Buněčná frakcionace - Cell fractionation

Buněčná frakcionace je proces používaný k oddělení buněčné komponenty při zachování jednotlivých funkcí každé komponenty.[1] Toto je metoda, která byla původně použita k prokázání buněčné polohy různých biochemických procesů. Další použití subcelulární frakcionace je poskytnout obohacený zdroj proteinu pro další čištění a usnadnit diagnostiku různých chorobných stavů.[2]

Homogenizace

Tkáň je obvykle homogenizován v pufrovací roztok to je izotonický zastavit osmotické poškození. Mechanismy pro homogenizaci zahrnují mletí, mletí, sekání, změny tlaku, osmotický šok, zmrazení a rozmrazení, a ultrazvuk. Vzorky se poté udržují v chladu, aby se zabránilo enzymatickému poškození. Jde o tvorbu homogenní hmoty buněk (buněčný homogenát nebo buněčná suspenze ). Zahrnuje mletí buněk ve vhodném médiu za přítomnosti určitých enzymů se správným pH, iontovým složením a teplotou. Například, pektináza který tráví střední lamela mezi rostlinnými buňkami.

Filtrace

Tento krok nemusí být nutný v závislosti na zdroji buňky. Zvíře tkáň je však pravděpodobné, že se získá pojivová tkáň, která musí být odstraněna. Filtrace se běžně dosahuje nalitím gáza nebo s sací filtr a příslušný keramický filtr.

Čištění

Čištění je dosaženo pomocí diferenciální centrifugace - postupné zvyšování gravitační síly má za následek postupné oddělení organel podle jejich hustota.

Viz také

Médium pro separaci buněk podle hustoty:

Reference

  1. ^ Alberts, B; Johnson, A. „Frakcionace buněk“. Molekulární biologie buňky. 4. vydání.
  2. ^ Ninfa, Alexander J. (2010). Základní laboratorní přístupy pro biochemii a biotechnologii. Spojené státy americké: John Wiley & Sons, INC. 209. ISBN  978-0-470-08766-4.