Fenotypové testování mykobakterií - Phenotypic testing of mycobacteria

v mikrobiologie, fenotypové testování mykobakterií používá řadu metod. Nejčastěji používané fenotypový testy k identifikaci a rozlišení Mycobacterium kmeny a druhy navzájem jsou popsány níže.

Testy

Acetamid jako jediný zdroj C a N.

Média: KH2PO4 (0,5 g), MgSO>4* 7H20 (0,5 g), čištěný agar (20 g), destilovaný voda (1000 ml). Médium je doplněno acetamid na konečnou koncentraci 0,02 M, upravenou na a pH 7,0 a sterilizováno autoklávování při 115 ° C po dobu 30 minut. Po šikmý, médium je naočkováno jedním smyčka kultur a inkubovány. Růst se čte po inkubaci po dobu dvou týdnů (rychle rostoucí) nebo čtyř týdnů (pomalu rostoucí).[1]

Arylsulfatázový test

Enzym arylsulfatázy je přítomen ve většině mykobakterií. K odlišení určitých kmenů Mycobacteria se používá rychlost, kterou arylsulfatázový enzym štěpí fenolftalein disulfát na fenolftalein (který v přítomnosti hydrogenuhličitanu sodného tvoří červenou barvu) a další soli. Třídenní arylsulfatázový test se používá k identifikaci potenciálně patogenních rychlých pěstitelů, jako jsou M. fortuitum a M. chelonae. Pomalu rostoucí M. marinum a M. szulgai jsou pozitivní ve 14denním testu na arylsulfatázu.[2]

Kataláza, semikvantitativní aktivita

Většina mykobakterií produkuje enzym kataláza, ale liší se v produkovaném množství. Některé formy katalázy jsou také inaktivovány zahříváním na 68 ° C po dobu 20 minut (jiné jsou stabilní). Organismy produkující enzym katalázu mají schopnost se rozkládat peroxid vodíku do vody a volného kyslíku. Test se liší od testu použitého k detekci katalázy u jiných druhů bakterií použitím 30% peroxidu vodíku v silném roztoku detergentu (10% polysorbát 80 ).[1]

Citrát

Jediný uhlík zdroj[1]

Vejce střední

Růst na Löwenstein – Jensen střední (LJ médium)

L-glutamát

Jediný uhlík a dusík zdroj[1]

Tempo růstu

Rychlost růstu je doba potřebná k vytvoření zralých kolonií viditelných bez zvětšení na pevném médiu. Mykobakterie tvořící kolonie viditelné pouhým okem do sedmi dnů v subkultuře jsou známé jako rychlí pěstitelé, zatímco ti, kteří vyžadují delší období, se nazývají pomalí pěstitelé.[3]

Příjem železa

Schopnost převzít žehlička z anorganického železa obsahujícího činidlo pomáhá rozlišovat některé druhy mykobakterií.[1]

Lebek střední

Lebek je polotuhé médium používané k testování kyslíkových preferencí mykobakteriálních izolátů. Aerofilní růst je indikován růstem na (a nad) povrchem skleněné stěny trubice; mikroaerofilní růst je indikován růstem pod povrchem.[4]

MacConkey agar bez krystalové fialové
[5]
Akumulace niacinu (metoda papírového proužku)
Viz také: Test na niacin

Niacin je tvořen jako metabolický vedlejší produkt všemi mykobakteriemi, ale některé druhy mají enzym, který převádí volný niacin na niacin ribonukleotid. M. tuberculosis (a některé další druhy) tento enzym postrádají a hromadí niacin jako ve vodě rozpustný vedlejší produkt v kultivačním médiu.[1]

Snížení dusičnanů

Obsahující mykobakterie nitroreduktáza katalyzovat redukci z dusičnan na dusitany. Přítomnost dusitanu ve zkušebním médiu se detekuje přidáním sulfanilamid a n-naftylethylendiamin. Pokud je dusičnan přítomen, červený diazonium tvoří se barvivo.[1]

Fotoreaktivita mykobakterií;

Některé mykobakterie produkují karotenoid pigmenty bez světla; jiné vyžadují fotoaktivaci pro produkci pigmentu. Fotochromogeny produkují nepigmentované kolonie, jsou-li pěstovány ve tmě, a pigmentované kolonie po vystavení světlu a nové inkubaci. Scotochromogens produkují tmavě žluté až oranžové kolonie, když jsou pěstovány ve světle nebo ve tmě. Nefotochromogeny nejsou ve světle a tmě nepigmentované nebo mají světle žlutý, žlutohnědý nebo žlutohnědý pigment, který se po vystavení světlu nezintenzivňuje.[3]

Tolerance pikrátů

Roste na sautonském agaru kyselina pikrová (0,2% w / v) po třech týdnech[1]

Pigmentace

Některé mykobakterie produkují karotenoidové pigmenty bez světla; jiné vyžadují fotoaktivaci pro produkci pigmentu (viz fotoreaktivita výše).[3]

Citlivost na pyrazinamid (PZA)

The deamidace z pyrazinamid na kyselina pyrazinová (předpokládá se, že je aktivní složkou drogy pyrazinamid ) za čtyři dny je užitečná fyziologická charakteristika, kterou M. tuberculosis-komplexní členy lze rozlišit.[1]

Tolerance chloridu sodného

Růst na LJ médiu obsahujícím 5% NaCl[1]

Citlivost na hydrazid thiofen-2-karboxylové kyseliny (TCH)

Růst M. bovis a M. africanum podtyp II je inhibován thiofen-2-karboxylovou kyselinou hydrazid; růst M. tuberculosis a M. africanum podtyp I je bez zábran.[1]

Hydrolýza polysorbátu 80

Test pro lipáza za použití polysorbátu 80 (polyoxyethylen sorbitan monooleát, prací prostředek). Určité mykobakterie mají lipázu, která ji rozděluje kyselina olejová a polyoxyethylovaný sorbitol. Zkušební roztok také obsahuje fenolová červeň, který je stabilizován polysorbátem 80; když je poslední 80 hydrolyzován, fenolová červeň se změní ze žluté na růžovou.[1]

Ureáza (adaptace na mykobakterie)

S inokulační smyčkou se několik smyček testovacích kolonií pro mykobakterie přenese do 0,5 ml ureáza substrát, smíchaný k emulgaci a inkubován při 35 ° C po dobu tří dnů; hledá se změna barvy (z jantarově žluté na růžově červenou).[1]

Reference

  1. ^ A b C d E F G h i j k l m Koneman, E. (1988). Diagnostická mikrobiologie. Philadelphia: J.B. Lippincott.
  2. ^ ACHARYA, TANKESHWAR. „Klíčové biochemické metody používané k rozlišení skupiny mykobakterií“. Citováno 21. listopadu 2014.
  3. ^ A b C Metchock, B.G .; Nolte, FS; Wallace, R.J. (1999). „Mycobacterium“. In Murray, P.R .; Baron, E.J .; Pfaller, M.A.; Tenover, F.C .; Yolken, R.H. (eds.). Manuál klinické mikrobiologie. Washington, DC: ASM Press. 399–427.
  4. ^ Deutsches Institut für Normung (1993). "Část 9: minimální požadavky na identifikaci tuberkulózních bacilů". Lékařská mikrobiologie: Diagnostika tuberkulózy. Berlín: Beuth Verlag (DIN 58943-9).
  5. ^ M. Tsukamura. "Adansoniánská klasifikace mykobakterií". Journal of General Microbiology. 45: 252–273. doi:10.1099/00221287-45-2-253.