Hybridní redukované záření - Radiation reduced hybrid - Wikipedia

Hybridní redukované záření je postup při zjišťování umístění genetických markerů vůči sobě navzájem. Relativní umístění těchto značek lze kombinovat do a fyzická mapa nebo a genetická mapa. Radiační hybridní technika začíná jako další způsob zesílení a čištění DNA, první krok v jakémkoli sekvenčním projektu; záření se používá k rozbití DNA na kousky a tyto kousky jsou inkorporovány do hybridní buňky; hybrid lze pěstovat ve velkém množství. Jeden může poté zkontrolovat přítomnost různých genetických markerů pomocí PCR a analýza propojení k vyřešení vzdálenosti mezi značkami. Tedy pokud dva genetické markery jsou blízko sebe, je méně pravděpodobné, že budou odděleny zářením rozbíjejícím DNA. Tato technika je podobná tradiční analýze vazeb, na které jsme závislí genetická rekombinace vypočítat vzdálenost mezi dvěma genetickými markery.

Postup

Postup využívá dvě buněčné linie, z nichž ani jedna nemůže přežít v toxickém médiu, ale obsahuje geny, které odolávají toxinu, pokud jsou obsaženy ve stejné buňce. Studovaná buněčná linie je ozářena, což způsobuje zlomy v DNA. Tyto buňky jsou fúzovány s druhou buněčnou linií za vzniku hybridu. Pokud hybrid obsahuje geny z obou buněk, bude schopen přežít v toxickém médiu.

Buňky, které přežijí, mohou být pěstovány ve velkém množství, čímž se zesiluje DNA, která byla začleněna z ozářené buněčné linie. Lze připravit vzorek DNA z hybridní buněčné linie a použít PCR k amplifikaci dvou specifických genetických markerů. Spuštěním produktů PCR na gel lze určit, zda jsou oba markery v buněčné linii. Pokud jsou oba markery obvykle v hybridu, můžeme usoudit, že jsou blízko sebe.

Reference

• Masters, John R. W. (2000). "Přenos genu fúze ozařování". Kultura živočišných buněk: praktický přístup. Oxford University Press. str. 252–255. ISBN  0-19-963796-2. Citovat má prázdný neznámý parametr: | měsíc = (Pomoc)