Nick překlad - Nick translation

Nick překlad^[1] (nebo překlad hlavy), vyvinutý v roce 1977 Peterem Rigbym a Paulem Bergem, je a označování technika v molekulární biologie ve kterém DNA polymeráza I se používá k nahrazení některých nukleotidů a DNA Sekvence s jejich značenými analogy vytváří značenou sekvenci DNA, kterou lze použít jako sondu v fluorescenční hybridizace in situ (FISH) nebo blot techniky. Může být také použit pro radioznačení.^[2]

Tento proces se nazývá nick translation, protože zpracovávaná DNA je ošetřena DNAázou za vzniku jednovláknových „nicků“. Poté následuje nahrazení na přezdívaných stránkách znakem DNA polymeráza I, která prodlužuje 3 'hydroxylový konec, odstranění nukleotidů aktivitou 5'-3 'exonukleázy a jejich nahrazení dNTP. K radioaktivnímu značení fragmentu DNA pro použití jako sondy při blotovacích postupech je jeden z inkorporovaných nukleotidů poskytnutých v reakci radioaktivně značen v alfa fosfátová poloha. Podobně může být místo toho připojen fluorofor pro fluorescenční značení nebo antigen pro imunodetekci. Když se DNA polymeráza I nakonec oddělí od DNA, zanechá ve fosfátové páteři další nick. Nick si „přeložil“ určitou vzdálenost v závislosti na procesivita polymerázy. Tento nick mohl být zapečetěn DNA ligáza nebo její 3 'hydroxylová skupina může sloužit jako templát pro další aktivitu DNA polymerázy I. Proprietární enzymové směsi jsou komerčně dostupné pro provedení všech kroků postupu v jediné inkubaci.

Translace Nicku by mohla způsobit přerušení dvouřetězcové DNA, pokud DNA polymeráza I narazí na další nick na opačném řetězci, což povede ke dvěma kratším fragmentům. To nemá vliv na výkon značené sondy při hybridizaci in situ.

Reference

^ Rigby PW, Dieckmann M, Rhodes C, Berg P (červen 1977). "Značení deoxyribonukleové kyseliny na vysokou specifickou aktivitu in vitro translací nicku s DNA polymerázou I". J. Mol. Biol. 113 (1): 237–51. doi:10.1016/0022-2836(77)90052-3. PMID 881736.
^ Mathew CG (1985). "Radioaktivní značení DNA překladem přezdívek". Nukleové kyseliny. Methods Mol. Biol. 2. 257–61. doi:10.1385/0-89603-064-4:257. ISBN 0-89603-064-4. PMID 21374202.

Tento genetika článek je a pahýl. Wikipedii můžete pomoci pomocí rozšiřovat to.

[1] Rigby PW, Dieckmann M, Rhodes C, Berg P (červen 1977). "Značení deoxyribonukleové kyseliny na vysokou specifickou aktivitu in vitro translací nicku s DNA polymerázou I". J. Mol. Biol. 113 (1): 237–51. doi:10.1016/0022-2836(77)90052-3. PMID 881736.

[2] Mathew CG (1985). "Radioaktivní značení DNA překladem přezdívek". Nukleové kyseliny. Methods Mol. Biol. 2. 257–61. doi:10.1385/0-89603-064-4:257. ISBN 0-89603-064-4. PMID 21374202.

[1]

[2]