Kolorimetrická analýza - Colorimetric analysis

Kolorimetrická analýza je metoda stanovení koncentrace a chemický prvek nebo chemická sloučenina v řešení pomocí a barevné činidlo. Je použitelný pro oba organické sloučeniny a anorganické sloučeniny a mohou být použity s nebo bez enzymatický etapa. Tato metoda je široce používána v lékařské laboratoře a pro průmyslové účely, např. analýza vzorků vody v souvislosti s průmyslová úprava vody.

Zařízení

Potřebné vybavení je a kolorimetr, někteří kyvety a vhodné barevné činidlo. Proces může být automatizovaný, např. použitím AutoAnalyzer nebo analýza vstřikování toku. V poslední době byly kolorimetrické analýzy vyvinuté pro kolorimetry upraveny pro použití s čtečky desek urychlit analýzu a snížit tok odpadu.[1]

Neenzymatické metody

Příklady

Vápník

Vápník + o-kresolftalein komplexon ----> barevný komplex[2]

Měď

Měď + bathocuproin disulfonát ----> barevný komplex[3]

Kreatinin

Kreatinin + pikrát ----> barevný komplex[4]

Žehlička

Žehlička + bathofenanthrolindisulfonát ---> barevný komplex[5]

Fosfát (anorganický)

Fosfát + molybdenan amonný + kyselina askorbová ----> modře zbarvený komplex[6]

Enzymatické metody

Při enzymatické analýze (která je široce používána v lékařské laboratoře ) barevné reakci předchází reakce katalyzovaný podle enzym. Protože enzym je specifický pro určitý druh Podklad, lze dosáhnout přesnějších výsledků. Enzymatická analýza se vždy provádí v a pufrovací roztok při stanovené teplotě (obvykle 37 ° C), aby se zajistily optimální podmínky pro působení enzymů. Následují příklady.

Příklady

Cholesterol (metoda CHOD-PAP)
  1. Cholesterol + kyslík --(enzym cholesterol oxidáza ) -> cholestenon + peroxid vodíku
  2. Peroxid vodíku + 4-aminofenazon + fenol --(enzym peroxidáza ) -> barevný komplex + voda[7]
Glukóza (metoda GOD-Perid)
  1. Glukóza + kyslík + voda --(enzym glukózooxidáza )--> glukonát + peroxid vodíku
  2. Peroxid vodíku + ABTS --(enzym peroxidáza ) -> barevný komplex[8]

V tomto případě jsou oba stupně reakce katalyzovány enzymy.

Triglyceridy (metoda GPO-PAP)
  1. Triglyceridy + voda - (enzym esteráza )--> glycerol + karboxylová kyselina
  2. Glycerol + ATP --(enzym glycerolkináza )--> glycerol-3-fosfát + ADP
  3. Glycerol-3-fosfát + kyslík - (enzym glycerol-3-fosfát oxidáza ) -> dihydroxyacetonfosfát + peroxid vodíku
  4. Peroxid vodíku + 4-aminofenazon + 4-chlorofenol --(enzym peroxidáza ) -> barevný komplex[9]
Močovina
  1. Močovina + voda - (enzym ureáza )--> uhličitan amonný
  2. Uhličitan amonný + fenol + chlornan ----> barevný komplex[10]

V tomto případě je enzymem katalyzován pouze první stupeň reakce. Druhá fáze je neenzymatická.

Zkratky
  • CHOD = cholesterol oxidáza
  • GOD = glukózooxidáza
  • GPO = glycerol-3-fosfát oxidáza
  • PAP = fenol + aminofenazon (v některých metodách je fenol nahrazen 4-chlorfenol, který je méně toxický)
  • Perid = peroxidáza

Ultrafialové metody

v ultrafialový (UV) metody nedochází k viditelné změně barvy, ale princip je přesně stejný, tj. Měření změny absorbance roztoku. UV metody obvykle měří rozdíl absorbance při vlnové délce 340 nm nikotinamid adenin dinukleotid (NAD) a jeho snížena formulář (NADH).

Příklady

Pyruvát

Pyruvát + NADH - (enzym laktátdehydrogenáza )--> L-laktát + NAD[11]

Viz také

Reference

  1. ^ Greenan, N. S., R.L. Mulvaney a G.K. Simíci. 1995. „Metoda v mikroskopickém měřítku pro kolorimetrické stanovení močoviny v půdních extraktech“. Commun. Půda Sci. Anal. 26:2519-2529.
  2. ^ Ray Sarkar a Chauhan (1967) Anální. Biochem. 20:155
  3. ^ Zak, B. (1958) Clin. Chim. Acta. 3:328
  4. ^ Hawk, Oser a Summerson, Praktická fyziologická chemie, Churchill, London, 1947, str. 839-844
  5. ^ Odkaz k následování
  6. ^ Heidari-Bafroui, Hojat; Ribeiro, Brenno; Charbaji, Amer; Anagnostopoulos, Constantine; Faghri, Mohammad (2020-10-16). „Přenosný infračervený světelný box pro zlepšení detekčních limitů papírových fosfátových zařízení“. Měření: 108607. doi:10.1016 / j. Měření.2020.108607. ISSN  0263-2241.
  7. ^ Odkaz k následování
  8. ^ Rey a Wielinger (1970) Z. analyt. chem. 252: 224
  9. ^ Odkaz k následování
  10. ^ Fawcett a Scott (1960) J. Clin. Pathol. 13:156
  11. ^ Odkaz k následování