Test fixace komplementu - Complement fixation test

Účeldetekuje specifický antigen nebo protilátku

The test fixace komplementu je imunologické lékařský test, který lze použít k detekci přítomnosti buď konkrétního protilátka nebo konkrétní antigen u pacienta sérum, na základě toho, zda fixace komplementu dojde. Bylo široce používáno k diagnostice infekcí, zejména u mikrobů, které nelze snadno zjistit kultivačními metodami, a při revmatických onemocněních. V laboratořích klinické diagnostiky však byla do značné míry nahrazena jinými sérologickými metodami, jako je ELISA a zejména metodami detekce patogenů založenými na DNA PCR.

Proces

The doplňkový systém je systém sérových proteinů, které reagují s komplexy antigen-protilátka. Pokud k této reakci dojde na povrchu buňky, povede to k tvorbě pórů přes membránu, a tím ke zničení buňky. Základní kroky testu fixace komplementu jsou následující:[1]

  1. Sérum se oddělí od pacienta.
  2. Pacienti mají přirozeně v séru různé hladiny proteinů komplementu. Aby se vyloučily jakékoli účinky, které by to mohlo mít na test, musí být proteiny komplementu v séru pacienta zničeny a nahrazeny známým množstvím standardizovaných proteinů komplementu.
    1. Sérum se zahřívá takovým způsobem, že všechny proteiny komplementu - ale žádná z protilátek - v něm nejsou zničeny. (To je možné, protože proteiny komplementu jsou mnohem náchylnější k destrukci teplem než protilátky.)
    2. Do séra se přidá známé množství standardních proteinů komplementu. (Tyto proteiny se často získávají ze séra morčat.)
  3. Požadovaný antigen se přidá do séra.
  4. Ovce červené krvinky (sRBC)[2] které byly předem navázány na anti-sRBC protilátky, jsou přidány do séra. Test se považuje za negativní, pokud roztok v tomto bodě zčervená a jinak je pozitivní.

Pokud sérum pacienta obsahuje protilátky proti sledovanému antigenu, naváže se na antigen v kroku 3 a vytvoří komplexy antigen-protilátka. Proteiny komplementu budou reagovat s těmito komplexy a budou vyčerpány. Když se tedy v kroku 4 přidají komplexy sRBC-protilátka, nezůstane v séru žádný komplement. Pokud však nejsou přítomny žádné protilátky proti požadovanému antigenu, komplement se nevyčerpá a bude reagovat s komplexy sRBC-protilátka přidanými v kroku 4, lýzou sRBC a rozlitím jejich obsahu do roztoku, čímž změní jeho barvu na růžovou .[1]

Testování na antigen

Zatímco detekce protilátek je běžnějším formátem testu, je stejně možné testovat přítomnost antigenu. V tomto případě je pacientovo sérum doplněno specifickou protilátkou k vyvolání tvorby komplexů; přidání komplementu a indikátoru sRBC se provádí jako dříve.

Semikvantitativní testování

Test lze provést kvantitativně nastavením řady ředění séra pacienta a určením nejvyššího faktoru ředění, který stále povede k pozitivnímu CF testu. Tento ředicí faktor odpovídá titr.

Reference

  1. ^ A b „Animation Quiz 4 - Complement Fixation Test“. highered.mheducation.com.
  2. ^ C. Vaman Rao (2005). Imunologie: učebnice. Alpha Science Int'l Ltd. str. 112–. ISBN  978-1-84265-255-8. Citováno 3. prosince 2010.

externí odkazy