Ouchterlonyho dvojitá imunodifúze - Ouchterlony double immunodiffusion



Ouchterlonyho dvojitá imunodifúze (také známý jako pasivní dvojitý imunodifúze) je imunologická technika používané při detekci, identifikaci a kvantifikace z protilátky a antigeny, jako imunoglobuliny a extrahovatelné jaderné antigeny. Tato technika je pojmenována po Örjan Ouchterlony, švédský lékař, který test vynalezl v roce 1948.
Postup
Vyřízne se gelová destička, která vytvoří řadu otvorů („jamek“) v agar nebo agaróza gel. Zajímavý extrakt vzorku (například lidské buňky odebrané z tkáně mandlí) se umístí do jedné jamky a séra nebo purifikované protilátky se umístí do jiné jamky a destička se nechá 48 hodin vyvíjet. Během této doby antigeny v extraktu vzorku a protilátky difundují z příslušných jamek. Pokud se dvě difúzní fronty setkají, pokud některá z protilátek rozpozná některý z antigenů, naváže se na antigeny a vytvoří imunitní komplex. Imunitní komplex sráží v gelu, čímž vznikne tenká bílá čára (sraženina), což je vizuální podpis rozpoznávání antigenu.[Citace je zapotřebí ]
Metodu lze provádět paralelně s více jamkami naplněnými různými směsmi antigenů a několika jamkami s různými protilátkami nebo směsmi protilátek a reaktivita antigen-protilátka může být pozorována pozorováním mezi kterými jamkami je pozorována sraženina. Pokud se použije více než jedna jamka, existuje mnoho možných výsledků založených na reaktivitě vybraného antigenu a protilátky. Zóna rovnocenných linií může poskytnout úplnou identitu (tj. Souvislou linii), částečnou identitu (tj. Kontinuální linii s podnětem na jednom konci) nebo neidentitu (tj. Dvě linie se zcela protínají).[Citace je zapotřebí ]
Teorie
K srážení dochází u většiny antigenů, protože antigen je multivalentní (tj. Má několik antigenních determinantů na molekulu, na kterou se mohou protilátky vázat). Protilátky mají alespoň dvě vazebná místa pro antigeny (a v případě Imunoglobulin M. tady je multimerní komplex až s 10 vazebnými místy pro antigen), čímž vznikají velké agregáty nebo gelovité mřížky antigenu a protilátky. Experimentálně se ke konstantnímu množství protilátky v roztoku přidává rostoucí množství antigenu. Zpočátku při nízké koncentraci antigenu je veškerá protilátka obsažena v sraženině. Tomu se říká zóna přebytku protilátek (tj. fenomén prozone ). Jak se přidává více antigenu, množství vysráženého proteinu se zvyšuje, dokud molekuly antigenu / protilátky nejsou v optimálním poměru. Toto se nazývá zóna ekvivalence nebo bod ekvivalence. Když množství antigenu v roztoku přesáhne množství protilátky, množství srážení se sníží. Toto je známé jako zóna přebytku antigenu.
Reference
- Bailey, Graham S. (1996). „135: Ouchterlony Double Immunodiffusion“. V Walker, John M. (ed.). Příručka Protokoly o bílkovinách. Příručky Springer Protocols. VII: Imunochemické techniky. Totowa, New Jersey: Humana Press. 749–752. doi:10.1007/978-1-60327-259-9_135. ISBN 978-0-89603-338-2.
- Ouchterlony, Örjan (1948). „Metoda in vitro pro testování toxické produkce bakterií záškrtu“. APMIS. 25 (1–2): 186–191. doi:10.1111 / j.1699-0463.1948.tb00655.x. PMID 18887479.
- Ouchterlony, Örjan (1949). "Reakce antigenu a protilátky v gelu". APMIS. 26 (4): 507–515. doi:10.1111 / j.1699-0463.1949.tb00751.x. PMID 18143039.
- Ouchterlony, O. (1958). "Metody difúze v gelu pro imunologickou analýzu". Pokrok v alergii. 5: 1–78. PMID 13578996.
- Ouchterlony, O. (1962). „Metody difúze v gelu pro imunologickou analýzu. II“. Pokrok v alergii. 6: 30–154. doi:10.1159/000313795. PMID 14482809.
- Ouchterlony, O .; Nilsson, L.A. (1986). Weir, Daniel Mackay (ed.). Příručka experimentální imunologie. 1. Imunochemie (4. vydání). Oxford, Anglie: Blackwell Scientific. 32,1–32,50. ISBN 9780632014996. Citováno 2012-11-23. na Knihy Google
- „Ouchterlonyho analýza“ (PDF). Lékařská imunologie 544. University of California, Irvine College of Medicine. Podzim 2011. Archivovány od originál (PDF) dne 2012-11-23. Citováno 2012-11-23.
- „Ouchterlonyho dvojitá difúze - vzory: teorie“. Hodnota @ Amrita. Indie: Amrita Vishwa Vidyapeetham University. 2012. Archivovány od originál dne 2012-11-23. Citováno 2012-12-24.
- „Ouchterlonyho dvojitá difúze - vzory: postup“. Hodnota @ Amrita]. Indie: Amrita Vishwa Vidyapeetham University. 2012. Archivovány od originál dne 2012-12-24. Citováno 2012-12-24.
- „Ouchterlony Double Diffusion - Titration: Theory“. Hodnota @ Amrita. Indie: Amrita Vishwa Vidyapeetham University. 2012. Archivovány od originál dne 2012-11-23. Citováno 2012-11-23.
- „Ouchterlony Double Diffusion - Titration: Procedure“. Hodnota @ Amrita. Indie: Amrita Vishwa Vidyapeetham University. 2012. Archivovány od originál dne 2012-12-24. Citováno 2012-12-24.
- "BSCI423: Lab 5. Precipitation". College of Computer, Mathematical, and Natural Sciences, University of Maryland, College Park. Archivovány od originál dne 2012-11-23. Citováno 2012-11-23.
externí odkazy
- Simulátor na University of California, Irvine
- „Ouchterlonyho dvojitá imunodifúze“ (fotografie). Citováno 2017-05-15.[trvalý mrtvý odkaz ] Fotografie Ouchterlonyho dvojité imunodifuzní destičky s nezašpiněnými precipitinovými liniemi plné identity a neidentity.
- „Difúzní vzory“. Principy a aplikace imunodifúze. Archivovány od originál dne 11. 12. 2019. Citováno 2017-05-19. Fotografie imunodifúzních vzorců Ouchterlony ukazující obarvené precipitinové linie plné identity, částečné identity a neidentity.