Asymetrická PCR - Asymmetric PCR - Wikipedia

Asymetrická PCR je variace PCR slouží k přednostnímu zesílení jednoho vlákna originálu DNA více než ten druhý.[1] Tato technika má aplikace u některých typů sekvenování a hybridizační sondování kde pouze jeden ze dvou doplňkových prameny je požadováno.[2]

Metodologie

Asymetrická PCR se liší od běžné PCR nadměrným množstvím primery pro vybraný řetězec. Vzhledem k pomalé (aritmetické) amplifikaci později v reakci (po vyčerpání limitujícího primeru) jsou nutné další cykly PCR.[3]

Modifikace tohoto procesu, známá jako Linear-After-The-Exponential-PCR (LATE-PCR), používá omezující primer s vyšším teplota tání než přebytek primeru k udržení účinnosti reakce, protože mezní koncentrace primeru snižuje střední reakci.[4]

Aplikace

Asymetrickou PCR lze použít k vytvoření jednořetězcové DNA z dvouřetězcové DNA, která se poté použije pro sekvenování DNA v metoda mutageneze.[Citace je zapotřebí ] Jednořetězcová DNA je také důležitá pro aptamer generace.[1]

Reference

  1. ^ A b Citartan, Marimuthu; et al. (Prosinec 2011). „Asymetrická PCR pro kvalitní generování ssDNA směrem k produkci aptameru DNA“ (PDF). Songklanakarin J. Sci. Technol. 34 (2): 125–131.
  2. ^ Wooddell, C I; Burgess, RR (1996). „Použití asymetrické PCR ke generování dlouhých primerů a jednořetězcové DNA pro začlenění zesíťovacích analogů do konkrétních míst v sondě DNA“. Genome Res. 6 (9): 886–892. doi:10,1101 / gr. 6.8886. PMID  8889557.
  3. ^ Heiat, Mohammad; et al. (14. ledna 2017). "Základní strategie pro optimalizaci asymetrických podmínek PCR jako spolehlivé metody pro generování velkého množství ssDNA aptamerů". Biotechnologie a aplikovaná biochemie. 64 (4): 541–548. doi:10.1002 / bab.1507. PMID  27222205.
  4. ^ Sanchez, J. Aquiles; et al. (4. prosince 2003). „Linear-After-The-Exponential (LATE) –PCR: Pokročilá metoda asymetrické PCR a její použití při kvantitativní analýze v reálném čase“. Sborník Národní akademie věd. 101 (7): 1933–1938. doi:10.1073 / pnas.0305476101. PMC  357030. PMID  14769930.