Test na niacin - Niacin test

The niacin test byl široce používán od 60. let k identifikaci mykobakterie na úrovni druhů v klinická laboratoř.[1] The test na niacin detekuje niacin (kyselina nikotinová ) v vodný výtažky z kultury. M. tuberculosis kmeny, které mají negativní test na niacinový test, jsou velmi vzácné.[2] Redox reakce probíhající u druhů Mycobacterium produkují niacin jako součást energie metabolismus. I když všechny mykobakterie produkují niacin, M. tuberculosis akumuluje přebytek niacinu kvůli jeho neschopnosti zpracovat niacin, vylučuje přebytek niacinu do kultivačního média, což umožňuje jeho detekci pomocí testu na niacin.[3] Test na niacin se obvykle provádí pouze na pomalu rostoucích, zrnitých, opálených koloniích, protože se jedná o morfologie charakteristika M. tuberculosis na agarový talíř.[4] Vzhledem k jeho cenové dostupnosti ve srovnání s drahými identifikačními metodami, jako je pyrosekvenování nebo MALDI-TOF MS které vyžadují drahé stroje a činidla.[5]

Negativní test na niacin vlevo, pozitivní test na niacin vpravo.

Biochemické procesy

Biochemická cesta

The nikotinamid adenin dinukleotid (NAD +) cesta degradace v systému Windows M. tuberculosis má blokádu, že dráha úklidu vedoucí k nadbytku niacinu, který organismus nedokáže zpracovat.[3] Z tohoto množství M. tuberculosis spolu s Mycobacterium canetti a různé typy Mycobacterium africanum uvolní přebytečný niacin do vnějšího prostředí, v tomto případě na agarovou desku nebo do jiného média. Niacin je rozpustný ve vodě, takže v kultivačním médiu lze testovat přítomnost niacinu, aby se určilo, zda je izolát Mycobacterium jedním ze tří zmíněných druhů.[3] Tyto tři druhy jsou členy Komplex Mycobacterium tuberculosis.

Proces testovacího proužku

Testovací proužek na niacin je obvykle složen z thiokyanát draselný, chloramin-T, kyselina citronová, a Kyselina 4-aminosalicylová.[5] V přítomnosti kyseliny citronové bude reagovat chloramin-T a thiokyanát draselný chlorkyan. Tato chemikálie rozbije pyridin kruh niacinu k výrobě y-karboxyglutakonový aldehyd a připojí se k aromatický amin pro vytvoření žluté barvy.[1]

Mycobacterium smegmatis (negativní pro test na niacin)

Postup zkoušení

Niacinový testovací proužek má podobný vzhled jako a pH testovací proužek. Je malý, tenký, obdélníkový a bílý. Voda se umístí na kultivační destičku a dotýká se testovacím proužkem po dobu 15–20 minut uvnitř malé sterilní zkumavky. Pokud je detekováno nadměrné množství niacinu, kapalina uvnitř zkumavky zežloutne, což je pozitivní test. Pokud je kapalina ve zkumavce čirá, nedochází k nadměrnému množství niacinu a test je negativní.[6] Pozitivní test na niacin nemusí nutně znamenat přítomnost M. tuberculosis protože jiné druhy Mycobacterium mohou pozitivně testovat nadbytek niacinu.[6]

Spolu s každou šarží testovaných vzorků pozitivní kontrola M. tuberculosis a bude zahrnuta negativní kontrola bez organismu. Pokud jsou pozitivní kontrolní testy negativní, došlo pravděpodobně k chybě šarže a rovněž k negativnímu testu s pozitivním výsledkem.[5]

Protože laboratorní vzorky, které jsou určeny kyselě rychlé bacily jsou možná M. tuberculosis, a úroveň biologické bezpečnosti 3 organismu musí být všechny testy na niacin prováděny v a skříň pro biologickou bezpečnost s plným pláštěm, respirátorem, rukavicemi a zapečetěnou laboratoří k zajištění bezpečnosti technolog laboratoře provedení zkoušky. Všechny zkoušky musí být rovněž provedeny s sterilní technika.[2]

Reference

  1. ^ A b Young, W.D .; Maslansky, Alvin; Lefar, Lefar; Kronish, Donald (prosinec 1970). "Vývoj papírového proužkového testu pro detekci niacinu produkovaného mykobakteriemi". Aplikovaná mikrobiologie. 20 (6): 939–945. PMC  377087. PMID  4321713.
  2. ^ A b "Standardní operační postup (SOP): Test na niacin". stoptb.org. Citováno 4. listopadu 2016.
  3. ^ A b C Palomino, Juan; Leão, Sylvia; Ritacco, Viviana, eds. (Červen 2007). Tuberkulóza 2007 (PDF). Archivováno (PDF) z původního dne 25. června 2016. Citováno 2. listopadu 2016.
  4. ^ Acharya, Tankeshwar (22. července 2013). „Klíčové biochemické metody používané k rozlišení skupiny mykobakterií“. mikrobonline. Archivováno z původního dne 4. listopadu 2016. Citováno 4. listopadu 2016.
  5. ^ A b C Gadre; Mahajan; Singh; Agarwal; Talwar (1995). „Niacinový test na mykobakterie: srovnávací studie dvou metod“ (PDF). Indický deník tuberkulózy. 42: 225–226. Archivováno (PDF) z původního dne 4. listopadu 2016. Citováno 4. listopadu 2016.
  6. ^ A b "Niacin Reagent Strip" (PDF). 1. září 2005. Archivováno (PDF) z původního dne 2. listopadu 2016. Citováno 2. listopadu 2016.