Radiální imunodifúze - Radial immunodiffusion

Radiální imunodifúze (RID) nebo Manciniho metoda, Manciniho imunodifúze nebo jednorázový radiální imunodifúzní test, je imunodifúze technika používaná v imunologie určit množství nebo koncentraci antigen ve vzorku.

Popis

Příprava

Roztok obsahující protilátka se přidá k zahřátému médiu, jako je agar nebo agaróza rozpuštěn v vyrovnávací paměť běžná slanost. Roztavené médium se potom nalije na a mikroskopický sklíčko nebo do otevřené nádoby, jako je a Petriho miska, a nechá se vychladnout a vytvoří a gel.[1][2][3] Roztok obsahující antigen se poté umístí do jamky, která se vrazí do gelu.[2][3][4] Sklíčko nebo nádoba se poté zakryjí nebo uzavřou, aby se zabránilo odpařování.[2][3][4]

Antigen difunduje radiálně do média a tvoří kruh precipitin který označuje hranici mezi protilátkou a antigenem.[1] Průměr kruhu se časem zvětšuje, protože antigen difunduje do média, reaguje s protilátkou a tvoří se nerozpustný komplexy precipitinu.[1][2][5] Antigen se kvantifikuje měřením průměru precipitinového kruhu a jeho porovnáním s průměry precipitinových kruhů vytvořenými známými množstvími nebo koncentracemi antigenu.[1][2][3][6]

Komplexy antigen-protilátka jsou malé a rozpustné v přebytku antigenu. Proto je srážení blízko středu kruhu obvykle méně husté než blízko vnějšího okraje kruhu, kde je antigen méně koncentrovaný.[1][2]

Expanze kruhu dosáhne koncového bodu a zastaví se, když je vyčerpán volný antigen a když antigen a protilátka dosáhnou rovnocennosti.[1][2][5] Jasnost a hustota vnějšího okraje kruhu se však může i nadále zvyšovat poté, co se kruh přestane rozšiřovat.[1]

Výklad

U většiny antigenů jsou plocha a čtverec průměru kruhu v koncovém bodě kruhu přímo úměrné množství antigenu a jsou nepřímo úměrné koncentraci protilátky.[1][2][5] Proto graf, který porovnává množství nebo koncentrace antigenu v původních vzorcích s plochami nebo čtverci průměrů kruhů precipitinu na lineárních stupnicích, bude obvykle přímka, když všechny kruhy dosáhnou svých koncových bodů (metoda ekvivalence) .[1][3][5][6]

Kruhy, které vytváří malé množství antigenu, dosáhnou svých koncových bodů před kruhy, které vytváří velké množství.[1][2][5] Pokud se tedy měří plochy nebo průměry kruhů, zatímco některé, ale ne všechny, kruhy se přestaly rozšiřovat, takový graf bude rovný v části, která obsahuje menší množství nebo koncentrace antigenu, a bude zakřivený v části, která obsahuje větší množství nebo koncentrace.[1][5]

Zatímco se kruhy stále rozšiřují, graf, který porovnává množství nebo koncentrace antigenu v logaritmickém měřítku s průměry nebo plochami kruhů v lineárním měřítku, může být přímka (kinetická metoda).[1][2][4][5][6][7] Kruhy sraženiny jsou však během expanze menší a méně výrazné než po ukončení expanze.[1][5] Teplota dále ovlivňuje rychlost expanze, ale neovlivňuje velikost kruhu v jeho koncovém bodě.[1] Kromě toho je rozsah průměrů kruhů pro stejné množství nebo koncentrace antigenu menší, zatímco některé kruhy se zvětšují, než jsou poté, co všechny kruhy dosáhnou svých koncových bodů.[1][5]

Množství a koncentrace nerozpustných komplexů antigen-protilátka na vnějším okraji kruhu se časem zvyšuje.[1] Jasnost a hustota vnějšího okraje kruhu se tedy také časem zvyšuje.[1] Výsledkem je, že měření velikostí kruhů a grafů vytvořených z těchto měření jsou často přesnější, když se kruhy přestanou rozšiřovat, než když se kruhy stále zvětšují.[1] Z těchto důvodů je často žádoucí provádět měření poté, co všechny kruhy dosáhnou svých koncových bodů, než je provádět měření, když se některé nebo všechny kruhy stále zvětšují.[1]

Měření velkých kruhů jsou přesnější než měření malých kruhů.[1] Proto je často žádoucí upravit koncentraci protilátky a množství antigenu, aby se zajistilo, že precipitinové kruhy budou velké.[1]

Techniky radiální imunodifúze

  • Měření kruhů, zatímco se všechny rozšiřují (kinetická metoda)[4]
  • Měření kruhů po všech dosažení jejich koncových bodů (metoda ekvivalence)[2][3]

Reference

  1. ^ A b C d E F G h i j k l m n Ó str q r s t u Berne BH (01.01.1974). „Odlišná metodologie a rovnice používané při kvantifikaci imunoglobulinů radiální imunodifúzí - srovnávací hodnocení uváděných a komerčních technik“ (PDF). Klinická chemie. Washington DC.: Americká asociace pro klinickou chemii. 20 (1): 61–69. doi:10.1093 / clinchem / 20.1.61. ISSN  0095-1137. LCCN  58002529. OCLC  43430009. PMID  4203461. Archivovány od originál (PDF) dne 8. 8. 2017. Citováno 2015-11-15.
  2. ^ A b C d E F G h i j k Davis NC, Ho M (1976). „Kapitola 2: Kvantifikace imunoglobulinů: radiální imunodifúze“. V Rose N, Friedman H (eds.). Manuál klinické imunologie. Washington DC.: Americká společnost pro mikrobiologii. str. 5–8. ISBN  0-914826-09-3. LCCN  76017595. OCLC  1036571523. Citováno 2019-06-14 - přes Internetový archiv.
  3. ^ A b C d E F Stanley J (2002). „Kapitola 12: Srážky: Jednorázová radiální imunodifúze: Laboratorní technika 12-1: Radiální imunodifúzní zkouška“. Základy imunologie a sérologie. Albany, New York: Delmar Division of Thomson učení. str. 172–174. ISBN  978-0914826255. LCCN  2002280630. OCLC  50204319. Citováno 2017-05-15 - přes Knihy Google. Archivováno 2014-11-29 na Wayback Machine.
  4. ^ A b C d LSUMC / MIP Dental Microbiology Lab (2002). „II. Laboratorní práce: B. Radiální imunodifúze“. Cvičení 3: Antigen-protilátka I. New Orleans, Louisiana: Lékařská fakulta Louisianské státní univerzity: Ústav mikrobiologie, imunologie a parazitologie. Citováno 2015-11-14. Archivováno 2004-08-04 na Wayback Machine.
  5. ^ A b C d E F G h i (1) Mancini G, Carbonara AO, Heremans JF (září 1965). "Imunochemická kvantifikace antigenů jedinou radiální imunodifúzí". Imunochemie. Oxford, Anglie: Pergamon Press. 2 (3): 235–254. doi:10.1016/0019-2791(65)90004-2. ISSN  0019-2791. LCCN  64009461. OCLC  53097967. PMID  4956917. Citováno 2020-07-08 - přes ScienceDirect.
    (2) Mancini G, Vaerman JP, Carbonara AO, Heremans JF (prosinec 1964). Peeters, Hubert (ed.). Jednoradiální - difúzní metoda pro imunologickou kvantifikaci proteinů. Protides of the Biological Fluids: Proceedings of the 11th Colloquium, Bruggy, Belgie (1963). Amsterdam, Nizozemí: Elsevier. 370–373. OCLC  25285708. Citováno 2020-07-08 - přes Knihy Google. Archivováno 9. 12. 2019 v Wayback Machine.
  6. ^ A b C Parvez Z (1984). „Kapitola 4: Přehled imunologických technik: Radial Immunodiffusion (RID)“. Imunologické testy v koagulačním testování. New York: Springer-Verlag. 21–22. doi:10.1007/978-1-4615-7225-1_5. ISBN  9781461572251. LCCN  83020115. OCLC  851823206. Citováno 2020-07-08. Archivováno 2020-07-08 na Wayback Machine.
  7. ^ Fahey JL, McKelvey EM (01.01.1965). "Kvantitativní stanovení sérových imunoglobulinů na plotnách s agarem protilátka" (PDF). Journal of Immunology. Baltimore, Maryland: Americká asociace imunologů. 94 (1): 84–90. ISSN  1048-3233. LCCN  sf85007036. OCLC  204767467. PMID  14253527. Citováno 2007-07-08. Archivováno 2018-02-25 na Wayback Machine.

Další čtení

externí odkazy