URA3 - URA3

URA3 je gen na chromozóm V in Saccharomyces cerevisiae (droždí). Jeho systematické jméno je YEL021W. URA3 se ve výzkumu kvasinek často používá jako „markerový gen“, tj. gen pro značení chromozomů nebo plazmidy. URA3 kóduje Orotidin 5'-fosfát dekarboxyláza (ODCase), což je enzym který katalyzuje jednu reakci při syntéze pyrimidin ribonukleotidy (součást RNA ).^[1]

Použití při výzkumu kvasinek

Ztráta aktivity ODCasy vede k nedostatečnému buněčnému růstu, pokud uracil nebo uridin je přidán do média. Přítomnost genu URA3 v kvasinkách obnovuje aktivitu ODCasy, což usnadňuje růst na médiu, které není doplněno uracilem nebo uridinem, což umožňuje selekci kvasinek nesoucích gen. Naproti tomu, pokud 5-FOA (kyselina 5-fluororotová) se přidá do média, aktivní ODCáza převede 5-FOA na toxickou sloučeninu (a inhibitor sebevraždy ) 5-fluorouracil způsobující buněčnou smrt, což umožňuje selekci proti kvasinkám nesoucím gen.

Protože URA3 umožňuje pozitivní i negativní selekci, byl vyvinut jako genetický marker pro transformace DNA a další genetické techniky u bakterií a mnoha druhů hub. Je to jeden z nejdůležitějších genetických markerů v droždí genetická úprava. Zatímco URA3 je výkonná volitelná značka, má vysoké pozadí. Toto pozadí je způsobeno tím, že buňky, které zachycují mutace v URA3, mohou také růst na 5-FOA. Kolonie by měly být ověřeny druhým testem, jako je PCR, aby se potvrdilo, že byl vytvořen požadovaný kmen.

externí odkazy

Databáze S. cerevisiae (2018) gen URA3. https://www.yeastgenome.org/locus/S000000747

Reference