Radioimunoanalýza - Radioimmunoassay

Radioimunoanalýza
PletivoD011863

A radioimunoanalýza (RIA) je imunotest který používá radioaktivně značené molekuly v postupné tvorbě imunitní komplexy. RIA je velmi citlivá in vitro technika stanovení používaná k měření koncentrací látek, obvykle měření antigen koncentrace (například hormon úrovně v krev ) pomocí protilátky.

Ačkoli technika RIA je extrémně citlivý a extrémně charakteristický, vyžadující specializované vybavení, zůstává mezi nejméně nákladnými metodami pro provádění těchto měření. Vyžaduje zvláštní opatření a povolení, protože se používají radioaktivní látky.

Naproti tomu an imunoradiometrický test (IRMA) je imunotest, který využívá radioaktivně značené molekuly, ale spíše okamžitým než postupným způsobem.

A radioalergosorbentní test (RAST) je příkladem radioimunoanalýzy. Používá se k detekci původce alergen pro alergie.

Metoda

Klasicky k provedení radioimunoanalýzy, známého množství AN antigen je vyrobeno radioaktivní, často tím, že jej označí gamma-radioaktivním izotopy jódu, jako 125-I, připojený k tyrosin. Tento radioaktivně značený antigen je poté smíchán se známým množstvím protilátka pro tento antigen a ve výsledku se oba specificky vážou k sobě navzájem. Poté vzorek sérum od pacienta obsahujícího neznámé množství stejného antigenu. To způsobí, že neznačený (nebo „studený“) antigen ze séra soutěží s radioaktivně značeným antigenem („horký“) o vazebná místa pro protilátky. Jako koncentrace "studeného" antigenu se zvyšuje, více se váže na protilátku, vytěsňuje radioaktivně značenou variantu a snižuje poměr radioaktivně značeného antigenu vázaného na protilátku k volnému radioaktivně značenému antigenu. Vázané antigeny jsou poté odděleny a radioaktivita volného (nevázaného) antigenu zůstává v supernatant se měří pomocí a gama čítač.[Citace je zapotřebí ]

Tuto metodu lze v zásadě použít pro jakoukoli biologickou molekulu a neomezuje se pouze na sérové ​​antigeny, ani není nutné používat nepřímou metodu měření volného antigenu namísto přímého měření zachyceného antigenu. Například pokud je nežádoucí nebo není možné radioaktivně označit požadovaný antigen nebo cílovou molekulu, lze provést RIA, pokud jsou k dispozici dvě různé protilátky, které rozpoznávají cíl, a cíl je dostatečně velký (např. Protein), aby představoval více epitopy na protilátky. Jedna protilátka by byla radioaktivně značena, jak je uvedeno výše, zatímco druhá by zůstala nemodifikovaná. RIA by začala tím, že by „chladné“ neznačené protilátce bylo umožněno interagovat a vázat se na cílovou molekulu v roztoku. Výhodně je tato neznačená protilátka nějakým způsobem imobilizována, například navázána na agaróza kulička, potažená na povrch atd. Dále je „horké“ radioaktivně značené protilátce umožněno interagovat s prvním komplexem protilátka-cílová molekula. Po rozsáhlém promytí se změří přímé množství navázané radioaktivní protilátky a množství cílové molekuly se kvantifikuje porovnáním s referenčním množstvím testovaným současně. Tato metoda je v zásadě podobná neradioaktivnímu sendviči ELISA metoda.[Citace je zapotřebí ]

Dějiny

Tuto metodu vyvinul Solomon Berson a Rosalyn Sussman Yalow na Nemocnice pro správu veteránů v Bronx, New York[1][2]. Tento revoluční vývoj získal Dr. Yalowa v roce 1977 Nobelovu cenu za medicínu, druhou ženu, která ji kdy získala.[3] Ve svém projevu o přijetí dr. ​​Yalow řekla: „Svět si nemůže dovolit ztrátu talentu poloviny svých lidí, pokud máme vyřešit mnoho problémů, které nás trápí.“[4] Yalow sdílel Nobelovu cenu s Roger Guillemin, a Andrew Schally kteří získali cenu na základě jejich výzkumu „produkce peptidových hormonů v mozku“.[3]

Reference

  1. ^ Berson, Solomon A. a kol. „Metabolismus insulinu-I 131 u lidských subjektů: demonstrace globulinu vázajícího inzulín v oběhu subjektů léčených inzulínem.“ Žurnál klinické studie 35,2 (1956): 170-190.
  2. ^ Berson, Solomon A. a Rosalyn S. Yalow. „Kvantitativní aspekty reakce mezi inzulínem a protilátkou vázající inzulín.“ Věstník klinické studie 38,11 (1959): 1996-2016.
  3. ^ A b „Nobelova cena za fyziologii nebo medicínu 1977“. NobelPrize.org. Citováno 13. října 2020.
  4. ^ Vare, Ethlie Ann; Ptacek, Greg (2002). Patidentně žena: od AZT po televizní večeře: příběhy vynálezkyň a jejich průlomové myšlenky. New York: Wiley. str.99. ISBN  0471023345.

kroky dovnitř radioimunoanalýza technika

externí odkazy