Golgisova metoda - Golgis method - Wikipedia

Kresba Camilla Golgiho z a hipokampus obarvené metodou dusičnanu stříbrného
Nákres a Purkyňova buňka v mozeček kůra provedl Santiago Ramón y Cajal, což jasně ukazuje sílu Golgiho barvicí metody k odhalení jemných detailů
Lidský neokortikál pyramidový neuron obarvené technikou Golgi. Všimněte si apikálního dendrita, který se rozprostírá svisle nad somou, a četných bazálních dendritů vyzařujících laterálně ze základny těla buňky.

Golgiho metoda je barvení stříbrem technika, která se používá k vizualizaci nervová tkáň pod světelnou mikroskopií. Metodu objevil Camillo Golgi, an italština lékař a vědec, který publikoval první snímek vytvořený touto technikou v roce 1873.[1] Původně byl pojmenován černá reakce (la reazione nera) Golgi, ale stal se lépe známý jako Golgiho skvrna nebo později, Golgiho metoda.

Golgiho barvení bylo použito španělština neuroanatomist Santiago Ramón y Cajal (1852–1934), aby objevili řadu nových faktů o organizaci nervového systému, inspirujících zrození doktrína neuronů. Nakonec Ramón y Cajal vylepšil techniku ​​pomocí metody, kterou nazval „dvojitá impregnace“. Ramón y Cajalova barvicí technika, která se stále používá, se nazývá Cajalova skvrna.[Citace je zapotřebí ]

Mechanismus

Buňky v nervové tkáni jsou hustě zabalené a pokud jsou všechny buňky obarveny, lze získat jen málo informací o jejich strukturách a propojení. Dále tenké vláknité výrůstky nervových buněk, včetně axon a dendrity neuronů, jsou příliš štíhlé a průhledné, než aby byly viditelné běžnými barvicími technikami. Golgiho metoda obarví omezený počet buněk náhodně v celém rozsahu. Mechanismus, kterým se to děje, je stále do značné míry neznámý.[2] Dendrity, stejně jako buněčné soma, jsou jasně zbarveny hnědou a černou barvou a lze je sledovat v celé jejich délce, což umožnilo neuroanatomistům sledovat spojení mezi neurony a zviditelnit složitou síťovou strukturu mnoha částí mozek a mícha.

Golgiho zbarvení se dosahuje impregnací nervové tkáně fixované aldehydem dichroman draselný a dusičnan stříbrný. Takto obarvené buňky jsou vyplněny mikrokrystalizace z chroman stříbrný.

Technika

Podle SynapseWeb,[3] toto je recept na Golgiho barvicí techniku:

  1. Ponořte blok (přibližně 10x5 mm) o formaldehyd - pevné (nebo paraformaldehyd - glutaraldehyd -perfúzovaná) mozková tkáň do 2% vodného roztoku dichroman draselný po dobu 2 dnů
  2. Blok krátce osušte filtrační papír.
  3. Ponořte blok do 2% vodného roztoku dusičnanu stříbrného na další 2 dny.
  4. Řezané řezy cca. 20–100µm tlustý.
  5. Rychle dehydratujte ethanol, vyčistěte a připojte (např. do Depex nebo Enthalan).

Tato technika byla od té doby zdokonalena, aby nahradila stříbrnou sraženinu zlatem ponořením vzorku dovnitř chlorid zlatý pak kyselina šťavelová, následované odstraněním stříbra pomocí thiosíran sodný. Tím je zachována vyšší míra jemné struktury s ultrastrukturálními detaily označenými malými částicemi zlata. [4]

Citát

Ramón y Cajal řekl o metodě Golgi:

Vyjádřil jsem překvapení, které jsem zažil, když jsem na vlastní oči viděl úžasné zjevovací schopnosti reakce chrom-stříbro a absenci jakéhokoli vzrušení ve vědeckém světě, které vzbudil jeho objev.
Recuerdos de mi vida, sv. 2, Historia de mi labor científica. Madrid: Moya, 1917, str. 76.

Reference

  1. ^ Finger, Stanley (1994). Počátky neurovědy: historie zkoumání mozkových funkcí. Oxford University Press. str. 45. ISBN  9780195146943. OCLC  27151391. V roce 1873 zveřejnil Golgi první krátký, ale „adekvátní“ obraz la reazione nera (černá reakce), která ukázala celou nervovou buňku, včetně jejího buněčného těla, axonu a rozvětvených dendritů.
  2. ^ Nicholls, J. G. (2001). Z neuronu do mozku. Sinauer Associates. str.5. ISBN  0878934391.
  3. ^ Špaček, J., Fiala, J. (2002-06-28). "Vizualizace dendritických trnů". SynapseWeb. Archivovány od originál dne 26. 06. 2010. Citováno 2010-06-17.CS1 maint: více jmen: seznam autorů (odkaz)
  4. ^ „Home - Springer“.[mrtvý odkaz ]

externí odkazy