Alophycocyanin - Allophycocyanin - Wikipedia

Alofykocyanin dodekamer, Gloeobacter violaceus (PDB: 2vjt​).

Alophycocyanin ("ostatní bílkoviny z řas"; od řecký: ἄλλος (allos) což znamená „jiné“, φύκος (fykos) což znamená „řasa“ a κυανός (kyanos) což znamená „modrá“) je a protein ze sklizně světla fykobiliprotein rodina, spolu s fykocyanin, fykoerytrin a fykoerythrocyanin. Je to doplňkový pigment na chlorofyl. Všechny fykobiliproteiny jsou rozpustné ve vodě, a proto nemohou existovat uvnitř membrány karotenoidy, ale agregují a vytvářejí shluky, které přilnou k tzv. membráně phycobilisomes. Allophycocyanin absorbuje a vydává červené světlo (650, respektive 660 nm) a snadno se nachází v Sinice (také zvaný modrozelené řasy ), a červené řasy. Phycobilin pigmenty mají fluorescenční vlastnosti, které se používají v imunotest soupravy. v průtoková cytometrie, je často zkráceně APC. Efektivně využít v aplikacích, jako je FACS, High-Throughput Screening (HTS) a mikroskopie „APC musí být chemicky zesítěné.

Strukturální charakteristiky

Allophycocyanin lze izolovat z různých druhů červených nebo modrozelených řas, z nichž každý produkuje mírně odlišné formy molekuly. Skládá se ze dvou různých podjednotek (α a β), ve kterých má každá podjednotka jeden chromofor fykocyanobilinu (PCB). Struktura podjednotky pro APC byla stanovena jako (αβ)3. Molekulová hmotnost APC je 105 000 daltonů.

Spektrální charakteristiky

Absorpční maximum652 nm
Další absorpční vrchol625 nm
Emisní maximum657,5 nm
Stokesův posun5,5 nm
Koeficient vyhynutí700 000 mil−1cm−1
Kvantový výnos0.68
Jas1,6 x 105 M−1cm−1

Zesítěný APC

Jak bylo uvedeno výše, aby byl APC užitečný v imunotestech, musí být nejprve chemicky zesítěn, aby se zabránilo jeho disociaci na jeho podjednotky, pokud jsou v běžných fyziologických pufrech.[1] Konvenční způsob, jak toho dosáhnout, je destruktivní proces, při kterém je ošetřený trimer APC chemicky rozrušen v 8M močovině a poté je umožněno jeho opětovné spojení ve fyziologickém pufru.[2] Lze použít alternativní metodu, která zachovává strukturální integritu trimeru APC a umožňuje jasnější a stabilnější konečný produkt.[3]

Aplikace

Mnoho aplikací a nástrojů bylo vyvinuto speciálně pro alophycocyanin. Běžně se používá v imunotesty jako FACS, průtoková cytometrie a vysokovýkonný screening jako akceptor pro Europium přes Časově rozlišený - fluorescenční rezonanční přenos energie (TR-FRET) testy.

Reference

  1. ^ Papageorgiou GC, Lagoyanni T (září 1983). "Účinky chaotropních elektrolytů na strukturu a elektronickou excitační vazbu glutaraldehydových a diimidoesterů zesítěných fykobilizomů". Biochimica et Biophysica Acta (BBA) - bioenergetika. 724 (3): 323–32. doi:10.1016/0005-2728(83)90091-9.
  2. ^ Yeh SW, Ong LJ, Clark JH, Glazer AN (leden 1987). "Fluorescenční vlastnosti alophycocyaninu a zesítěného alofykocyaninového trimeru". Cytometrie. 8 (1): 91–5. doi:10,1002 / cyto.990080113. PMID  3100257.
  3. ^ USA poskytly 7256050, „Zesítěný alofykocyanin s vysokou intenzitou fluorescence“, přidělen společnosti Columbia Biosciences Corp.