Kolorimetrie (chemická metoda) - Colorimetry (chemical method)

Kolorimetr Duboscq, 1870, který umožňoval vizuální srovnání absorpcí ve dvou sloupcích tekutin při úpravě jejich hloubek

Kolorimetr pro NO₂ analýza, Fixed Nitrogen Research Laboratory, ca. 1930

v fyzický a analytická chemie, kolorimetrie nebo kolorimetrie je technika používaná ke stanovení koncentrace barevných sloučenin v řešení.^[1]A kolorimetr je zařízení používané k testování koncentrace roztoku měřením jeho absorbance specifické vlnové délky světla (nezaměňovat s tristimulusový kolorimetr slouží k měření barev obecně).

Pro použití kolorimetru je třeba připravit různá řešení, včetně kontroly nebo odkazu na známou koncentraci. Vizuální kolorimetr, například Duboscq ilustrovaný kolorimetr, lze délku dráhy světla procházejícími roztoky měnit filtrovaný světlo procházející skrz ně je porovnáno pro vizuální shodu. Pokud se barvy shodují, považuje se délka dráhy koncentrace za stejnou, takže koncentraci neznámého lze určit jednoduchými proporcemi.^[2] Nesslerovy trubky pracovat na stejném principu.

K dispozici jsou také elektronické automatické kolorimetry; před použitím těchto strojů je nutné je kalibrovat pomocí a kyveta obsahující kontrolní roztok. Koncentraci vzorku lze vypočítat z intenzity světla před a po průchodu vzorkem pomocí Pivo – Lambertův zákon. Fotoelektrické analyzátory začaly dominovat v 60. letech.

Barva nebo vlnová délka filtru zvoleného pro kolorimetr je nesmírně důležitá, protože vlnová délka světla, které je přenášeno kolorimetrem, musí být stejná jako vlnová délka absorbovaná měřenou látkou. Například filtr na kolorimetru může být nastaven na červenou, pokud je kapalina modrá.

Absorpční kolorimetr

A kolorimetr je zařízení sloužící k testování koncentrace roztoku měřením jeho absorbance specifické vlnové délky světla. Chcete-li používat toto zařízení, různé řešení musí být provedeno a kontrola (obvykle směs destilovaná voda a další řešení) se nejprve naplní do a kyveta a umístí se dovnitř kolorimetru ke kalibraci stroje. Teprve poté, co byl přístroj zkalibrován, můžete pomocí něj zjistit hustoty a / nebo koncentrace ostatních roztoků. To provedete opakováním kalibrace, s výjimkou kyvet naplněných jinými roztoky. Pokud je kapalina modrá, musí být filtr na kolorimetru nastaven na červenou. Velikost filtru původně zvoleného pro kolorimetr je nesmírně důležitá, protože vlnová délka světla, které prochází kolorimetrem, musí být stejná jako vlnová délka absorbovaná látkou.

Kolorimetrické testy

V kolorimetrických rozborech se používají činidla, která za přítomnosti měřitelné barvy podléhají měřitelné změně barvy analyt. Jsou široce používány v biochemii k testování přítomnosti enzymů, specifických sloučenin, protilátek, hormonů a mnoha dalších analytů. Například,

para-nitrofenylfosfát se převádí na žlutý produkt pomocí alkalická fosfatáza enzym.
Coomassie Blue po navázání na proteiny vyvolá posun spektra, což umožňuje kvantitativní dávkování. Podobný kolorimetrický test, Stanovení kyseliny bicinchoninové, používá chemickou reakci ke stanovení koncentrace proteinu.
Enzymové imunotesty k detekci antigenů použijte protilátky v komplexu s enzymy. Vazba protilátky je často odvozena od změny barvy reagencií, jako je TMB.

Viz také

Reference

^ Housecroft, Catherine; Constable, Edwin (2006). Chemie: úvod do organické, anorganické a fyzikální chemie. Pearson Education. str. 349–353. ISBN 978-0-13-127567-6.
^ Louis Rosenfeld (1999). Čtyři století klinické chemie. CRC Press. 255–258. ISBN 978-90-5699-645-1.

[1] Housecroft, Catherine; Constable, Edwin (2006). Chemie: úvod do organické, anorganické a fyzikální chemie. Pearson Education. str. 349–353. ISBN 978-0-13-127567-6.

[2] Louis Rosenfeld (1999). Čtyři století klinické chemie. CRC Press. 255–258. ISBN 978-90-5699-645-1.

[1]

[2]