Pulse-chase analýza - Pulse-chase analysis

Pulse-chase analýza auxin signální transdukce v an Arabidopsis thaliana divoký typ a mutant axr2-1. Sazenice divokého typu a axr2-1 byly označeny 35S-methionin a protein AXR2 / axr2-1 byl imunoprecipitovaný buď bezprostředně po období označování (t = 0), nebo po 15minutovém pronásledování neznačeným methioninem (t = 15).

V biochemii a molekulární biologii, a pulzní chase analýza je metoda pro zkoumání buněčného procesu probíhajícího v čase postupným vystavením buněk značené sloučenině (puls) a poté stejné sloučenině v neznačené formě (chase).[1]

Mechanismus

Vybraná buňka nebo skupina buněk je nejprve vystavena značené sloučenině (pulsu), která má být začleněna do molekuly nebo systému, který je studován (viz také pulzní značení ). Sloučenina poté prochází metabolickými cestami a používá se při syntéze studovaného produktu. Například radioaktivně označená forma leucin (3H-leucin) lze dodat skupině pankreatické beta buňky, který poté použije tuto aminokyselinu v inzulín syntéza.

Krátce po zavedení značené sloučeniny (obvykle asi 5 minut, ale skutečná potřebná doba závisí na studovaném objektu), se do prostředí zavádí přebytek stejné, ale neoznačené látky (chase). Podle předchozího příkladu byla výroba inzulín bude pokračovat, ale již nebude obsahovat radioaktivní látky leucin zavedena v pulzní fázi a nebyla by viditelná pomocí radioaktivních detekčních metod. Pohyb značeného inzulínu produkovaného během pulzní periody však mohl být stále sledován v buňce.[2]

Použití

Tato metoda je užitečná pro stanovení aktivity určitých buněk po delší dobu. Tato metoda byla použita ke studiu protein kináza C., ubikvitin a mnoho dalších proteinů. Metoda byla také použita k prokázání existence a funkce Okazaki fragmenty. George Palade použila pulsní honičku radioaktivních aminokyselin k objasnění sekreční cesta.[3][4]

Reference

  1. ^ Takahashi M, Ono Y (2003). „Pulse-chase analysis of protein kinase C“. Methods Mol. Biol. 233: 163–70. doi:10.1385/1-59259-397-6:163. ISBN  978-1-59259-397-2. PMID  12840506.
  2. ^ Ferguson PL, Coombs DH (březen 2000). "Pulse-chase analýza in vivo sestavení bakteriofágového T4 ocasu". J. Mol. Biol. 297 (1): 99–117. doi:10.1006 / jmbi.2000.3551. PMID  10704310.
  3. ^ Hoyt MA, Zich J, Takeuchi J, Zhang M, Govaerts C, Coffino P (duben 2006). „Opakování glycin-alanin narušují správné rozvinutí substrátu proteazomem“. EMBO J.. 25 (8): 1720–9. doi:10.1038 / sj.emboj.7601058. PMC  1440830. PMID  16601692. Obrázky a tabulky - zobrazující analýzu pulzně-chase
  4. ^ Alberts, B. (březen 2002). Molekulární biologie buňky, čtvrté vydání. ISBN  978-0-8153-3218-3.