Transkripční aktivátorová efektorová nukleáza - Transcription activator-like effector nuclease

Spacefill kresba dimerní fúze TALE-FokI (modrá: TALE; zelená: FokI) navázaná na DNA (PDB: 1OK, 3UGM), David Goodsell
Část série na
Genetické inženýrství
Logo genetického inženýrství.png
 
Geneticky modifikované organismy
Historie a regulace
Proces
Aplikace
Kontroverze

Transkripční aktivátorové efektorové nukleázy (TALEN) jsou restrikční enzymy které mohou být navrženy tak, aby štěpily specifické sekvence DNA. Jsou vyrobeny fúzí a TAL efektor Doména vázající DNA k doméně štěpení DNA (a nukleáza který řeže řetězce DNA). Transkripční aktivátory podobné efektorům (TALEs) lze zkonstruovat tak, aby se vážily na prakticky jakoukoli požadovanou sekvenci DNA, takže v kombinaci s nukleázou lze DNA na konkrétních místech rozřezat.[1] Restrikční enzymy mohou být zavedeny do buněk pro použití v editace genů nebo pro genom úpravy in situ, technika známá jako editace genomu pomocí inženýrských nukleáz. Vedle nukleázy zinkového prstu a CRISPR / Cas9, TALEN je významným nástrojem v oblasti editace genomu.

TALE DNA-binding domain

TAL efektory jsou proteiny, které jsou vylučovány Xanthomonas bakterie prostřednictvím jejich sekreční systém typu III kdy oni infikovat rostliny.[2] Doména vázající DNA obsahuje opakované vysoce konzervované 33–34 aminokyselina sekvence s divergentní 12. a 13. aminokyselinou. Tyto dvě pozice, označované jako Repeat Variable Diresidue (RVD), jsou vysoce variabilní a vykazují silnou korelaci se specifickými nukleotid uznání.[3][4] Tento přímý vztah mezi aminokyselinovou sekvencí a rozpoznáváním DNA umožnil inženýrství specifických domén vázajících DNA výběrem kombinace opakujících se segmentů obsahujících příslušné RVD.[1] Zejména mírné změny v RVD a začlenění „nekonvenčních“ RVD sekvencí mohou zlepšit specificitu cílení.[5]

DNA štěpící doména

Nespecifická doména štěpení DNA od konce FokI endonukleáza může být použita ke konstrukci hybridu nukleázy které jsou aktivní v testu kvasinek.[6][7] Tato činidla jsou také aktivní v rostlinných buňkách[8][9] a ve zvířecích buňkách.[9][10][11][12] Počáteční studie TALEN používaly doménu štěpení FokI divokého typu, ale některé následné studie TALEN[11][13][14] také použil varianty domén štěpení FokI s mutacemi navrženými ke zlepšení specificity štěpení[15][16] a štěpná aktivita.[17] FokI doména funguje jako dimer, vyžadující dva konstrukty s jedinečnými doménami vázajícími DNA pro místa v cílovém genomu se správnou orientací a mezerami. Jak počet aminokyselinových zbytků mezi doménou vázající TALE DNA a doménou štěpení FokI, tak počet bází mezi dvěma jednotlivými vazebnými místy TALEN se jeví jako důležité parametry pro dosažení vysoké úrovně aktivity.[10][18]

Inženýrské konstrukce TALEN

Jednoduchý vztah mezi aminokyselinovou sekvencí a rozpoznáváním DNA vazebné domény TALE umožňuje efektivní inženýrství proteinů. V tomto případě, umělá genová syntéza je problematické z důvodu nesprávného žíhání opakující se sekvence nalezené ve vazebné doméně TALE.[19] Jedním z řešení je použití veřejně dostupného softwarového programu (DNAWorks[20]) vypočítat oligonukleotidy vhodné pro montáž ve dvou krocích PCR shromáždění oligonukleotidů následované amplifikací celého genu. Byla také popsána řada modulárních schémat sestavení pro generování konstruovaných konstrukcí TALE.[9][19][21][22][23][24] Obě metody nabízejí systematický přístup k inženýrství vazebných domén DNA, který je koncepčně podobný metodě modulárního sestavení pro generování zinkový prst DNA rozpoznávací domény.

Pracovní postup úpravy genomu vašeho oblíbeného genu (YFG) pomocí TALEN. Je identifikována cílová sekvence, je vytvořena odpovídající sekvence TALEN a vložena do plazmidu. Plazmid je vložen do cílové buňky, kde je translatován za vzniku funkčního TALENu, který vstupuje do jádra a váže a štěpí cílovou sekvenci. V závislosti na aplikaci to lze použít k zavedení chyby (vyřazení cílového genu) nebo k zavedení nové sekvence DNA do cílového genu.

Transfekce

Jakmile jsou TALEN konstrukce sestaveny, jsou vloženy do plazmidy; cílové buňky jsou pak transfektovaný s plazmidy a genové produkty jsou vyjádřený a vstoupit do jádra pro přístup do genomu. Alternativně mohou být konstrukty TALEN dodávány do buněk jako mRNA, což odstraňuje možnost genomové integrace proteinu exprimujícího TALEN. Použití vektoru mRNA může také dramaticky zvýšit úroveň homologně řízené opravy (HDR) a úspěšnost introgrese během úpravy genu.

Úpravy genomu

Mechanismy

TALEN lze použít k úpravě genomů indukcí dvouřetězcových zlomů (DSB), na které buňky reagují pomocí opravných mechanismů.

Nehomologní spojování konců (NHEJ) přímo liguje DNA z kterékoli strany dvouřetězcového zlomu, kde je velmi malé nebo žádné překrytí sekvence pro žíhání. Tento opravný mechanismus vyvolává chyby v genomu prostřednictvím indels (inzerce nebo delece) nebo chromozomální přesmyk; jakékoli takové chyby mohou způsobit nefunkčnost genových produktů kódovaných na tomto místě.[10] Protože se tato aktivita může lišit v závislosti na druhu, typu buňky, cílovém genu a použité nukleáze, měla by být sledována při navrhování nových systémů. Může být spuštěn jednoduchý test štěpení heteroduplexem, který detekuje jakýkoli rozdíl mezi dvěma alelami amplifikovanými pomocí PCR. Produkty štěpení lze vizualizovat na jednoduchých agarózových gelech nebo deskových gelových systémech.

Alternativně může být DNA zavedena do genomu prostřednictvím NHEJ v přítomnosti exogenních dvouřetězcových fragmentů DNA.[10]

Homologie řízená oprava může také zavést cizí DNA na DSB, protože transfektované dvouvláknové sekvence se používají jako templáty pro opravné enzymy.[10]

Aplikace

TALEN se používá k účinné modifikaci rostlinných genomů,[25] vytváření ekonomicky důležitých potravinářských plodin s příznivými nutričními vlastnostmi.[26] Byly také využity k vývoji nástrojů pro výrobu biopaliva.[27] Kromě toho byl použit k vytvoření stabilně upraveného člověka embryonální kmenová buňka a indukované pluripotentní kmenové buňky (IPSC) klony a lidské erytroidní buněčné linie,[11][28] generovat knockout C. elegans,[12] knockout krysy,[13] knockout myši,[29] a knockout zebrafish.[14][30] Metodu lze navíc použít ke generování knockinových organismů. Wu et al. Získali knockinový dobytek Sp110 pomocí talen-nickas k vyvolání zvýšené odolnosti tuberkulózy.[31] Tento přístup byl také použit ke generování knockinových krys mikroinjekcí TALEN mRNA v jednobuněčných embryích.[32]

TALEN byl také experimentálně využíván k opravě genetických chyb, které jsou základem nemoci.[33] Například to bylo použito in vitro opravit genetické vady, které způsobují poruchy, jako je srpkovitá nemoc,[28][34] xeroderma pigmentosum,[35] a epidermolysis bullosa.[36] Nedávno se ukázalo, že TALEN lze použít jako nástroje k využití imunitního systému v boji proti rakovině; Cílení zprostředkované TALENem může generovat T buňky, které jsou rezistentní na chemoterapeutická léčiva a vykazují protinádorovou aktivitu.[37][38]

Teoreticky umožňuje genomová specificita vytvořených fúzí TALEN korekci chyb v jednotlivých genetických lokusech pomocí homologně řízené opravy ze správné exogenní šablony.[33] Ve skutečnosti však in situ aplikace TALEN je v současné době omezena nedostatkem účinného mechanismu dodání, neznámými imunogenními faktory a nejistotou ve specifičnosti vazby TALEN.[33]

Další objevující se aplikací TALENu je jeho schopnost kombinovat s dalšími nástroji genomového inženýrství, jako je meganukleázy. Oblast vázající DNA efektoru TAL může být kombinována s doménou štěpení meganukleázy za vzniku hybridní architektury kombinující snadné inženýrství a vysoce specifickou aktivitu DNA vazby TAL efektoru s nízkou frekvencí místa a specificitou meganukleázy.[39]

Ve srovnání s jinými technikami úpravy genomu spadá TALEN z hlediska obtížnosti a nákladů do středu. Na rozdíl od ZFN „TALEN rozpoznává jednotlivé nukleotidy. Je mnohem přímočařejší vytvořit interakce mezi doménami vázajícími DNA TALEN a jejich cílovými nukleotidy, než je vytvořit interakce se ZNF a jejich cílovými nukleotidovými triplety.[40] Na druhou stranu, CRISPR spoléhá na tvorbu komplexu ribonukleotidů namísto rozpoznávání proteinů / DNA. gRNA mohou cílit na téměř jakoukoli sekvenci v genomu a mohou být levně produkovány, čímž je CRISPR účinnější a levnější než TALEN i ZFN. TALEN je nakonec 200krát dražší než CRISPR a jeho provedení trvá několik měsíců déle.

Přesnost efektorové nukleázy TAL

Mimo cílová aktivita aktivní nukleázy může vést k nežádoucím dvouřetězcovým zlomům a následně může vést k chromozomálním přesmykům a / nebo buněčné smrti. Byly provedeny studie srovnávající relativní toxicitu dostupných technologií s nukleázou. Na základě těchto studií [18] a maximální teoretická vzdálenost mezi vazbou DNA a aktivitou nukleáz se předpokládá, že konstrukty TALEN mají největší přesnost v současné době dostupných technologií.[41]

Viz také

Reference

  1. ^ A b Boch J (únor 2011). . Přírodní biotechnologie. 29 (2): 135–6. doi:10.1038 / nbt.1767. PMID  21301438.
  2. ^ Boch J, Bonas U (září 2010). "Efekty řady Xanthomonas AvrBs3 typu III: objev a funkce". Roční přehled fytopatologie. 48: 419–36. doi:10.1146 / annurev-phyto-080508-081936. PMID  19400638.
  3. ^ Boch J, Scholze H, Schornack S, Landgraf A, Hahn S, Kay S, Lahaye T, Nickstadt A, Bonas U (prosinec 2009). "Porušení kódu vazebné specificity DNA efektorů TAL typu III". Věda. 326 (5959): 1509–12. Bibcode:2009Sci ... 326.1509B. doi:10.1126 / science.1178811. PMID  19933107.
  4. ^ Moscou MJ, Bogdanove AJ (prosinec 2009). "Jednoduchá šifra řídí rozpoznávání DNA pomocí TAL efektorů". Věda. 326 (5959): 1501. Bibcode:2009Sci ... 326.1501M. doi:10.1126 / science.1178817. PMID  19933106.
  5. ^ Juillerat A, Pessereau C, Dubois G, Guyot V, Maréchal A, Valton J, Daboussi F, Poirot L, Duclert A, Duchateau P (leden 2015). „Optimalizované vyladění specificity TALEN pomocí nekonvenčních RVD“. Vědecké zprávy. 5: 8150. Bibcode:2015NatSR ... 5E8150J. doi:10.1038 / srep08150. PMC  4311247. PMID  25632877.
  6. ^ Christian M, Cermak T, Doyle EL, Schmidt C, Zhang F, Hummel A, Bogdanove AJ, Voytas DF (říjen 2010). „Cílení dvouřetězcových zlomů DNA pomocí efektorových nukleáz TAL“. Genetika. 186 (2): 757–61. doi:10.1534 / genetika.110.120717. PMC  2942870. PMID  20660643.
  7. ^ Li T, Huang S, Jiang WZ, Wright D, Spalding MH, Weeks DP, Yang B (leden 2011). „TAL nukleázy (TALN): hybridní proteiny složené z TAL efektorů a FokI DNA-štěpné domény“. Výzkum nukleových kyselin. 39 (1): 359–72. doi:10.1093 / nar / gkq704. PMC  3017587. PMID  20699274.
  8. ^ Mahfouz MM, Li L, Shamimuzzaman M, Wibowo A, Fang X, Zhu JK (únor 2011). „Hybridní nukleáza s transkripčním aktivátorem podobným transkripčnímu aktivátoru (TALE) s novou vazebnou specificitou pro DNA vytváří dvouřetězcové zlomy“. Sborník Národní akademie věd Spojených států amerických. 108 (6): 2623–8. Bibcode:2011PNAS..108,2623M. doi:10.1073 / pnas.1019533108. PMC  3038751. PMID  21262818.
  9. ^ A b C Cermak T, Doyle EL, Christian M, Wang L, Zhang Y, Schmidt C, Baller JA, Somia NV, Bogdanove AJ, Voytas DF (červenec 2011). „Efektivní design a montáž vlastního TALEN a dalších konstruktů založených na efektoru TAL pro cílení DNA“. Výzkum nukleových kyselin. 39 (12): e82. doi:10.1093 / nar / gkr218. PMC  3130291. PMID  21493687.
  10. ^ A b C d E Miller JC, Tan S, Qiao G, Barlow KA, Wang J, Xia DF, Meng X, Paschon DE, Leung E, Hinkley SJ, Dulay GP, Hua KL, Ankoudinova I, Cost GJ, Urnov FD, Zhang HS, Holmes MC , Zhang L, Gregory PD, Rebar EJ (únor 2011). "TALE nukleázová architektura pro efektivní editaci genomu". Přírodní biotechnologie. 29 (2): 143–8. doi:10,1038 / nbt.1755. PMID  21179091.
  11. ^ A b C Hockemeyer D, Wang H, Kiani S, Lai CS, Gao Q, Cassady JP, Cost GJ, Zhang L, Santiago Y, Miller JC, Zeitler B, Cherone JM, Meng X, Hinkley SJ, Rebar EJ, Gregory PD, Urnov FD Jaenisch R (červenec 2011). „Genetické inženýrství lidských pluripotentních buněk pomocí nukleáz TALE“. Přírodní biotechnologie. 29 (8): 731–4. doi:10.1038 / nbt.1927. PMC  3152587. PMID  21738127.
  12. ^ A b Wood AJ, Lo TW, Zeitler B, Pickle CS, Ralston EJ, Lee AH, Amora R, Miller JC, Leung E, Meng X, Zhang L, Rebar EJ, Gregory PD, Urnov FD, Meyer BJ (červenec 2011). „Cílená editace genomu napříč druhy pomocí ZFN a TALEN“. Věda. 333 (6040): 307. Bibcode:2011Sci ... 333..307W. doi:10.1126 / science.1207773. PMC  3489282. PMID  21700836.
  13. ^ A b Tesson L, Usal C, Ménoret S, Leung E, Niles BJ, Remy S, Santiago Y, Vincent AI, Meng X, Zhang L, Gregory PD, Anegon I, Cost GJ (srpen 2011). "Vyřazení krys generovaných mikroinjekcí TALEN do embrya". Přírodní biotechnologie. 29 (8): 695–6. doi:10,1038 / nbt.1940. PMID  21822240.
  14. ^ A b Huang P, Xiao A, Zhou M, Zhu Z, Lin S, Zhang B (srpen 2011). "Dědičné cílení genů u zebrafish pomocí přizpůsobených TALENů". Přírodní biotechnologie. 29 (8): 699–700. doi:10.1038 / nbt.1939. PMID  21822242.
  15. ^ Doyon Y, Vo TD, Mendel MC, Greenberg SG, Wang J, Xia DF, Miller JC, Urnov FD, Gregory PD, Holmes MC (leden 2011). „Posílení aktivity zinek-prst-nukleáza pomocí vylepšených obligátních heterodimerních architektur“. Přírodní metody. 8 (1): 74–9. doi:10.1038 / nmeth.1539. PMID  21131970.
  16. ^ Szczepek M, Brondani V, Büchel J, Serrano L, Segal DJ, Cathomen T (červenec 2007). „Strukturovaný redesign dimerizačního rozhraní snižuje toxicitu nukleáz se zinkovým prstem“ (PDF). Přírodní biotechnologie. 25 (7): 786–93. doi:10.1038 / nbt1317. PMID  17603476.
  17. ^ Guo J, Gaj T, Barbas CF (červenec 2010). „Řízená evoluce vylepšené a vysoce účinné domény štěpení FokI pro nukleázy se zinkovým prstem“. Journal of Molecular Biology. 400 (1): 96–107. doi:10.1016 / j.jmb.2010.04.060. PMC  2885538. PMID  20447404.
  18. ^ A b Mussolino C, Morbitzer R, Lütge F, Dannemann N, Lahaye T, Cathomen T (listopad 2011). „Nové skeletové jádro TALE umožňuje vysokou aktivitu úpravy genomu v kombinaci s nízkou toxicitou“. Výzkum nukleových kyselin. 39 (21): 9283–93. doi:10.1093 / nar / gkr597. PMC  3241638. PMID  21813459.
  19. ^ A b Zhang F, Cong L, Lodato S, Kosuri S, Church GM, Arlotta P (únor 2011). "Efektivní konstrukce sekvenčně specifických TAL efektorů pro modulaci savčí transkripce". Přírodní biotechnologie. 29 (2): 149–53. doi:10,1038 / nbt.1775. PMC  3084533. PMID  21248753.
  20. ^ Hoover D (2012). „Využití DNAWorks při navrhování oligonukleotidů pro genovou syntézu založenou na PCR“. Genová syntéza. Metody v molekulární biologii. 852. 215–23. doi:10.1007/978-1-61779-564-0_16. ISBN  978-1-61779-563-3. PMID  22328436.
  21. ^ Morbitzer R, Elsaesser J, Hausner J, Lahaye T (červenec 2011). "Sestavení vlastních vazebných domén DNA typu TALE modulárním klonováním". Výzkum nukleových kyselin. 39 (13): 5790–9. doi:10.1093 / nar / gkr151. PMC  3141260. PMID  21421566.
  22. ^ Li T, Huang S, Zhao X, Wright DA, Carpenter S, Spalding MH, Weeks DP, Yang B (srpen 2011). „Modulárně sestavené návrhářské TAL efektorové nukleázy pro cílené vyřazení genů a náhradu genů u eukaryot“. Výzkum nukleových kyselin. 39 (14): 6315–25. doi:10.1093 / nar / gkr188. PMC  3152341. PMID  21459844.
  23. ^ Geissler R, Scholze H, Hahn S, Streubel J, Bonas U, Behrens SE, Boch J (2011). Shiu S (ed.). „Transkripční aktivátory lidských genů s programovatelnou DNA-specificitou“. PLOS ONE. 6 (5): e19509. Bibcode:2011PLoSO ... 619509G. doi:10.1371 / journal.pone.0019509. PMC  3098229. PMID  21625585.
  24. ^ Weber E, Gruetzner R, Werner S, Engler C, Marillonnet S (2011). Bendahmane M (ed.). "Sestava designových TAL efektorů klonováním Golden Gate". PLOS ONE. 6 (5): e19722. Bibcode:2011PLoSO ... 619722W. doi:10.1371 / journal.pone.0019722. PMC  3098256. PMID  21625552.
  25. ^ Zhang Y, Zhang F, Li X, Baller JA, Qi Y, Starker CG, Bogdanove AJ, Voytas DF (leden 2013). „Efektivní nukleázy podobné transkripčním aktivátorům umožňují efektivní inženýrství genomu rostlin“. Fyziologie rostlin. 161 (1): 20–7. doi:10.1104 / pp.112.205179. PMC  3532252. PMID  23124327.
  26. ^ Haun W, Coffman A, Clasen BM, Demorest ZL, Lowy A, Ray E, Retterath A, Stoddard T, Juillerat A, Cedrone F, Mathis L, Voytas DF, Zhang F (září 2014). "Vylepšená kvalita sójového oleje cílenou mutagenezí rodiny genů mastných kyselin desaturázy 2". Plant Biotechnology Journal. 12 (7): 934–40. doi:10.1111 / pbi.12201. PMID  24851712.
  27. ^ Daboussi F, Leduc S, Maréchal A, Dubois G, Guyot V, Perez-Michaut C, Amato A, Falciatore A, Juillerat A, Beurdeley M, Voytas DF, Cavarec L, Duchateau P (květen 2014). „Genomové inženýrství zmocňuje rozsivku Phaeodactylum tricornutum pro biotechnologie“. Příroda komunikace. 5: 3831. Bibcode:2014NatCo ... 5.3831D. doi:10.1038 / ncomms4831. PMID  24871200.
  28. ^ A b Wienert B, Funnell AP, Norton LJ, Pearson RC, Wilkinson-White LE, Lester K, Vadolas J, Porteus MH, Matthews JM, Quinlan KG, Crossley M (2015). „Úpravy genomu za účelem zavedení prospěšné přirozeně se vyskytující mutace spojené se zvýšeným fetálním globinem“. Příroda komunikace. 6: 7085. Bibcode:2015NatCo ... 6,7085 W.. doi:10.1038 / ncomms8085. PMID  25971621.
  29. ^ Davies B, Davies G, Preece C, Puliyadi R, Szumska D, Bhattacharya S (2013). „Site specific mutation of the Zic2 locus by mikroinjection of TALEN mRNA in mouse CD1, C3H and C57BL / 6J oocytes“. PLOS ONE. 8 (3): e60216. Bibcode:2013PLoSO ... 860216D. doi:10.1371 / journal.pone.0060216. PMC  3610929. PMID  23555929.
  30. ^ Sander JD, Cade L, Khayter C, Reyon D, Peterson RT, Joung JK, Yeh JR (srpen 2011). „Cílené narušení genu v somatických buňkách zebrafish pomocí inženýrsky upravených TALENů“. Přírodní biotechnologie. 29 (8): 697–8. doi:10.1038 / nbt.1934. PMC  3154023. PMID  21822241.
  31. ^ Wu H, Wang Y, Zhang Y, Yang M, Lv J, Liu J, Zhang Y (březen 2015). „Knockin zprostředkovaný TALE nickázou SP110 poskytuje skotu zvýšenou odolnost proti tuberkulóze“. Sborník Národní akademie věd Spojených států amerických. 112 (13): E1530-9. Bibcode:2015PNAS..112E1530W. doi:10.1073 / pnas.1421587112. PMC  4386332. PMID  25733846.
  32. ^ Ponce de León V, Mérillat AM, Tesson L, Anegón I, Hummler E (2014). "Generování TALEN zprostředkovaných knock-in krys pomocí homologní rekombinace". PLOS ONE. 9 (2): e88146. Bibcode:2014PLoSO ... 988146P. doi:10.1371 / journal.pone.0088146. PMC  3921256. PMID  24523878.
  33. ^ A b C Carlson DF, Fahrenkrug SC, Hackett PB (leden 2012). „Cílení na DNA pomocí prstů a TALENů“. Molekulární terapie. Nukleové kyseliny. 1 (3): e3. doi:10.1038 / mtna.2011.5. PMC  3381595. PMID  23344620.
  34. ^ Ramalingam S, Annaluru N, Kandavelou K, Chandrasegaran S (2014). „Generace zprostředkovaná TALENEM a genetická korekce pluripotentních kmenových buněk indukovaných lidskými chorobami“. Současná genová terapie. 14 (6): 461–72. doi:10.2174/1566523214666140918101725. PMID  25245091.
  35. ^ Dupuy A, Valton J, Leduc S, Armier J, Galetto R, Gouble A, Lebuhotel C, Stary A, Pâques F, Duchateau P, Sarasin A, Daboussi F (2013). „Cílená genová terapie buněk xeroderma pigmentosum pomocí meganukleázy a TALEN ™“. PLOS ONE. 8 (11): e78678. Bibcode:2013PLoSO ... 878678D. doi:10.1371 / journal.pone.0078678. PMC  3827243. PMID  24236034.
  36. ^ Osborn MJ, Starker CG, McElroy AN, Webber BR, Riddle MJ, Xia L, DeFeo AP, Gabriel R, Schmidt M, von Kalle C, Carlson DF, Maeder ML, Joung JK, Wagner JE, Voytas DF, Blazar BR, Tolar J (červen 2013). „Korekce genu pro epidermolysis bullosa na základě TALEN“. Molekulární terapie. 21 (6): 1151–9. doi:10,1038 / mt.2013,56. PMC  3677309. PMID  23546300.
  37. ^ Valton J, Guyot V, Marechal A, Filhol JM, Juillerat A, Duclert A, Duchateau P, Poirot L (září 2015). „Konstrukční CAR buňka odolná proti více lékům pro alogenní kombinovanou imunoterapii“. Molekulární terapie. 23 (9): 1507–18. doi:10.1038 / mt.2015.104. PMC  4817890. PMID  26061646.
  38. ^ Poirot L, Philip B, Schiffer-Mannioui C, Le Clerre D, Chion-Sotinel I, Derniame S, Potrel P, Bas C, Lemaire L, Galetto R, Lebuhotel C, Eyquem J, Cheung GW, Duclert A, Gouble A, Arnould S, Peggs K, Pule M, Scharenberg AM, Smith J (září 2015). „Multiplexní genomem upravená výrobní platforma pro T-buňky pro„ off-the-police “adoptivní imunoterapie T-buňkami“. Výzkum rakoviny. 75 (18): 3853–64. doi:10.1158 / 0008-5472.CAN-14-3321. PMID  26183927.
  39. ^ Boissel S, Jarjour J, Astrakhan A, Adey A, Gouble A, Duchateau P, Shendure J, Stoddard BL, Certo MT, Baker D, Scharenberg AM (únor 2014). „megaTALs: architektura štěpení nukleáz pro terapeutické genomové inženýrství. Výzkum nukleových kyselin. 42 (4): 2591–601. doi:10.1093 / nar / gkt1224. PMC  3936731. PMID  24285304.
  40. ^ „Klady a zápory ZFNS, TALENS A CRISPR / CAS“. Jacksonova laboratoř. Březen 2014.
  41. ^ Boglioli, Elsy; Richard, Magali. „Boston Consulting Group - Zpráva o přesnosti úpravy genů“ (PDF).

externí odkazy