Bouinovo řešení - Bouin solution - Wikipedia

Bouinovo řešenínebo Bouinovo řešení, je sloučenina fixační použito v histologie.[1] To bylo vynalezeno francouzským biologem Pol Bouin a skládá se z kyselina pikrová, octová kyselina a formaldehyd ve vodném roztoku. [2] Bouinova tekutina je zvláště užitečná pro fixaci gastrointestinální trakt biopsie, protože tento fixační prostředek umožňuje ostřejší a lepší jaderný barvení než 10% neutrálně pufrovaného formalinu. Není to dobrý fixátor, když tkáň ultrastruktura musí být zachovány pro elektronová mikroskopie. Je to však dobrý fixační prostředek, když musí být zachována tkáňová struktura s jemnou a jemnou strukturou. Kyselina octová v tomto fixátoru lýzy červené krvinky a rozpouští malé usazeniny železa a vápníku ve tkáních. Varianta, ve které je kyselina octová nahrazena kyselina mravenčí lze použít jak k fixaci tkáně, tak k odvápnění.[3] Účinky tří chemických látek v roztoku Bouin se navzájem vyrovnávají. Formalin způsobuje, že cytoplazma se stává bazofilní, ale tento účinek je vyvážen účinkem kyseliny pikrové. To má za následek vynikající nukleární a cytoplazmatické Barvení H&E. Účinek formalinu na vytvrzování tkání je vyvážen fixací měkkých tkání kyselinou pikrovou a octovou. Účinek kyseliny octové na bobtnání je vyvážen účinkem kyseliny pikrové na zmenšení tkáně.[4]

Hydratované části tkáně fixované formaldehydem jsou obvykle předem ošetřeny Bouinovým roztokem, aby se získaly správné výsledky v trichromové skvrny pro kontrastní barvy v kolagenních a cytoplazmatických (svalových) vláknech. Trichromové metody byly vyvinuty pro tkáně fixované v kyselých směsích obsahujících chlorid rtuťnatý, které se nyní používají pouze v malém měřítku.) K provedení této korekce trichromového barvení je zapotřebí pouze Bouicova roztoku v kyselině pikrové.[5]

Při použití řešení Bouin může vzniknout několik potenciálních problémů. Kvůli formalinu v roztoku může být při prohlížení tkáňových řezů pod mikroskopem přítomen formalinový pigment. Mokrá tkáň by měla být fixována v Bouinově roztoku po dobu kratší než 24 hodin. Přebytečná kyselina pikrová by měla být z tkáně vymyta pomocí několika roztoků alkoholu a vody, jinak by se časem mohla zhoršit kvalita barvení. Mokrá tkáň fixovaná v Bouinově roztoku by měla být skladována spíše v roztoku alkoholu a vody než v Bouinově roztoku. Jelikož roztok Bouin obsahuje formaldehyd, kyselinu pikrovou a kyselinu octovou, měla by být pro tyto látky přijata příslušná bezpečnostní opatření a dodržovány předpisy. Zejména skutečnost, že kyselina pikrová může být výbušná, citlivá na tření a nárazy, když je suchá a je v kontaktu s některými kovy, může vytvářet nestabilní kovové pikráty.

Pod názvem „Bouinova tekutina“ se tento fixační prostředek také široce používá u mořských bezobratlých.[6] Připravuje se takto: kyselina pikrová, nasycený vodný roztok - 75 ml; 40% vodný roztok formalinu - 25 ml; kyselina octová, ledová - 5 ml.[7]

Variace

Ženské řešení

Řešení Gendre je alkoholová verze řešení Bouin. Při výrobě tohoto roztoku se místo vodného roztoku nasyceného kyselinou pikrovou použije alkoholový roztok nasycený kyselinou pikrovou. Toto řešení je užitečné, když glykogen a další sacharidy musí být konzervovány ve tkáni. Je připraven smícháním nasyceného roztoku kyseliny pikrové v 95% ethanolu (80 ml) s formalinem (37-40% formaldehyd) (15 ml) a ledovou kyselinou octovou (5 ml).[8] Gendrovo fixační činidlo obsahuje více kyseliny pikrové než Bouinovo, protože má větší rozpustnost (6,23% hmotn./obj.) V ethanolu než ve vodě (1,23% hmotn./obj.).[9]

Hollandovo řešení

Řešení Hollande je verze řešení Bouin, která obsahuje octan měďnatý. Octan měďnatý stabilizuje membrány červených krvinek a granule z eosinofily a endokrinní buňky, takže dochází k menší lýze těchto buněčných složek, než k jaké dochází v běžném Bouinově roztoku.[10] Hollandův fixační prostředek se vyrábí přidáním 6,25 g octanu měďnatého, 10 g kyseliny pikrové (vlhký prášek), 25 ml formalinu (37-40% formaldehyd) a 2,5 ml ledové (100%) kyseliny octové do 250 ml vody.[11]

Reference

  1. ^ Carson, Freida L .; Hladik, Christa (2009). Histotechnology: Samoučivý text (3. vyd.). Hongkong: Americká společnost pro klinickou patologii Lis. str. 19. ISBN  978-0-89189-581-7.
  2. ^ Culling, C.F.A. 1974. Příručka histopatologických a histochemických technik (včetně muzejních technik), 3. vyd. London: Butterworths, s. 49.
  3. ^ Bancroft, John D .; Gamble, Marilyn, eds. (2008). Teorie a praxe histologických technik (6. vyd.). Čína: Churchill Livingstone Elsevier. str. 72. ISBN  978-0-443-10279-0.
  4. ^ Baker, J. R. 1958. Principy biologické mikrotechniky. London, Methuen, pp.149-150.
  5. ^ Kiernan, J.A. 2015 Histologické a histochemické metody. Teorie a praxe. Banbury, Velká Británie: Scion, str.195.
  6. ^ Lincoln, Roger J .; Sheals, John Gordon, eds. (1979). Bezobratlí zvířata - sběr a konzervace (1. vyd.). UK: Britské muzeum (přírodní historie). str. 128. ISBN  0 521 296773.
  7. ^ Culling, C.F.A. 1974. Příručka histopatologických a histochemických technik (včetně muzejních technik), 3. vyd. London: Butterworths, s. 49.
  8. ^ Culling, C.F.A. 1974. Příručka histopatologických a histochemických technik (včetně muzejních technik), 3. vyd. London: Butterworths, s. 49.
  9. ^ Dean, J.A. 1973. Lange's Handbook of Chemistry, 11. vydání. New York: McGraw-Hill, s. 7-383.
  10. ^ Carson, Freida L .; Hladik, Christa (2009). Histotechnology: Samoučivý text (3. vyd.). Hongkong: Americká společnost pro klinickou patologii Lis. str. 19. ISBN  978-0-89189-581-7.
  11. ^ Gray, P. 1954. Microtomist's Formulary and Guide. Přetištěno v roce 1975. Huntington, NY: Kreiger, s. 220.