaný arginin na druhém beta vláknu zinkových prstů přichází do kontaktu s fosfodiester kyslík na Řetězec DNA.[25][26][29]

Taky serin 75 na třetím prstu Vodíkové vazby do fosfát mezi páry bází 7 a 8, jako jediný páteřní kontakt se sekundárním řetězcem DNA.[25][26][29]

Dimerizace a štěpení nukleázy

Bylo zjištěno, že FokI nemá ve svém štěpení žádnou vnitřní specificitu DNA a že doména pro rozpoznávání zinkového prstu uděluje selektivitu k nukleázám se zinkovým prstem.[9][12]

Specifičnost poskytuje dimerizace, což snižuje pravděpodobnost štěpení mimo lokalitu. Každá sada zinkových prstů je specifická pro a nukleotid sekvence na obou stranách cílového genu mezi 5-7 bp nukleáza komponenty.[9]

K výrobě nezbytných je nutná dimerizace dvou ZFN dvouvláknový zlom v rámci CCR5 gen, protože interakce mezi FokI enzym a DNA je slabý.[11] Tento zlom je opraven přirozenými opravnými mechanismy buňky, konkrétně nehomologní spojování konců.[11]

Představujeme mutaci CCR5

Zavedení změn genomu závisí na jednom ze dvou přirozených opravných mechanismů buňky: nehomologní spojování konců (NHEJ) a homologicky řízená oprava (HDR).[11] Opravit NHEJ vzniká ligací konce zlomených pramenů a při výskytu chyby může způsobit malé inzerce a delece. HDR na druhé straně používá k opravě homologní řetězec DNA - a gen využívající tento opravný mechanismus a poskytující požadovanou nukleotidovou sekvenci umožňuje vložení nebo modifikaci genu.[11]

Při absenci sekvence homologní nukleotidové báze, kterou může použít a homologní rekombinace mechanismus je hlavní cestou opravy DSB u savců nehomologní spojování konců (NHEJ).[30] NHEJ, i když je schopen obnovit poškozený gen, je náchylný k chybám.[30] DSB se proto zavádějí do genu, dokud nedojde k chybě v jeho opravě, kdy se již ZFN nemohou vázat a dimerizovat a mutace je kompletní.[30] Chcete-li tento proces urychlit, exonukleázy mohou být zavedeny za účelem trávení konců řetězců generovaných v DSB.[30]

Omezení

Zvýšení počtu zinkových prstů zvyšuje specificitu zvýšením počtu párů bází, na které se může ZFN vázat.[9] Příliš mnoho zinkových prstů však může vést k vazbě mimo cíl, a tím k odštěpení mimo lokalitu.[9] To je způsobeno zvýšenou pravděpodobností vazby zinkových prstů na části genomu mimo sledovaný gen.

Současná léčba ZFN se zaměřuje na CCR5 gen, protože ze změny nevyplývají žádné známé vedlejší účinky CCR5.[31] Existují kmeny HIV, které lze použít CXCR4 vstoupit do hostitelské buňky, obejít CCR5 celkem.[31] Byla použita stejná technologie úpravy genů CXCR4 samostatně a v kombinaci s CCR5 [32][33]

S touto experimentální léčbou existuje několik problémů. Jedním problémem je zajistit, aby požadovaný opravný mechanismus byl ten, který se používá k opravě DSB po přidání genu.[34] Další problém s narušením CCR5 gen je to CXCR4 - specifické nebo duální tropické kmeny jsou stále schopné vstoupit do buňky.[34] Tato metoda může zabránit progresi HIV infekce.

Pro použití ZFN v klinickém prostředí musí být splněna následující kritéria:

i) Vysoká specificita vazby DNA - koreluje s lepším výkonem a menší toxicitou ZFN. Navržené ZFN berou v úvahu poziční a kontextově závislé účinky zinkových prstů pro zvýšení specificity.[35]

ii) Povolit alosterická aktivace z FokI jednou vázán na DNA, aby mohla produkovat pouze požadovaný DSB.[35]

iii) K dodání dvou různých podjednotek zinkových prstů nukleázy a donorové DNA do buňky je třeba zlepšit použité vektory, aby se snížilo riziko mutageneze.[35] Patří mezi ně virové vektory spojené s adeno, lentivirové vektory s nedostatkem integrázy a vektory adenoviru typu 5.[35]

iv) Přechodná exprese ZFN je upřednostňována před trvalou expresí těchto proteinů, aby se zabránilo účinkům mimo cíl.[35]

v) Během genového cílení může genotoxicita spojená s vysokou expresí ZFN vést k buňkám apoptóza a proto je třeba jej důkladně ověřit in vitro a in vivo transformační testy.[35]

Podávání léčby

Buňky, ve kterých jsou indukovány mutace ex vivo jsou odfiltrovány z lymfocyty podle aferéza vyrábět analogicky lentiviral inženýrství CD4+ T-buňky.[36] Ty jsou znovu infundovány do těla v jedné dávce 1 X 1010 gen modifikovaný analogicky CD4+ T-buňky.[36] K dodání ZFN, které indukují požadovanou mutaci do buněk, se používá virový vektor. Podmínky, které tento proces podporují, jsou pečlivě sledovány a zajišťují produkci CCR5 kmen HIV -odolný T buňky.[37]

Berlínský pacient

Hlavní článek: Berlínský pacient

Timothy Ray Brown, který podstoupil v roce 2007 transplantaci kostní dřeně k léčbě leukémie, měl HIV zároveň.[38] Brzy po operaci HIV klesl na nezjistitelné úrovně.[38] To je výsledek kostní dřeň homozygotní dárce pro CCR5-Δ32 mutace.[38] Tato nová mutace poskytla rezistenci HIV u příjemce, což nakonec vedlo k téměř úplnému zmizení částic HIV v jeho těle.[38] Po téměř 2 letech bez antiretrovirové farmakoterapie nebylo možné v žádné z jeho tkání detekovat HIV.[38][39] Ačkoli tato metoda byla účinná při snižování úrovně infekce, rizika spojená s kostní dřeň transplantace převažuje nad její potenciální hodnotou při léčbě HIV.[3]

Reference

  1. ^ Deeks, S. G .; McCune, J. M. (2010). „Lze HIV vyléčit terapií kmenovými buňkami?“. Přírodní biotechnologie. 28 (8): 807–810. doi:10.1038 / nbt0810-807. PMID  20697404.
  2. ^ Alkhatib, G (2009). „Biologie CCR5 a CXCR4“. Aktuální názor na HIV a AIDS. 4 (2): 96–103. doi:10.1097 / coh.0b013e328324bbec. PMC  2718543. PMID  19339947.
  3. ^ A b Hütter, G .; Nowak, D .; Mossner, M .; Ganepola, S .; Müßig, A .; Allers, K .; Thiel, E. (2009). „Dlouhodobá kontrola HIV pomocí transplantace kmenových buněk CCR5 Delta32 / Delta32“. New England Journal of Medicine. 360 (7): 692–698. doi:10.1056 / nejmoa0802905. PMID  19213682.
  4. ^ Carroll, D (2008). „Pokrok a vyhlídky: nukleázy se zinkovým prstem jako látky genové terapie“. Genová terapie. 15 (22): 1463–1468. doi:10.1038 / gt.2008.145. PMC  2747807. PMID  18784746.
  5. ^ Perez, E. E.; Wang, J .; Miller, J. C .; Jouvenot, Y .; Kim, K. A .; Liu, O .; Června, C.H. (2008). „Stanovení rezistence na HIV-1 v CD4 + T buňkách úpravou genomu pomocí nukleáz se zinkovým prstem“. Přírodní biotechnologie. 26 (7): 808–816. doi:10.1038 / nbt1410. PMC  3422503. PMID  18587387.
  6. ^ Chung, J .; Rossi, J. J .; Jung, U. (2011). „Současný pokrok a výzvy v genové terapii HIV“. Budoucí virologie. 6 (11): 1319–1328. doi:10.2217 / fvl.11.113. PMC  3383045. PMID  22754586.
  7. ^ A b Lai, Y. CCR5-cílené přístupy ke genu pro hematopoetické kmenové buňky pro onemocnění HIV: Současný pokrok a vyhlídky do budoucna Současný výzkum a terapie kmenových buněk, 2012; 7 (4), s. 310 - 317.
  8. ^ De Silva, E., Stumpf, Michael P.H. (2004). „HIV a alela odporu CCR5-D32“. Mikrobiologické dopisy FEMS. 241 (1): 1–12. doi:10.1016 / j.femsle.2004.09.040. PMID  15556703.CS1 maint: více jmen: seznam autorů (odkaz)
  9. ^ A b C d E F G h Carroll, D (2011). „Genomové inženýrství s nukleázami se zinkovým prstem“. Genetika. 188 (4): 773–782. doi:10.1534 / genetika.111.131433. PMC  3176093. PMID  21828278.
  10. ^ Durand, Christine. M, Siliciano, Robert F. (2014). „Duální nukleázy se zinkovým prstem blokují infekci HIV“. Krev. 123 (1): 636–646.CS1 maint: více jmen: seznam autorů (odkaz)
  11. ^ A b C d E Urnov, F. D .; Rebar, E. J .; Holmes, M. C .; Zhang, H. S .; Gregory, P. D. (2010). "Úpravy genomu s vytvořenými nukleázami zinkových prstů". Genetika hodnocení přírody. 11 (9): 636–646. doi:10.1038 / nrg2842. PMID  20717154.
  12. ^ A b Urnov, F. D .; Miller, J. C .; Závětří; Beausejour; Rock J. M .; Augustus, S .; Holmes, M. C. (2005). „Vysoce účinná endogenní korekce lidského genu pomocí navržených nukleáz zinkového prstu“. Příroda. 435 (7042): 646–651. Bibcode:2005 Natur.435..646U. doi:10.1038 / nature03556. PMID  15806097.
  13. ^ Wayengera, M. „Provirální HIV-genomové nukleázy a specifické pol-genové nukleázy se zinkovým prstem: použitelnost pro cílenou HIV genovou terapii. Theor Biol Med Model, 2011; 8, str. 26.
  14. ^ Wayengera, M. Zinc finger arrays binding human papilolomavirus types 16 and 18 genomic DNA: precursors of gen-therapeutics for in-situ reversing of associated cervical neoplasia. Theor Biol Med Model, (2011), 9, pp30.
  15. ^ Wayengera, M. Identita nukleáz se zinkovým prstem se specifičností na genomovou DNA viru herpes simplex typu II: nové prekurzory vakcíny / terapie HSV-2. Theor Biol Med Model, (2011), 8, pp23.
  16. ^ Wayengera, M (2003). „HIV a genová terapie: Navrhovaný [R-M enzymatický] model genové terapie proti HIV“. Makerere Med J. 38: 28–30.
  17. ^ Wayengera, M; Kajumbula, H; Byarugaba, W (2007). „Frekvence a mapování místa štěpení genové sekvence HIV-1 / SIVcpz, HIV-2 / SIVsmm a dalšího SIV různými bakteriálními restrikčními enzymy: Prekurzory nového produktu inhibujícího HIV.“. Afr J Biotechnol. 6 (10): 1225–1232.
  18. ^ Wayengera M, Kajumbula H, Byarugaba W: Identifikace restrikční endonukleázy s potenciální schopností štěpit genom HSV-2: inherentní potenciál pro biosyntetiku versus živé mikrobicidy. Theor Biol Med Model. 2008, 5:18.
  19. ^ Wayengera, M (2008). „Preintegrační genové krájení (PRINT-GSX) jako alternativní nebo komplementární modem genové terapie k interferenci RNA“. J Appl Biol Sci. 1 (2): 56–63.
  20. ^ Wayengera M: Přesměrování vstupu a replikace HIV na vaginální komenzální laktobacil exprimující R-M nukleové enzymatické peptidy se silnou aktivitou při štěpení provirové DNA jako nové mikrobicidní strategie pro HIV. Mikrobicid - Nové Dillí, Indie 2008. Abs-10.
  21. ^ Wayengera M: Příprava na 1. fázi Preklinická studie VRX-SMR: Lentivirový vektor transdukovaný restrikčními enzymy štěpícími HIV provirovou DNA jako terapeutickou vakcínu: Příležitosti a výzvy. Vaccine Congress - Amsterdam, Nizozemsko 2007,: 24OR.
  22. ^ Wayengera M: xREPLAB: Rekombinantní kmen lactobacillus produkující restrikční enzymy se silnou aktivitou proti HIV provirující DNA jako živá mikrobicidní strategie. Vakcína proti AIDS - Washington, Seattle 2007,: P05-01.
  23. ^ Wayengera, M (2007). „PREX-1979: Modelováním vůbec prvního prototypu by mohla být 5. generace mikrobicidů pro prevenci infekce HIV u vysoce rizikových žen“. Afr J Biotechnol. 6 (10): 1221–1224.
  24. ^ A b Urnov, F. D., Rebar, E. J., Holmes, M. C., Zhang, H. S. a Gregory, P. D. (2010). "Úpravy genomu pomocí inženýrských nukleáz zinku". Genetika hodnocení přírody. 11 (9): 636–646. doi:10.1038 / nrg2842. PMID  20717154.CS1 maint: více jmen: seznam autorů (odkaz)
  25. ^ A b C d E F G h i j k Pavletich, N. P .; Pabo, C. O. (1991). „Rozpoznání zinkového prstu-DNA: krystalová struktura komplexu Zif268-DNA při 2,1 A.“. Věda. 252 (5007): 809–817. Bibcode:1991Sci ... 252..809P. doi:10.1126 / science.2028256. PMID  2028256.
  26. ^ A b C d E F G h i j k Klug, A (2005). „Objev zinkových prstů a jejich vývoj pro praktické aplikace v genové regulaci“. Proceedings of the Japan Academy, Series B. 81 (4): 87–102. Bibcode:2005PJAB ... 81 ... 87K. doi:10,2183 / pjab.81.87.
  27. ^ Frankel, A. D .; Berg, J. M .; Pabo, C. O. (1987). „Kovově závislé skládání jediného zinkového prstu z transkripčního faktoru IIIA“. Sborník Národní akademie věd. 84 (14): 4841–4845. Bibcode:1987PNAS ... 84.4841F. doi:10.1073 / pnas.84.14.4841. PMC  305201. PMID  3474629.
  28. ^ A b Lee, M. S .; Gippert, G. P .; Soman, K. V .; Case, D. A .; Wright, P. E. (1989). „Trojrozměrná struktura řešení jedné vazebné domény DNA se zinkovým prstem“. Věda. 245 (4918): 635–637. Bibcode:1989Sci ... 245..635L. doi:10.1126 / science.2503871. PMID  2503871.
  29. ^ A b C d Klug, A .; Schwabe, J. W. (1995). "Proteinové motivy 5. Zinkové prsty". FASEB Journal. 9 (8): 597–604. doi:10.1096 / fasebj.9.8.7768350. PMID  7768350.
  30. ^ A b C d Stone, D .; Kiem, H. P .; Jerome, K. R. (2013). „Cílené narušení genů k léčbě HIV“. Curr Opin HIV AIDS. 8 (3): 217–23. doi:10.1097 / COH.0b013e32835f736c. PMC  4226633. PMID  23478911.
  31. ^ A b Coakley, E .; Petropoulos, C.J .; Whitcomb, J.M. (2005). "Posouzení využití ko-receptoru ch vbgemokinu při HIV". Curr. Opin. Infikovat. Dis. 18 (1): 9–15. doi:10.1097/00001432-200502000-00003. PMID  15647694.
  32. ^ Wilen, C.B .; Wang, J .; Tilton, J.C .; et al. (2011). „Inženýrství HIV rezistentních humantních CD4 + T buněk s CXCR4 specifickými nukleázami se zinkovým prstem“. PLoS patogeny. 7 (4): e1002020. doi:10.1371 / journal.ppat.1002020. PMC  3077364. PMID  21533216.
  33. ^ Didigu, C. A.; Wilen, C.B .; Wang, J. (2013). „Simultánní úprava nukleáz zinku a prstu u koreceptorů HIV ccr5 a cxcr4 chrání CD4 + T buňky před infekcí HIV-1“. Krev. 123 (1): 61–69. doi:10.1182 / krev-2013-08-521229. PMC  3879906. PMID  24162716.
  34. ^ A b Barton, K. M .; Burch, B. D .; Soriano-Sarabia, N .; Margolis, D. M. (2013). „Vyhlídky na léčbu latentního HIV“. Klinická farmakologie a terapeutika. 93 (1): 46–56. doi:10.1038 / clpt.2012.202. PMC  3942883. PMID  23212106.
  35. ^ A b C d E F Cathomen, T., & Joung, J. K. .. Nukleázy se zinkovým prstem: objevuje se další generace. Molecular Therapy, (2008) 16 (7), str. 1200–1207.
  36. ^ A b Levine, B.L .; Humeau, L. M .; Boyer, J .; MacGregor, R. R .; Rebello, T .; Lu, X .; June, C. H. (2006). „Přenos genů u lidí pomocí podmíněně se replikujícího lentivirového vektoru“. Sborník Národní akademie věd. 103 (46): 17372–17377. Bibcode:2006PNAS..10317372L. doi:10.1073 / pnas.0608138103. PMC  1635018. PMID  17090675.
  37. ^ Varela-Rohena, A .; Carpenito, C .; Perez, E. E.; Richardson, M .; Parry, R. V .; Milone, M .; Riley, J. L. (2008). "Genetické inženýrství T buněk pro adoptivní imunoterapii". Imunologický výzkum. 42 (1–3): 166–181. doi:10.1007 / s12026-008-8057-6. PMC  2699549. PMID  18841331.
  38. ^ A b C d E Rosenberg, T. „Muž, který měl HIV a nyní nemá“. New York Magazine. Vyvolány leden 2013.
  39. ^ Hütter G, Ganepola S (2011). „Eradikace HIV transplantací hematopoetických kmenových buněk s nedostatkem CCR5“. Vědecký světový deník. 11: 1068–1076. doi:10.1100 / tsw.2011.102. PMC  5720062. PMID  21552772.