Mikroskopie jasného pole - Bright-field microscopy

Příklad jasného pole mikrograf. Tento obrázek ukazuje průřez vaskulární tkáň v stonku rostliny.

Mikroskopie jasného pole je nejjednodušší ze všech optická mikroskopie osvětlení techniky. Osvětlení vzorku je přenášeno (tj. Osvětleno zespodu a pozorováno shora) bílé světlo, a kontrast ve vzorku je způsoben útlum procházejícího světla v hustých oblastech vzorku. Mikroskopie ve světlém poli je nejjednodušší z řady technik používaných pro osvětlení vzorků ve světelných mikroskopech a díky své jednoduchosti je populární technikou. Typickým vzhledem mikroskopického obrazu ve světlém poli je tmavý vzorek na světlém pozadí, odtud název.

Světelná cesta

Hlavní článek: světelný mikroskop

Světelná dráha mikroskopu s jasným polem je extrémně jednoduchá, kromě běžného nastavení světelného mikroskopu nejsou vyžadovány žádné další komponenty. Světelná dráha se tedy skládá z:

Může být použita mikroskopie jasného pole kritický nebo Köhlerovo osvětlení k osvětlení vzorku.

Výkon

Mikroskopie jasného pole má obvykle nízkou hodnotu kontrast s většinou biologických vzorků, protože jen málo z nich absorbuje světlo do značné míry. Barvení je často vyžadováno pro zvýšení kontrastu, což v mnoha situacích brání použití na živých buňkách. Osvětlení jasného pole je užitečné například pro vzorky, které mají vlastní barvu chloroplasty v rostlinných buňkách.

Mikroskopie ve světlém poli je standardní technikou světelné mikroskopie, a proto zvětšení je omezen rozlišovací schopnost možné s vlnová délka z viditelné světlo.

Výhody

  • Jednoduchost nastavení s požadovaným pouze základním vybavením.
  • Živé buňky lze pozorovat pomocí mikroskopů s jasným polem.[1]

Omezení

  • Velmi nízký kontrast většiny biologických vzorků.
  • Praktický limit zvětšení pomocí světelného mikroskopu je přibližně 1300x. Ačkoli jsou možná větší zvětšení, je stále obtížnější udržovat jasnost obrazu, jak se zvětšení zvětšuje.[2]
  • Nízká zjevnost optické rozlišení kvůli rozostření materiálu mimo zaostření.
  • Vzorky, které jsou přirozeně bezbarvé a průhledné, nelze dobře vidět, např. mnoho druhů savčích buněk. Tyto vzorky musí být před prohlížením často obarveny. Vzorky, které mají svou vlastní barvu, lze vidět bez přípravy, např. pozorování cytoplazmatické proudění v Chára buňky.

Vylepšení

  • Snížení nebo zvýšení množství světelného zdroje o irisová clona.
  • Použití objektiv pro ponoření do oleje čočky a speciálního ponorného oleje umístěného na skleněném krytu nad vzorkem. Ponorný olej má totéž lom světla jako sklo a zlepšuje rozlišení pozorovaného vzorku.
  • Použití metod barvení vzorků pro použití v mikrobiologie, jako jsou jednoduché skvrny (methylenová modř, safranin, křišťálově fialová ) a diferenciální skvrny (negativní skvrny, bičíkové skvrny, skvrny endospory).
  • Použití barevné (obvykle modré) nebo polarizační filtr na světelném zdroji pro zvýraznění prvků, které nejsou viditelné pod bílým světlem. Použití filtrů je zvláště užitečné u minerální Vzorky.

Reference

Prostředky knihovny o
Mikroskopie jasného pole
  1. Advanced Light Microscopy vol. 1 Principles and Basic Properties by Maksymilian Pluta, Elsevier (1988)
  2. Advanced Light Microscopy vol. 2 specializované metody od Maksymiliana Pluty, Elsevier (1989)
  3. Úvod do světelné mikroskopie, autor: S. Bradbury, B. Bracegirdle, BIOS Scientific Publishers (1998)
  4. Mikrobiologie: Principy a zkoumání, autor: Jacquelyn G. Black, John Wiley & Sons, Inc. (2005)
  5. Mikroskopie a zobrazovací literatura
Poznámky
  1. ^ Alberts, Bruce; et al. (2002). Molekulární biologie buňky (4. vydání). New York: Garland Science. ISBN  0-8153-3218-1.
  2. ^ "Mikroskopie: typy mikroskopie" (PDF). Hillsborough Community College. Citováno 19. dubna 2017.