Hovězí sérový albumin - Bovine serum albumin - Wikipedia

Tento článek je o albuminu specifickém pro krávy. Pro lidskou variantu viz lidský sérový albumin. Rodina savčích albuminů viz sérový albumin.
albumin
Hovězí sérum albumin 3v03 krystalová struktura.jpg
Identifikátory
OrganismusBos taurus (domácí kráva)
SymbolALB
Entrez280717
HomoloGene105925
RefSeq (mRNA)NM_180992
RefSeq (Prot)NP_851335
UniProtP02769
Další údaje
Chromozóm6: 91,54 - 91,57 Mb

Hovězí sérový albumin (BSA nebo „Frakce V“) je sérový albumin protein získaný z krav. Často se používá jako standard koncentrace proteinů v laboratorních experimentech.

Přezdívka „Frakce V“ označuje albumin jako pátou frakci originálu Metodika čištění Edwina Cohna , které využívaly diferenciální charakteristiky rozpustnosti plazmatické proteiny. Manipulací s koncentracemi rozpouštědel, pH, sůl úrovně a teplota, Cohn dokázal vytáhnout po sobě jdoucí "zlomky" z krevní plazma. Proces byl nejprve komercializován s lidským albuminem pro lékařské použití a později přijat pro výrobu BSA.

Lyofilizovaný hovězí sérový albumin

Vlastnosti

Prekurzorový protein BSA plné délky je dlouhý 607 aminokyselin (AA). An N-terminál 18-zbytek signální peptid po sekreci je odříznut od prekurzorového proteinu, proto počáteční proteinový produkt obsahuje 589 aminokyselinových zbytků. Dalších šest aminokyselin se štěpí, čímž se získá zralý protein BSA, který obsahuje 583 aminokyselin.[1]

PeptidPoziceDélka (AA)MW Da
Předchůdce po celé délce 1 – 60760769,324
Signální peptid 1 –  18182,107
Propeptid19 –  246478
Zralý protein25 – 60758366,463

Fyzikální vlastnosti BSA:

  • Počet aminokyselinových zbytků: 583
  • Molekulová hmotnost: 66 463Da (= 66,5 kDa)
  • izoelektrický bod ve vodě při 25 ° C: 4.7[2]
  • Koeficient vyhynutí 43 824 M−1cm−1 při 279 nm[3]
  • Rozměry: 140 × 40 × 40 Å (prolate elipsoid, kde a = b [4]
  • pH 1% roztoku: 5,2-7 [5][6]
  • Optická rotace: [α]259: -61 °; [α]264: -63°[5][6]
  • Stokes Radius (rs): 3,48 nm[7]
  • Sedimentační konstanta, S20, Ž × 1013: 4,5 (monomer), 6,7 (dimer)[5][6]
  • Difúzní konstanta, D20, Ž × 10−7 cm2/ s: 5,9[5][6]
  • Částečný specifický objem, V20: 0.733[5][6]
  • Vnitřní viskozita, η: 0,0413[5][6]
  • Třecí poměr, f / f0: 1,30[5][6]
  • Přírůstek indexu lomu (578 nm) × 10−3: 1.90[5][6]
  • Optická absorbance, A279 nm1 g / l: 0.667[5][6]
  • Střední rotace zbytků, [m ']233: 8443[5][6]
  • Průměrná elipticita zbytku: 21,1 [θ]209 nm; 20,1 [θ]222 nm[5][6]
  • Odhadovaná šroubovice,%: 54[5][6]
  • Odhadovaná forma b,%: 18[5][6]

Aplikace

BSA má řadu biochemických aplikací včetně ELISA (Enzyme-Linked Immunosorbent Assay), imunobloty a imunohistochemie. Protože BSA je malý, stabilní, mírně nereaktivní protein, často se používá jako blokátor v imunohistochemii.[8] Během imunohistochemie, což je proces, při kterém se protilátky používají k identifikaci antigenů v buňkách, se tkáňové řezy často inkubují s blokátory BSA k navázání nespecifických vazebných míst.[9][10] Tato vazba BSA na nespecifická vazebná místa zvyšuje pravděpodobnost, že se protilátky budou vázat pouze na požadované antigeny.[11] Blokátor BSA zlepšuje citlivost snížením šumu pozadí, protože místa jsou pokryta mírně nereaktivním proteinem.[12][13] Během tohoto procesu je nezbytná minimalizace nespecifické vazby protilátek, aby se získal nejvyšší poměr signálu k šumu.[12] BSA se také používá jako živina v buněčné a mikrobiální kultuře. v omezení trávení, BSA se používá ke stabilizaci některých enzymů během trávení DNA a aby se zabránilo adhezi enzymu k reakčním zkumavkám, špičkám pipet a dalším nádobám.[14] Tento protein neovlivňuje ostatní enzymy které to ke stabilizaci nepotřebují. BSA se také běžně používá k určení množství dalších proteinů porovnáním neznámého množství bílkovin se známým množstvím BSA (viz Bradfordův proteinový test ). BSA se používá kvůli své schopnosti zvyšovat signál v testech, nedostatečnému účinku při mnoha biochemických reakcích a nízkým nákladům, protože jeho velké množství lze snadno vyčistit z hovězí krve, vedlejšího produktu dobytčího průmyslu. Další použití BSA spočívá v tom, že jej lze použít k dočasné izolaci látek, které blokují aktivitu potřebného enzymu, čímž brání polymerázové řetězové reakci (PCR).[15] BSA byl široce používán jako šablona pro syntézu nanostruktur.[16]

BSA je také hlavní složkou fetální hovězí sérum, běžné médium pro buněčné kultury.

Viz také

Reference

  1. ^ Majorek KA, Porebski PJ, Dayal A, Zimmerman MD, Jablonska K, Stewart AJ, Chruszcz M, Minor W (říjen 2012). "Strukturální a imunologická charakterizace albuminů z hovězího, koňského a králičího séra". Molekulární imunologie. 52 (3–4): 174–82. doi:10.1016 / j.molimm.2012.05.011. PMC  3401331. PMID  22677715.
  2. ^ Ge S, Kojio K, Takahara A, Kajiyama T (1998). „Adsorpce albuminu hovězího séra na imobilizovaný povrch organotrichlorsilanu: vliv fázové separace na adsorpční vzorce proteinů“. Journal of Biomaterials Science, Polymer Edition. 9 (2): 131–50. doi:10.1163 / 156856298x00479. PMID  9493841.
  3. ^ Peters T (1975). Putman FW (ed.). Plazmatické proteiny. Akademický tisk. 133–181.
  4. ^ Wright AK, Thompson MR (únor 1975). „Hydrodynamická struktura albuminu hovězího séra určená přechodným elektrickým dvojlomem“. Biofyzikální deník. 15 (2 Pt 1): 137–41. doi:10.1016 / S0006-3495 (75) 85797-3. PMC  1334600. PMID  1167468.
  5. ^ A b C d E F G h i j k l m Putnam FW (1975). Plazmatické proteiny: struktura, funkce a genetická kontrola. 1 (2. vyd.). New York: Academic Press. 141, 147. JAKO V  B007ESU1JQ.
  6. ^ A b C d E F G h i j k l m "Albumin z hovězího séra" (PDF). Sigma-Aldrich. Citováno 5. července 2013.
  7. ^ Axelsson I (květen 1978). "Charakterizace proteinů a dalších makromolekul pomocí agarosové gelové chromatografie". Journal of Chromatography A. 152 (1): 21–32. doi:10.1016 / S0021-9673 (00) 85330-3.
  8. ^ "Sérové ​​albuminy a alergie". Databáze znalostí o strukturní biologii. National Institute of General Medical Sciences of the National Institutes of Health. Říjen 2013.
  9. ^ „Co je to imunohistochemie (IHC)“. Imunohistochemie. Sino Biological Inc.
  10. ^ Farwell AP, Dubord-Tomasetti SA (září 1999). "Hormon štítné žlázy reguluje expresi lamininu ve vyvíjejícím se mozečku krysy". Endokrinologie. 140 (9): 4221–7. doi:10.1210 / cs.140.9.4221. PMID  10465295.
  11. ^ >. „Tipy pro snížení pozadí testu ELISA“. Biocompare. Porovnat sítě. 8. října 2012.
  12. ^ A b Ouellet, Michel (24. prosince 2006). „Jak blokování funguje v imunocytochemické analýze pomocí séra nebo BSA“. MadSci Network: Biochemistry. Síť MadSci.
  13. ^ „Blocker ™ BSA (10X) v PBS“. Thermo Fisher Scientific. Thermo Fisher Scientific Inc. Archivováno od originál dne 30. 3. 2017.
  14. ^ „BSA FAQ“. Invitrogen. Archivovány od originál dne 28. 12. 2011. Citováno 19. ledna 2012.
  15. ^ Kreader CA (březen 1996). "Úleva od inhibice amplifikace v PCR s hovězím sérovým albuminem nebo proteinem genu T4 32". Aplikovaná a environmentální mikrobiologie. 62 (3): 1102–6. PMC  167874. PMID  8975603.
  16. ^ Rahmani T, Hajian A, Afkhami A, Bagheri H (2018). „Nová a vysoce výkonná snímací vrstva bez enzymů pro elektrochemickou detekci methylparathionu na základě BSA templátovaných bimetalových nanoklasterů Au – Ag“. New Journal of Chemistry. 42 (9): 7213–22. doi:10.1039 / C8NJ00425K.

Další čtení

externí odkazy