Počitadlo virů - Virus counter

Virus Counter 1.3 Software.jpg

The počítadlo virů je nástrojem pro rychlou kvantifikaci viry v kapalných vzorcích. Je to specializovaný průtokový cytometr který využívá fluorescenční detekci s vysokou citlivostí k přímému měření koncentrace virových částic za zlomek času potřebného pro tradiční plakové testy.

Časný vývoj

Počitadlo virů bylo vyvinuto v roce 2001 na adrese University of Colorado v Boulderu.[1] Přístroj SNaPE (Single Nanometric Particle Enumerator) byl založen na principu detekce fluorescence z jednotlivých obarvených agregátů nukleových kyselin hodnocením respiračních virů.[2] Výsledky kvantifikace z přístroje korelovaly s očekávanou koncentrací viru a hodnoty by byly významně vyšší než hodnoty získané standardními metodami titru plaku[3] obvykle se používá pro kvantifikace viru. Naměřené koncentrace byly podobné velikosti kvantitativní PCR výsledky, oba jsou podstatně vyšší než hodnoty titru plaku.

V roce 2004 přidalo počítadlo virů do nástroje SNaPE druhý detekční kanál, který podstatně vylepšil analýzu dat a zvýšil tak specificitu.[4] Princip detekce byl založen na barvení proteinů a nukleových kyselin fluorescenčními barvivy v kapalném vzorku. Když obarvené částice procházely oblastí sondy a interagovaly s laserem, byly detekovány emise a zaznamenány pro analýzu. Tento dvoukanálový systém zavedl koncept měření intaktních virionů detekcí ko-lokalizovaného proteinu a nukleových kyselin.[5] Výsledky z bakulovirus analyzované pomocí tohoto dvoukanálového systému pro počítání virů byly ve velikosti nižší než výsledky SNaPE, byly si mnohem podobnější a korelovaly s výsledky infekčního testu.[6]

Komercializace

Komerční verzi počitadla virů vyvinula společnost InDevR. V roce 2012 společnost InDevR odstartovala nástroj pro počítání virů do ViroCyt LCC. V tiskové zprávě z 15. ledna 2013 se uvádí: „ViroCyt bude odpovědný za rozšíření komerčního trhu s technologií pro počítání virů vyvinutou společností InDevR.“[7] Sartorius Stedim Biotech koupil ViroCyt za 16 milionů $ v roce 2016.[8] Oddělení virové analýzy společnosti Sartorius Stedium vyvinulo novou generaci Počítadlo virů který je komerčně dostupný.

Aplikace

Přístroj představuje novou generaci „osobních“ průtokové cytometry navrženo výhradně pro kvantifikaci celkových virových částic. Podobně jako koncentrace viru stanovená transmisní elektronovou mikroskopií poskytuje počítadlo virů měření celkového počtu virových částic / ml. Bylo úspěšně prokázáno, že počitadlo virů snadno kvantifikuje nejrůznější viry, mimo jiné včetně: chřipka, dengue, bakulovirus, respirační syncyciální, parainfluenza, zarděnky, cytomegalovirus, a herpes simplex virus.

Schopnost rychle kvantifikovat viry má velký dopad v:

  • Výzkum, vývoj a výroba vakcín
  • Antivirový výzkum
  • Virová vektor výzkum a exprese proteinů
  • Optimalizace bioprocesu
  • Charakterizace virového antigenu
  • Standardní charakteristika virové diagnostiky
  • Virové genová terapie výzkum

Činidla

Společnost Sartorius Stedium vyvinula několik reagencií pro počitadlo virů od jeho získání v roce 2016. Mezi tyto reagencie patří Combodye, reagens obarvený duelem pro obalené viry a Virotag, specifická fluorescenčně značená, vysoce afinitní činidla.[9]

Reference

  1. ^ Ferris, M. M .; Maurer, T. T .; Rowlen, K.L. (2006). „Detection and Enumeration of Single Nanometric Particles: a Confocal Optical Design for Fluorescence Flow Cytometry“. Recenze vědeckých přístrojů. 73 (6): 2404–2410. doi:10.1063/1.1476714.
  2. ^ Ferris, M. M .; McCabe, M. O .; Doan, L. G .; Rowlen, K.L. (2002). "Rychlý výpočet respiračních virů". Analytická chemie. 74 (8): 2863–2871. doi:10.1021 / ac011183q. PMID  11985317.
  3. ^ Ferris, M. M .; Stoffel, C. L .; Maurer, T. T .; Rowlen, K.L. (2002). „Kvantitativní srovnání transmisní elektronové mikroskopie, průtokové cytometrie a epifluorescenční mikroskopie pro analýzu nanometrických částic“. Analytická biochemie. 304 (2): 249–256. doi:10.1006 / abio.2002.5616. PMID  12009703.
  4. ^ Stoffel, C.L .; Rowlen, K. L .; Rowlen, KL (2005). "Návrh a charakteristika kompaktního dvoukanálového počitadla virů". Cytometrie. 65 (A): 140–147. doi:10.1002 / cyto.a.20145. PMID  15830378.
  5. ^ Stoffel, C.L .; Rowlen, K.L. (2005). "Analýza dat pro dvoukanálový počítač virů". Analytická chemie. 77 (7): 2243–2246. doi:10.1021 / ac048626l. PMID  15801759.
  6. ^ Stoffel, C.L .; Finch, R .; Christensen, K .; Edwards, D .; Rowlen, K.L. (2005). "Dvoukanálový čítač virů". Americká biotechnologická laboratoř. 37 (22): 24–25.
  7. ^ Rinaldi, Laura. „Stránka 404“. InDevR. Citováno 2020-10-02.
  8. ^ „Sartorius získává ViroCyt za 16 milionů $“. GEN - Novinky z genetického inženýrství a biotechnologie. 2016-07-15. Citováno 2020-10-02.
  9. ^ „Reagencie Combo Dye® a ViroTag®“. Sartorius. Citováno 2020-10-03.

externí odkazy