Přechodný výraz - Transient expression

Přechodný výraz, častěji odkazováno na „přechodná genová exprese„, je dočasný exprese genů které jsou vyjádřeny krátce po a nukleová kyselina, nejčastěji plazmid DNA kódování expresní kazety, bylo zavedeno do eukaryotický buňky. Většina přechodných genových expresí se provádí kultivovanými zvířecími buňkami. Tato technika se také používá v rostlinných buňkách; přenos nukleových kyselin do těchto buněk však vyžaduje jiné metody než metody se zvířecími buňkami. U rostlin i zvířat by přechodná exprese měla vést k časově omezenému použití přenesených nukleových kyselin, protože jakákoli dlouhodobá exprese by se nazývala „stabilní exprese“.

Metodika se liší v závislosti na transformovaném organismu. Zatímco rostliny lze transformovat pomocí konstruktu zavedeného do Agrobacterium tumefaciens prostřednictvím agroinfiltrace nebo květinový dip, většina živočišných buněk by vyžadovala a virový vektor.

Nějaký houby, jako droždí nebo zygomycota, jsou náchylní k proměna dedifferentací jejich hyfy na protoplasty a přidání Cl2Ca 10–50 mM, Tris -HCl 10 mM, polyethylenglykol (40%) a DNA konstrukt (> 5 ug / ml) na 10 ^ 8 protoplastů / ml roztoku. Za těchto podmínek pH působí PEG jako a pořadač, podpora protoplastů ke shlukování a zachycení zavedených řetězců DNA. Tento proces má relativně vysokou účinnost, a to navzdory skutečnosti, že eukaryotických buněk je hojně exonukleázy které degradují exogenní DNA.

Reference

externí odkazy

  • Canto, Tomáš (2016). "Systémy přechodného vyjádření v rostlinách: Potenciály a omezení". Pokroky v experimentální medicíně a biologii. 896: 287–301. doi:10.1007/978-3-319-27216-0_18. hdl:10261/135535. ISBN  978-3-319-27214-6. ISSN  0065-2598. PMID  27165332.
  • Grimsley, N .; Hohn, B .; Hohn, T .; Walden, R. (květen 1986). ""Agroinfekce, „alternativní způsob virové infekce rostlin pomocí Ti plazmidu“. Sborník Národní akademie věd Spojených států amerických. 83 (10): 3282–3286. doi:10.1073 / pnas.83.10.3282. ISSN  0027-8424. PMC  323497. PMID  16593697.
  • Patrick, Marcy. „Plasmids 101: Yeast Vectors“. blog.addgene.org.
  • „Přechodný vs. stabilní výraz“. www.genscript.com.