Calcofluor-bílá - Calcofluor-white - Wikipedia

Calcofluor-bílá nebo CFW je fluorescenční modré barvivo, které se používá k vazbě na polysacharidové polymery amebických cyst. Funguje tak, že je schopen se vázat na 1-3 beta a 1-4 beta polysacharidy na chitinu a celulóze, která je přítomna v buněčných stěnách hub, rostlin a řas.

Fluorescenční barvení kvasinek kalkofluorově bílou. Kvasinky vykazují živou modrou barvu buněčných stěn.

v biologie rostlinných buněk výzkumu, používá se pro barvení buněčné stěny oba řasy a vyšší rostliny.[1][2]
Je také užitečné v lék a biologie zvířat pro identifikaci houby v tkáň,[1][3][4] (váže se na chitin v buněčných stěnách hub).

Používání

Lék

CFW lze použít jak v klinické mykologii, tak v parazitologii. Volně žijící améby u očních druhů mohou mít cysty, které lze živě vidět se skvrnou. Ty byly pozorovány v laboratořích na výplach očí.[5] CFW lze použít se skvrnou Papanicolaou, která pomáhá posílit reakci kvasinek v nátěrech.[6]

Výzkum

Ve výzkumu se kalkofluorová bílá také používá k barvení jizev pupenů kvasinkových buněk, protože jizvy pupenů mají vyšší obsah chitinu, který je barví více než zbytek buněčné membrány. Díky této skvrně je možné spočítat jizvy pupenů, což je údaj o stáří buňky. Ukazuje podobné vzory barvení jako Aglutinin z pšeničných klíčků (WGA). To je zvláště užitečné pro identifikaci Mucor a původci z zygomykóza.Calcofluor-white lze použít k obarvení fekálních desek v pancéřování dinoflageláty.[7]Calcofluor se také používá jako barvivo v bíle zbarveném oblečení a má za následek charakteristický vzhled pod „černým osvětlením“.

Textil

CFW je barvivo zjasňující látku. Je nejprve rozpustný ve vodě a bezbarvý. Má optický zjasňující účinek, který se od 40. let 20. století používá k bělejšímu vzhledu textilií. Rovněž se komerčně přidává do pracích prostředků jako rozjasňovač.[8]

Fluorescence

Průřez Eagle Fern ukazuje jasně zelenou a jasně modrou fluorescenci pozorovanou u CFW.

Roztoky, které jsou vodné pro kalkofluorovou bílou, mají absorpční spektrum od 300 do 412 nm s vrcholem při 347 nm. Vrchol fluorescence se vyskytuje nejlépe s ultrafialové světlo, ale fialová / modrá fialová také poskytuje skvělé výsledky fluorescence. Calcofluor-White je fluorescenční barvivo, což znamená, že má buzení a emisní vlnová délka, která se od sebe liší. Vlnová délka buzení je 380 nm, zatímco emise je 475 nm. Fluorescenci lze nejlépe vidět u ultrafialového světla, ale také u fialové nebo modrofialové.

Houby mají tendenci zobrazovat jasně zelenou barvu pod UV / fialovým / fialově modrým světlem v důsledku bariérových filtrů používaných v mikroskopii pro fluorescenci. Calcofluorová bílá musí pečlivě interpretovat barvení, protože některé nespecifické reakce mohou způsobit, že pozadí bude vypadat fluorescenčně žlutozeleně. To lze snížit pohledem na buňky pod modrým světlem nebo jinými filtry, abyste viděli nejlepší možný obraz. Evansova modrá je kontrastní barvou pro kalkofluorovou bílou, protože může pomoci snížit tkáně a buňky pozadí modrým světlem.[9]

Srovnávací studie

Ve srovnávací studii z KOH, Calcofluor-White a plísňové kultury pro diagnostiku plísní Onychomykóza „CFW byl považován za nejcitlivější způsob detekce infekce u lidí. Studie prokázala, že ze 150 pacientů vykazovaly CFW pozitivní výsledky u 95 z nich. Studie také přezkoumala klíčové výhody pro použití barviva Calcofluor-White přes KOH. Diskutovalo se o tom, že CFW vyžaduje rychlý čas screeningu, jak je vidět na nízkoenergetických cílech, a lze ho provést během minuty, zatímco KOH vyžaduje přibližně 3–4 minuty pro každý snímek. Jedná se o rychlejší a citlivější metodu screeningu než KOH a podkladový materiál lze odklonit pomocí CFC.[10]

Ve studii metod diagnostiky mykóz, plísňové infekce u lidí, byl CFW srovnáván s KOH a Chicago Sky Blue 6B. CFW vykázala pozitivní testování v 53,4% případů, u nichž bylo podezření na mykózovou infekci, zatímco Chicago Sky Blue 6B měla přesnost 55%. Studie ukázala, že CFW je méně účinný při rychlé detekci ve srovnání s Chicago Sky Blue 6B, ale je to efektivní způsob detekce plísňové infekce.[6]

Studie, která zkoumala detekci Candida u rakovinných nebo prekancerózních lézí pomocí CFW s fluorescenční mikroskopií. Studie chtěla zjistit účinnost přípravku Calcofluor-White proti druhu mykotických infekcí, které mohou způsobit smrt nebo vážné zranění pacientů s oslabenou imunitou. Rovněž zkoumala citlivost barviva ve srovnání s barvením podle Grama a PAS. Studie dospěla k závěru, že se jedná o rychlý a snadný způsob diagnostiky v cytopatologii a histopatologii, ale byla relativně drahá. Studie také ukázala, že k dosažení účinného barvení nejsou nutné žádné speciální techniky. Barvivo také neinterferuje s barvením PAS nebo Gram. Pro cytologie, Pap-CFW dal pozitivní odpověď 50 ze 135krát a pro histopatologie, poskytlo pozitivní odpověď 43 ze 135 pouze na barvení CFW. Studie ukázala, že barvení se zlepšilo párováním Pap a CFW. Výsledky ukázaly, že barvivo bylo neuvěřitelně účinné, pokud jde o rychlou diagnostiku a účinnost, takže v této konkrétní studii bylo lepší než Gram pozitivní a PAS.[11] Celkově má ​​skvrna klíčové výhody pro výzkumné a diagnostické účely, ale má problém být trochu drahá a pro určité druhy nemusí být tak přesná.

Problémy s barvením Calcofluor-White

Byly provedeny studie, které ukazují, že CFW dobře fluoreskuje Coccidioides immitis navzdory tomu, že jde o houbu. Histoplasma capsulatum a Cryptococcus neoformans mají také tendenci mít problémy se zobrazením fluorescence CFW. Další zpráva viděla Pneumocystis carinii v biopsiích plic muselo být obarveno při teplotě místnosti po dobu pěti minut a poté 65 ° C po dobu pěti minut, aby byla fluorescence nejlepší. Fluorescence s tmavě pigmentovanými houbami může mít zavádějící výsledky, protože závisí na tom, jak jsou houby pigmentované na tom, jak dobře skvrna funguje.[5]

Reference

  1. ^ A b Herth, W .; E. Schnepf (1980). „Fluorochrom, calcofluor bílý, se váže orientovaný na strukturní polysacharidové fibrily“. Protoplasma. Springer. 105 (1–2): 129–133. doi:10.1007 / BF01279855. ISSN  0033-183X. S2CID  37459059.
  2. ^ Bidhendi, AJ; Chebli, Y; Geitmann, A (květen 2020). „Fluorescenční vizualizace celulózy a pektinu v buněčné stěně primárních rostlin“. Journal of Microscopy. 278 (3): 164–181. doi:10.1111 / jmi.12895. PMID  32270489. S2CID  215619998.
  3. ^ Hoch, H.C .; CD. Galvani; D.H. Szarowski; J.N. Turner (2005). "Dvě nová fluorescenční barviva použitelná pro vizualizaci buněčných stěn hub". Mykologie. 97 (3): 580–588. doi:10.3852 / mycologia.97.3.580. ISSN  0027-5514. PMID  16392246.
  4. ^ Burns, Edward R .; Wittner M .; Faskowitz F. (5. dubna 2005). „Metoda detekce organismů obsahujících chitin - patent 6875421“. Citováno 10. listopadu 2010.
  5. ^ A b Harrington, Brian J .; Hageage, George (květen 2003). „Calcofluor White: Přehled jeho použití a aplikací v klinické mykologii a parazitologii“. Oddělení veřejného zdraví a Oddělení mikrobiologie a imunologie, Medical College of Ohio, Oddělení patologie, Mercy Integrated Laboratories, a Oddělení mikrobiologie a imunologie, Medical College of Ohio, Toledo, OH. Citovat deník vyžaduje | deník = (Pomoc)
  6. ^ A b Afshar, Parvaneh; Larijani, Laleh Vahedi; Rouhanizadeh, Hamed (2012–2018). „Srovnání konvenčních rychlých metod v diagnostice povrchových a kožních mykóz na základě KOH, chicagské nebesky modré 6B a kalcofluorových bílých skvrn“. Iranian Journal of Microbiology. 10 (6): 433–440. ISSN  2008-3289. PMC  6414738. PMID  30873272.
  7. ^ Fritz, L. a Triemer, R. 1985. Rychlá jednoduchá technika využívající kalcofluorovou bílou M2R pro vizualizaci thecal desek z dinoflagelátu. Journal of Phycology, 21: 662-664.
  8. ^ Hoch, H. C .; Galvani, C. D .; Szarowski, D. H .; Turner, J. N. (2005-05-01). "Dvě nová fluorescenční barviva použitelná pro vizualizaci buněčných stěn hub". Mykologie. 97 (3): 580–588. doi:10.1080/15572536.2006.11832788. ISSN  0027-5514. PMID  16392246. S2CID  203428057.
  9. ^ Biologicals, Daylnn (září 2005). „Calcofluor White Stain“ (PDF). Dalynn Biologicals. Katalogové číslo SC15.
  10. ^ Dass, S. Manick; E. V, Vinayaraj; Pavavni, K .; Pallam, Aishwarya; Rao, M. Srinivas (2015). „Srovnání KOH, Calcofluor White a houbové kultury pro diagnostiku houbové onychomykózy v městské fakultní nemocnici v Hyderabadu“. Indian Journal of Microbiology Research. 2 (3): 148–153. doi:10.5958/2394-5478.2015.00004.7.
  11. ^ Bhavasar, Rashmi S.K .; Goje, Santosh Kumar; Takalkar, Anant Arunrao; Ganvir, Sindhu M .; Hazarey, Vinay K .; Gosavi, Suchitra R. (2010). "Detekce Candidy Calcofluor White". Acta Cytologica. 54 (5): 679–684. doi:10.1159/000325232. ISSN  0001-5547. PMID  20968155. S2CID  3359124.

externí odkazy