Extrahovatelný jaderný antigen - Extractable nuclear antigen

Extrahovatelné jaderné antigeny (ENA) jsou více než 100 různých rozpustných cytoplazmatických a jaderných antigeny. Jsou známé jako „extrahovatelné“, protože je lze z nich odstranit buněčná jádra pomocí fyziologického roztoku a představují šest hlavních proteinů: Ro, La, Sm, RNP, Scl-70, Jo1. Většina ENA je součástí spliceosomy nebo nukleosomy komplexy a jsou druhem malý nukleární ribonukleoprotein (snRNPS). Umístění v jádru a asociace se spliceosomy nebo nukleosomy vede k tomu, že tyto ENA jsou spojeny s další RNA a proteiny, jako jsou polymerázy. Tato kvalita ENA často ztěžuje čištění a kvantifikaci jejich přítomnosti pro klinické použití.[1]

Klinické aplikace

An extrahovatelný panel nukleárního antigenu nebo panel ENA testuje přítomnost autoprotilátek v krvi, které reagují s proteiny v buněčném jádru. Obvykle se provádí v návaznosti na pozitivní antinukleární protilátku (ANA ) test a jeden vykazuje příznaky autoimunitní porucha. ANA testuje přítomnost nebo nepřítomnost autoprotilátek, zatímco panel ENA hodnotí, které proteiny v buněčném jádru autoprotilátky rozpoznávají. Panel ENA pomáhá diagnostikovat, rozlišovat a sledovat progresi autoimunitních onemocnění a provádí se jednoduchým odběrem krve. Zatímco hladiny autoprotilátek mohou během života člověka kolísat, jakmile si vytvoříte autoprotilátky, budete je mít vždy. Autoprotilátky tyto antigeny jsou spojeny s určitými poruchami pojivové tkáně. Ve skutečnosti bylo v 84,3% pozitivních vzorků anti-ENA nalezeno také reagencie ANA.[1] Použití testů autoprotilátek proti ENA může sloužit jako dodatečné ověření autoimunitní poruchy, protože samotný pozitivní test ANA k diagnostice nestačí. Ve skutečnosti lze u zdravých pacientů nalézt nízké hladiny ANA. Aplikace testování anti-ENA se liší od vyloučení skupin pacientů ze specifických skupin, onemocnění pojivové tkáně a sledování aktivity onemocnění. V podstatě umožňuje lékařům vyloučit specifické autoimunitní poruchy, pokud konkrétní autoprotilátka není přítomna, a umožňuje lékařům sledovat progresi onemocnění, pokud se hladiny těchto autoprotilátek zvyšují nebo snižují. K potvrzení přítomnosti anti-ENA se v současné době doporučuje použít dvě nebo více metod k potvrzení anti-ENA, aby se zabránilo falešným pozitivům. Diagnóza autoimunitní onemocnění pojivové tkáně (CTD) se provádí analýzou klinických příznaků a známek, ale také identifikací autoprotilátek namířených proti jaderným antigenům. Dokument z roku 2002 se také snaží porovnat diagnostické testy používané v imunologických laboratořích k měření anti-ENA a způsoby, jak zlepšit toto testování a podávání zpráv. Dvojitá imunodifúze (DID) a kontrimunoelektroforéza (CIEP), dvě formy gelové techniky, se používají k získání informací o klinickém významu a úloze těchto protilátek u pacientů s CTD.[2]

Techniky

Na bázi gelu

Od objevu ENA se používají jako diagnostický nástroj při onemocnění pojivové tkáně. K identifikaci anti-ENA a jejich asociací s chorobami v rané práci byly použity dvě široce používané techniky založené na gelu, dvojitá imunodifúze (DID) [1] a protiimunoelektroforéza (CIEP). Obě tyto techniky vyžadují pro platné výsledky srážení antigenů. V závislosti na zkoumané anit-ENA může být použita jedna technika nad druhou. Například antigen Scl-70 je méně negativně nabitý, což může vést k tomu, že se antigen pohybuje stejným směrem jako protilátka. To by vedlo k tomu, že se komplex protilátka-antigen nevysráží; což vede k neplatným výsledkům.[3] Kromě toho některé anti-SS-B protilátky běžně identifikované v Sjögrenův syndrom nemusí být touto metodou detekovány. Tato metoda je však ekonomicky proveditelná a specifická pro potvrzení diagnózy. Při prohlížení údajů z těchto technik založených na gelu je třeba si uvědomit dvě citlivosti, citlivost testu a citlivost na nemoc. Citlivost testu je schopnost rozpoznat, kdy je přítomna protilátka, zatímco citlivost na onemocnění je schopnost rozpoznat frekvenci výskytu protilátky v nemoci. Kvůli omezení gelových technik citlivosti na onemocnění byly prozkoumány další techniky, aby se zvýšila citlivost testu bez snížení citlivosti na nemoc. Například u pacientů s Systémový lupus erytematózní (SLE), pouze 8–40% má detekovatelnou anti-SM při použití gelových testů. Ukázalo se, že CIEP je citlivější než DID.[4]

Hemaglutinace, ELISA, Western Blot

K identifikaci ENA a jejich propojení se specifickými chorobami lze použít tři další techniky, pasivní hemaglutinaci, enzymový imunosorbentní test (ELISA) a western blot (WB). Pasivní hemaglutinace byl populární na konci 70. let, ale bylo provedeno jen velmi málo studií s jejich použitím a bylo omezeno na protilátky anti-Sm a anti-ribonukleární protein (RNP).[4] Imunosorbentní test spojený s enzymem (ELISA) se stala nejpoužívanější technikou pro testování anti-ENA, protože jsou snadno proveditelné, kvantitativní a mají vysoký objem výstupu. I když tato metoda zvýšila citlivost testu a je účinná pro laboratoře s velkým objemem, mají mnohem nižší specificitu onemocnění než alternativní techniky. To je způsobeno neschopností správně izolovat ENA bez velkých nákladů kvůli jejich asociaci s komplexy v jádru buňky. Další starostí s technikou ELISA je, že u pacientů bez SLE byly hlášeny protilátky anti-Sm, což by vedlo k nadměrnému vyšetřování, ale mohlo by to být kvůli kvalitě použitého zdroje antigenu.[4] Western blot má hlavní nevýhodu v tom, že nelze detekovat protilátky cílené proti konformačním epitopům. Kromě toho může dojít k falešně pozitivní reakci a specificita onemocnění je nižší než u jiných technik. I když každá technika má své výhody a nevýhody, ELISA má nejméně závažné nevýhody potenciálu pro falešně pozitivní výsledky (které jsou méně nebezpečné než falešné negativy) a nákladné.[4]

Mnoho laboratoří používá kombinaci obou těchto technik ke zvýšení efektivity bez obětování specifičnosti. Současným doporučením workshopů o evropském konsensu je screening pozitivních anti-ENA technikou ELISA. Následovat bude konkrétnější test, jako je CIEP, se vzorky, které jsou identifikovány jako pozitivní.[5]

Šest hlavních antigenů používaných v imunologických laboratořích pro detekci je Ro, Los Angeles, Sm, RNP, Scl-70 a Jo1,[6] které jsou prověřovány pomocí Ouchterlony dvojitá imuno difúze techniky a potvrzeno imunoblotování. Na anti-nukleární protilátka testy mají tyto antigeny skvrnitý vzor.[7]

Terminologie

ENA se původně vztahovaly na bílkoviny nacházející se ve fyziologickém roztoku z buněčná jádra.[8] Složky byly od té doby jasněji identifikovány a ve skutečnosti obsahují mnoho cytoplazmatických molekul. Nesprávné pojmenování však zůstalo. Tyto proteiny jsou úzce spojeny s různými molekulami RNA a jsou tak nazývány Ribonukleoproteiny, ale jejich použitá nomenklatura je často zdrojem záměny, Sm, Ro a La byli pojmenováni podle prvních 2 písmen příjmení pacientů, u nichž byli poprvé nalezeni. Dva proteiny spojené s Sjögrenův syndrom byly nezávisle popsány jako antigeny A a B, ale nyní je známo, že jsou identické s Ro, respektive La. tj. SS-A = Ro a SS-B = La.

Panelové testy ENA (extrahovatelný jaderný antigen), test na autoprotilátky proti proteinům v buněčném jádru. Termín „extrahovatelný“ je odvozen od schopnosti odstranit autoprotilátky z jader fyziologickým roztokem a běžnými proteiny. Metoda identifikace těchto vzorků je důvodem, proč jsou také označovány jako Protilátky proti fyziologickým roztokům extrahovaným antigenům.[8]

ENA

Anti-ENA je skupina protilátek, které se často používají k testování smíšené onemocnění pojivové tkáně (MCTD), Sjögrenův syndrom a systémový lupus erythematodes a obvykle se skládá ze šesti testů:[9]

  • anti-Sm (pro SLE)
  • anti-RNP (pro MCTD)
  • anti-La / anti-SS-B (pro Sjögrenovy)
  • anti-Ro / anti-SS-A (pro Sjögrenovy)
  • anti-Scl70 (pro Scleroderma)
  • anti-Jo (pro Dermatomyositis)

Citlivost a specificita těchto testů závisí na typu použitého testu, a bude se tedy v jednotlivých laboratořích lišit. Následující tabulka ilustruje citlivost a specificitu protilátek ENA při detekci SLE technikou ELISA.

Protilátka (testováno pomocí ELISA)Citlivost (%) pro SLESpecificita (%) pro SLE
Anti-Ro (SS-A)6180-93
Anti-La (SS-B)27-3588-97
Anti-Sm34-4588-100
Anti-RNP39-6484-97
Reference pro všechny hodnoty:[10]

Kromě toho bylo použití testování ENA použito také ke studiu poruch souvisejících s pšenicí, jako je celiakie. Studie provedená v roce 2018 vyšetřovala u pacientů s poruchami souvisejícími s pšenicí 10 protilátek proti ENA.

  • SSA (Ro)
  • SSB (La)
  • RNP / Sm
  • Jo-1
  • Sm
  • Scl-70
  • Chromatin
  • Centroméra
  • Histone
  • RNA polymeráza III

73% celiakií pozitivně testovalo antihiston a bylo nejčastější, s čím je obvykle spojena Lékem indukovaný lupus erythematodes. To implikuje vysokou pravděpodobnost autoimunitní poruchy u pacientů s poruchami souvisejícími s pšenicí.[11]

Reference

  1. ^ A b Banhuk, Fernanda Weyand; Pahim, Bruna Corrêa; Jorge, Alex Sandro; Menolli, Rafael Andrade (30. září 2018). „Vztahy mezi protilátkami proti extrahovatelným jaderným antigenům, antinukleárním protilátkám a autoimunitním chorobám v brazilské veřejné nemocnici“. Autoimunitní nemoci. 2018: 1–8. doi:10.1155/2018/9856910. PMC  6186355. PMID  30364021.
  2. ^ Phan, Tri Giang; Wong, Richard C. W .; Adelstein, Stephen (2002). „Autoprotilátky proti extrahovatelným jaderným antigenům: Zvýšení smysluplnosti detekce a interpretace“. Klinická a diagnostická laboratorní imunologie. 9 (1): 1–7. doi:10.1128 / CDLI.9.1.1-7.2002. PMC  119916. PMID  11777822.
  3. ^ Bunn, C .; Kveder, T. (1996). "Counterimmunoelektroforéza a imunodifúze pro detekci protilátek proti rozpustným buněčným antigenům". In van Venrooij, W. J .; Maini, R. N. (eds.). Manuál biologických markerů nemoci. Springer Nizozemsko. s. 25–36. doi:10.1007/978-94-011-1670-1_3. ISBN  978-94-011-1670-1.
  4. ^ A b C d Lock, RJ; Unsworth, DJ (březen 2001). „Protilátky proti extrahovatelným jaderným antigenům. Ovlivnil technologický posun klinickou interpretaci?“. Journal of Clinical Pathology. 54 (3): 187–90. doi:10.1136 / jcp.54.3.187. PMC  1731369. PMID  11253128.
  5. ^ Yiannaki, EE; Tzioufas, AG; Bachmann, M; Hantoumi, J; Tsikaris, V; Sakarellos-Daitsiotis, M; Sakarellos, C; Moutsopoulos, H M (1998). „Hodnota syntetických lineárních epitopových analogů La / SSB pro detekci autoprotilátek proti La / SSB; specificita, citlivost a srovnání metod“. Klinická a experimentální imunologie. 112 (1): 152–158. doi:10.1046 / j.1365-2249.1998.00558.x. PMC  1904932. PMID  9566804.
  6. ^ Prince, HE; Hogrefe, WR (1998). "Vyhodnocení liniového imunoblotového testu pro detekci protilátek rozpoznávajících extrahovatelné jaderné antigeny". Deník klinické laboratorní analýzy. 12 (5): 320–4. doi:10.1002 / (sici) 1098-2825 (1998) 12: 5 <320 :: aid-jcla13> 3.0.co; 2-x. PMC  6807698. PMID  9773966.
  7. ^ "Imunopatologie".
  8. ^ A b „Panel extrahovatelných jaderných protilátek (ENA)“. Laboratorní testy online. 21. června 2018. Archivovány od originál 20. prosince 2018. Citováno 10. dubna 2019.
  9. ^ Produktový list ENA test (QUANTA Lite). inovadx.com. URL: http://www.inovadx.com/Products/di_pdfs/708555/628555rEnglish.pdf ENA[trvalý mrtvý odkaz ]. Datum přístupu: 5. listopadu 2007.
  10. ^ Lock, R; Unsworth, D (2001). „Protilátky proti extrahovatelným jaderným antigenům. Ovlivnil technologický posun klinickou interpretaci?“. Journal of Clinical Pathology. 54 (3): 187–190. doi:10.1136 / jcp.54.3.187. PMC  1731369. PMID  11253128.
  11. ^ Yang, Yuanyuan; Krišna, Karthik; Deshpande, Payal; Ranganathan, Vinodh; Jayaraman, Vasanth; Wang, Tianhao; Bei, Kang; Krishnamurthy, Hari (18. června 2018). „Vysoká frekvence extrahovatelných jaderných autoprotilátek při poruchách souvisejících s pšenicí“. Biomarker Insights. 13. doi:10.1177/1177271918782893. PMC  6024268. PMID  29977112.

externí odkazy