Synapto-pHluorin - Synapto-pHluorin - Wikipedia

Synapto-pHluorin je geneticky kódovaný optický indikátor uvolňování a recyklace vezikul. Používá se v neurovědy studovat uvolnění vysílače. Skládá se z formy citlivé na pH zelený fluorescenční protein (GFP) fúzovaný k luminální straně a membránový protein spojený s vezikuly (VAMP). Při kyselém pH uvnitř váčků vysílače je synapto-pHluorin nefluorescenční (uhasit ). Když se vezikuly uvolní, je synapto-pHluorin vystaven neutrálnímu extracelulárnímu prostoru a presynaptický terminál začne jasně fluoreskovat. Následující endocytóza se vezikuly znovu okyselí a cyklus může začít znovu. Chemikálie alkalizace všech vezikul se často používá pro normalizaci signálů synapto-pHluorinu. Synapto-pHluorin někdy sestává z žlutý fluorescenční protein (YFP) sledovat cytoplazmu, protože její pKA je vyšší než GFP (7,1 oproti 6,0).[1]

Dějiny

Synapto-pHluorin vynalezl Gero Miesenböck v roce 1998.[2]V roce 2006 byla vydána vylepšená verze s použitím synaptophysin zaměřit GFP na vezikuly.[3] V roce 2013 byl zaveden dvoubarevný snímač uvolnění (ratio-sypHy), který určoval velikost recyklační fond na jednotlivých synapsích.[4]

Aplikace

Synapto-pHluorin používají neurobiologové hlavně ke studiu uvolňování vysílače a recyklace na presynaptické terminály.[4] Bylo také použito ke studiu inzulín sekrece v beta buňky z slinivka břišní.[5]

Reference

  1. ^ Ashby MC, Ibaraki K, Henley JM (2004) Je to venku zelené: sledování proteinů na povrchu buněk pomocí pH citlivého GFP. TRENDY v Neuroscience 27 (5): 257-61
  2. ^ Miesenböck G, De Angelis DA, Rothman JE (1998) Vizualizace sekrece a synaptického přenosu pomocí pH citlivých zelených fluorescenčních proteinů. Nature 394 (6689): 192-5.
  3. ^ Granseth B, Odermatt B, Royle SJ, Lagnado L. (2006) Klatrinem zprostředkovaná endocytóza je dominantním mechanismem získávání vezikul v hipokampálních synapsích. Neuron 51 (6): 773-86
  4. ^ A b Rose, Tobias; Schoenenberger, Philipp; Jezek, Karel; Oertner, Thomas G. (2013). „Vylepšení vývoje cyklování vezikul ve společnosti Schaffer Collateral Synapses“. Neuron. 77 (6): 1109–1121. doi:10.1016 / j.neuron.2013.01.021. PMID  23522046.
  5. ^ Tsuboi T, Rutter GA (2003) Více forem exocytózy „polibek a běh“ odhalené mikroskopií s evanescentními vlnami. Curr Biol. 13 (7): 563-7.