Test difúze disku - Disk diffusion test

Nesmí být zaměňována s Kleihauer – Betke test, který se také často nazývá „test KB“.
Metoda disk-difúzní agar testuje účinnost antibiotik na konkrétní mikroorganismus. Agarová destička je nejdříve natřena bakteriemi a poté jsou na ni umístěny papírové disky s antibiotiky. Bakterie se poté nechají růst na agarovém médiu a poté se sleduje růst a účinek antibiotika na něj. Velikost prostoru kolem každého disku s antibiotiky naznačuje smrtelnost tohoto antibiotika pro dotyčné bakterie. Vysoce účinná antibiotika (disk C) vyprodukují široký kruh bez bakteriálního růstu, zatímco neúčinná antibiotika (disk A) nevykazují vůbec žádnou změnu koncentrace bakterií v okolí. Účinnost meziproduktových antibiotik (disk B) lze měřit pomocí jejich inhibiční zóny. Tato metoda se používá k určení nejlepšího antibiotika, které se použije proti novému patogenu nebo rezistentnímu patogenu.

The test difúze diskunebo agarový difúzní testnebo Kirby – Bauerův test (disk-difuzní test citlivosti na antibiotika, diskový difuzní test na citlivost na antibiotika, KB test), je test citlivosti na antibiotika. Využívá disky s antibiotiky k testování rozsahu, v jakém jsou bakterie těmito antibiotiky ovlivněna. V tomto testu jsou oplatky obsahující antibiotika umístěny na agar destička, na kterou byly umístěny bakterie, a destička je ponechána inkubovat. Pokud je to antibiotikum zastaví růst bakterií nebo zabíjí bakterie kolem oplatky bude oblast, kde bakterie nenarostly natolik, aby byly viditelné.[1][2] Tomu se říká zóna inhibice.

Velikost této zóny závisí na mnoha faktorech, jedním je, jak účinné je antibiotikum při zastavení růstu bakterie. Dalším faktorem, který ovlivní velikost zóny, je difúze antibiotika v agarovém médiu a liší se podle molekulární konfigurace antibiotika. Jakmile je průměr zóny změřen, musí být porovnán s databází zónových standardů, aby se zjistilo, zda je sledovaná bakterie citlivá, středně citlivá nebo rezistentní na dané antibiotikum.

Čistá bakteriální kultura se suspenduje v pufru, standardizuje se na zákal a rovnoměrně se otírá přes kultivační destičku. Poté se na povrch agaru umístí kotouč z filtračního papíru impregnovaný testovanou sloučeninou. Sloučenina difunduje z filtračního papíru do agaru. Koncentrace sloučeniny bude nejvyšší vedle disku a bude se snižovat s rostoucí vzdáleností od disku. Pokud je sloučenina účinná proti bakteriím při určité koncentraci, nebudou růst žádné kolonie, kde je koncentrace v agaru větší nebo rovna účinné koncentraci. Toto je zóna inhibice. To spolu s rychlostí difúze antibiotik se používá k odhadu citlivosti bakterií na dané antibiotikum. Větší zóny obecně korelují s menšími minimální inhibiční koncentrace (MIC) antibiotika pro tyto bakterie. Inhibice produkovaná testem se porovnává s inhibicí produkovanou známou koncentrací referenční sloučeniny. Tyto informace lze použít k výběru vhodných antibiotik pro boj s konkrétní infekcí.[3]

Standardizace

Detailní pohled na výsledky testu difúze agaru.

Inokulace se provede kultivačním médiem zředěným tak, aby odpovídalo 0,5 McFarlandův standard zákalu, což je zhruba ekvivalent 150 milionů buňky na ml.

Kirby – Bauer testování: Bílé destičky obsahující antibiotika zobrazené na štítku bakterie. Kruhy špatného růstu bakterií obklopují některé oplatky, což naznačuje náchylnost k antibiotiku

Příprava

Všechny aspekty postupu podle Kirbyho-Bauera jsou standardizovány, aby se zajistily konzistentní a přesné výsledky. Z tohoto důvodu musí laboratoř tyto standardy dodržovat. Média použitá při testování Kirby – Bauera musí být Mueller-Hintonův agar při hloubce pouze 4 mm se nalije do Petriho misky o průměru 100 mm nebo 150 mm. The pH hladina agaru musí být mezi 7,2 a 7,4.

Inkubační postup

  1. Pomocí aseptická technika, místo a sterilní tampon do vývar kultura konkrétního organismu a poté jemně odstraňte přebytečnou tekutinu jemným stisknutím nebo otočením tamponu proti vnitřku zkumavky.
  2. Pomocí tamponu rozetřete Mueller-Hintonův agar ploténku za vzniku bakteriálního trávníku.
    • Chcete-li dosáhnout rovnoměrného růstu, naneste destičku tamponem v jednom směru, otočte destičku o 90 ° a destičku znovu provlečte v tomto směru.
    • Tuto rotaci opakujte třikrát.
  3. Nechejte destičku přibližně 5 minut zaschnout.
  4. K dávkování disků obsahujících specifická antibiotika na destičku použijte dávkovač disků s antibiotiky.
  5. Pomocí kleští sterilizovaných plamenem jemně přitlačte každý disk k agaru, abyste se ujistili, že je disk připojen k agaru.
  6. Destičky by měly být inkubovány přes noc při inkubace teplota 37 ° C (98,6 ° F).[4]
Petriho misky vykazující zónu inhibice různými extrakty, jako je petrolether, chloroform, ethanol a aceton[5]

Metoda Oxford penicilinového kelímku

Disky obsahující zvyšující se koncentrace antibiotika se umístí na naočkovaný bakteriální trávník na povrchu agaru a destičky se inkubují. Velikost zón se měří od okraje disku po konec čisté zóny. Interpretace je složitější u populací se smíšenou citlivostí (srov. BSAC ). Ty jsou vyneseny jako lineární rozměry nebo čtverce vzdáleností jako funkce přirozeného logaritmu koncentrace antibiotika v discích. MIC se stanoví z nulového průsečíku lineární regrese procházející daty (srov. agardiffusion.com ). Samotný odposlech je logaritmus MIC. Sklon regresní přímky souvisí s difuzním koeficientem konkrétního antibiotika v agaru.[6]

Viz také

Další čtení

  • Bauer, Alfred W. (1. srpna 1959). "Jednodiskové testování citlivosti na antibiotika stafylokoků". Archiv vnitřního lékařství. 104 (2): 208–16. doi:10.1001 / archinte.1959,00270080034004. PMID  13669774.
  • Bauer, AW; Kirby, WM; Sherris, JC; Turck, M (duben 1966). "Testování citlivosti na antibiotika standardizovanou metodou jednoho disku". American Journal of Clinical Pathology. 45 (4): 493–6. doi:10.1093 / ajcp / 45.4_ts.493. PMID  5325707.
  • Bauer, AW; Kirby, WM; Sherris, JC; Turck, M (březen 1966). "Testování citlivosti na antibiotika standardizovanou metodou jednoho disku". Technický zpravodaj Registru lékařských technologů. 36 (3): 49–52. PMID  5908210.

Reference

  1. ^ "Bakteriální osvětlení" (PDF). Citováno 2013-05-24.
  2. ^ Brown DF, Kothari D (1975). „Porovnání antibiotických disků z různých zdrojů“. J. Clin. Pathol. 28 (10): 779–83. doi:10.1136 / jcp.28.10.779. PMC  475859. PMID  1214010.
  3. ^ Mohanty, A. (2010): Fyziochemická a antimikrobiální studie polyherbalu. Pharmacie globale. Sv. 4 (4) 1-3.
  4. ^ „Archivovaná kopie“. Archivovány od originál dne 31. 7. 2013. Citováno 2013-09-01.CS1 maint: archivovaná kopie jako titul (odkaz)
  5. ^ Sahu B K, Antimikrobiální vlastnosti vzdušné části Sesbania grandiflora (Linn.), The Pharmaceutical college Barpali, India, * th semester Project 2013
  6. ^ Bonev, B; Hooper, J; Parisot, J (červen 2008). „Zásady hodnocení citlivosti bakterií na antibiotika metodou difúze agaru“. The Journal of Antimicrobial Chemotherapy. 61 (6): 1295–301. doi:10.1093 / jac / dkn090. PMID  18339637.