Test doplňování tetraploidů - Tetraploid complementation assay

The test doplňování tetraploidů je technika v biologii, ve které buňky dvou savčí embrya jsou kombinovány za vzniku nového embrya.^[1] Používá se ke konstrukci geneticky modifikované organismy, ke studiu důsledků určitých mutací na embryonální vývoj a ke studiu pluripotentní kmenové buňky.

Postup

Normální savec somatické buňky jsou diploidní: každý chromozóm (a tedy každý gen ) je přítomen v duplikátu (kromě genů z X chromozomu chybí v chromozomu Y). Test začíná produkcí a tetraploidní buňka, ve které každý chromozom existuje čtyřikrát. To se provádí odebráním embrya ve fázi dvou buněk a fúzí těchto dvou buněk pomocí elektrického proudu. Výsledná tetraploidní buňka se bude i nadále dělit a všechny dceřiné buňky budou také tetraploidní.

Takové tetraploidní embryo se může normálně vyvinout blastocyst fáze a vůle implantát ve zdi děloha. Tetraploidní buňky mohou tvořit extraembryonální tkáň (placenta, atd.); ale pořádný plod bude zřídka vyvíjet.

V testu tetraploidní komplementace se nyní kombinuje takové tetraploidní embryo (buď na morula nebo blastocyst fázi) s normálním diploidem embryonální kmenové buňky (ES) z jiného organismu. Embryo se poté bude normálně vyvíjet; plod pochází výlučně z buněk ES, zatímco extraembryonální tkáně jsou výlučně odvozeny z tetraploidních buněk.

Aplikace

• Cizí geny nebo mutace mohou být do buněk ES zavedeny poměrně snadno a tyto buňky ES pak mohou být pěstovány na celá zvířata pomocí testu tetraploidní komplementace.
• Zavedením cílených mutací do tetraploidních buněk a / nebo do buněk ES lze studovat, které geny jsou důležité pro vývoj plodu a které z nich jsou důležité pro vývoj mim embryonálních tkání.
• Test tetraploidní komplementace se také používá k testování, zda indukované pluripotentní kmenové buňky (kmenové buňky uměle vyrobené z diferencovaných buněk, např. z kožních buněk) jsou stejně kompetentní jako normální embryonální kmenové buňky. Pokud lze z indukované pluripotentní kmenové buňky produkovat životaschopné zvíře pomocí testu tetraploidní komplementace, pak se indukované kmenové buňky považují za ekvivalentní embryonálním kmenovým buňkám. Toto bylo poprvé představeno v roce 2009.^[2]

Reference