Durrum D-500 - Durrum D-500

The Analyzátor aminokyselin D-500 byl navržen a vyroben společností Durrum Instruments na konci 60. let. Používalo ji mnoho prestižních univerzit a výzkumných zařízení k testování přítomnosti a množství aminokyselin v biologických vzorcích. V té době se Durrum nacházel na Fabian Way, Palo Alto, Kalifornie, který byl rodištěm mnoha high-tech společností. D-500 pracuje pomocí iontoměničová chromatografie.

Úkon

A vzorek je nejprve vykreslen do kapalné formy pomocí a technik. Malé množství této kapaliny (obvykle řádově desítek mikrolitrů) se poté vstřikuje do držáku naplněného superjemným pryskyřice korálky od Diamond Shamrock; držák se poté ručně zasune do analyzátoru.

D-500 je řízen a PDP-8 počítač, který ovládá elektrické čerpadlo s pístem vyrobeným ze syntetiky rubín usnadnit velmi přesný tok hydraulická kapalina k pohonu sestavy mechanického beranu - tato sestava má osm injekčních stříkaček, čtyři na každé straně, každá je naplněna kapalný pufr s různým pH. Pufrovací roztoky se poté promyly přes držák vzorku a do jiné zkumavky naplněné pryskyřičnými kuličkami, která měla vnitřní průměr řádově padesát mikrometry (o průměru lidského vlasu).

PDP-8 se také používá k řízení teploty separační trubice. Protože různé aminokyseliny mají různé molekulové hmotnosti a velikosti, promývají se separační trubicí při různých rychlostech. Na spodním konci separační trubice se smíchá s odpadní vodou ninhydrin, chemická látka, která mění barvu za přítomnosti aminy, součást aminokyselin.

A kolorimetr prochází přesně řízené světlo vlnové délky přes řadu čoček a odtok do světelného senzoru na druhé straně proudu tekutiny. Výstup kolorimetru se poté přenese zpět do počítače ke zpracování. Výstup se skládá z výtisku do dálnopis a graf nakreslený zapisovačem pera a inkoustu.

Jakmile je proces dokončen, počítač určí čas a procento každé přítomné aminokyseliny při výstupu z oddělovací trubice.

Protože jiné molekuly procházejí pryskyřičnou trubicí při různých rychlostech, přičemž graf výstupů kolorimetru v čase ukazuje, která aminokyselina je přítomna. Množství světla procházejícího kolorimetrem určuje procento změny od základní čáry, která se nastavuje během kalibrace.

Kalibrace

Každá separační trubka musela být instalována technikem vyškoleným v továrně a rekalibrace vyžadovala dny testování a výpočtu základních linií. Po kalibraci mohou být výsledky analýzy ovlivněny:

  1. objem průtoku pufru (který mění časy oddělování mezi různými aminokyselinami - řízen rychlostí pumpy s rubínovým pístem); průtok je také ovlivněn vnitřním průměrem tuby, velikostí pryskyřičných korálků a tím, jak pevně jsou baleny uvnitř tuby.
  2. velikost vzorku (kontrolovaná technikem, který připravuje vzorek)
  3. teplota trubice z pryskyřičných kuliček[1]
  4. objem ninhydrin přidán do odpadní vody
  5. pH pufru použitého k promytí vzorku pryskyřičnými kuličkami

Všechny tyto faktory vyžadují pečlivou kontrolu a monitorování.

Drobné problémy s designem

Poznámky

  1. ^ příliš vysoká a vzorek bude zničen, příliš nízký a vzorek se neoddělí

Reference

  • Benson, J.R .; Louie, P.C .; Bradshaw, R.A. (1981), „Aminokyselinová analýza peptidů“ v „The Peptides“, ed. Gross & Meienhofer, 4, New York: Academic Press
  • Oxidační modifikace glutamin syntetázy