Králičí hybridom - Rabbit hybridoma

A králičí hybridom je hybridní buněčná linie vytvořená fúzí králíka produkujícího protilátku B buňka s rakovinovými B-buňkami (myelom ).

Dějiny

Králičí imunitní systém byl dokumentován jako prostředek pro vývoj protilátky s vyšší afinita a rozmanitější rozpoznávání mnoha molekul, včetně fosfo-peptidů, sacharidů a imunogenu, které nejsou jinak imunogenní v myši.[1] Avšak donedávna byl rozsah protilátek dostupných u králíka omezen na polyklonální protilátky. Bylo vyvinuto několik snah o generování králíka monoklonální protilátky po vývoji myši technologie hybridomů v 70. letech.[2] Výzkum byl prováděn u myší-králičích heterohybridomů za účelem tvorby králičích monoklonálních protilátek.[1][3] Nakonec však bylo obtížné klonovat tyto heterohybridomy a klony byly obecně nestabilní a po delší dobu nevylučovaly protilátky.

Počáteční fúzní partner

V roce 1995 se Katherine Knightové a jejím kolegům z Loyola University v Chicagu podařilo vyvinout dvojitý transgenní králík nadměrně exprimující onkogeny v-abl a c-myc pod kontrolou zesilovačů těžkého a lehkého řetězce imunoglobulinu. Králík vytvořil nádor podobný myelomu, což umožnilo izolaci plasmocytomové buněčné linie s názvem 240E-1. Fúze buněk 240E-1 s králičími lymfocyty produkovala hybridomy, které konzistentním způsobem vylučovaly králičí monoklonální protilátky.[4] Stejně jako rané linie myších myelomů vyvinuté v 70. letech však byla stabilita problémem. Řada laboratoří, které obdržely buněčnou linii 240E-1 od laboratoře Dr. Knighta, uvedla problémy se stabilitou fúzní buněčné linie 240E-1.[5]

Vylepšený fúzní partner

V roce 1996 získali Weimin Zhu a Robert Pytela z Kalifornské univerzity v San Francisku (UCSF) 240E-1 od laboratoře Dr. Knighta a pokusili se vyvinout vylepšený hybridom králíka.[4] Vylepšení charakteristik 240E-1 bylo dosaženo opakovaným subklonováním, výběrem pro vysokou účinnost fúze, robustním růstem a morfologickými charakteristikami, jako je jasný vzhled pod mikroskop s fázovým kontrastem. Vybrané subklony byly dále testovány na schopnost produkovat stabilní hybridom a sekreci monoklonálních protilátek. Po několika kolech subklonování a selekčních procesů byla identifikována nová buněčná linie s názvem 240E-W, která vyjadřuje lepší účinnost a stabilitu fúze. Buněčná linie 240E-W byla od té doby dále vyvíjena a optimalizována pro produkci králičích monoklonálních protilátek pro výzkum a komerční aplikace.

Proces

Proces tvorby hybridomu u králíka nejprve vyžaduje získání B-buňky od králíka, který byl imunizován. Existuje mnoho imunizačních protokolů pro králíky, zejména pro tvorbu polyklonálních protilátek.[6][7][8] Po imunizaci jsou B-buňky fúzovány s kandidátními králičími fúzními partnerskými buněčnými liniemi za vzniku hybridomů. Výsledné protilátky z hybridomů jsou skrínovány na antigen, který splňuje požadovaná kritéria, pomocí diagnostických testů, jako je ELISA, Western blot, Imunohistochemie a FACS. Výsledné hybrdomy lze subklonovat, aby se zajistily monoklonální vlastnosti.

Humanizace králičích protilátek

Mitchell Ho a kolegové z National Cancer Institute izolovali skupinu králičích monoklonálních protilátek (např.YP218, YP223), které rozpoznávají vzácné epitopy mezotelinu, včetně špatně imunogenních míst, pro léčbu rakoviny. [9] Mitchell Ho a Yifan Zhang analyzovali komplexní struktury králičích protilátek s jejich antigeny z Protein Data Bank a identifikovali zbytky přicházející do styku s antigenem na králičí Fv ve vzdálenosti 6 Angstrom od jeho antigenu.[10] Pojmenovali „HV4" a „LV4" v králičích Fv, smyčkách oblasti nekomplementarity určující (CDR), které jsou strukturně blízké antigenu a nacházejí se v rámci 3 králičího těžkého řetězce a lehkého řetězce. Na základě strukturální analýzy navrhli humanizační strategii roubováním kombinovaných CDR Kabat / IMGT / Paratome do základní rámcové sekvence lidské zárodečné linie. Imunotoxiny složené z humanizovaných králičích Fv (včetně hYP218) fúzovaných s klinicky použitým toxinem vykazovaly silnější cytotoxicitu proti nádorovým buňkám než imunotoxiny odvozené od jejich původních králičích Fv. CAR T buňky (meso3) založené na hYP218 protilátce cílené na membránově-proximální epitop mesothelinu vykazují účinnou inhibici velkých nádorů u myší. [11] Metoda (tj. Roubování kombinovaných králičích CDR Kabat / IMGT / Paratome do stabilního rámce lidské zárodečné linie) byla navržena jako obecný přístup k humanizaci králičích protilátek.[10]

Reference

  1. ^ A b Raybould TJ, Takahashi M (červen 1988). "Produkce stabilních hybridomů králičí a myší, které vylučují králičí mAb definované specificity". Věda. 240 (4860): 1788–90. Bibcode:1988Sci ... 240.1788R. doi:10.1126 / science.3289119. PMID  3289119.
  2. ^ Collins JJ, Black PH, Strosberg AD, Haber E, Bloch KJ (únor 1974). „Transformace opičích virů 40 buněk sleziny z hyperimunního králíka: důkazy pro syntézu imunoglobulinu transformovanými buňkami“. Sborník Národní akademie věd Spojených států amerických. 71 (2): 260–2. Bibcode:1974PNAS ... 71..260C. doi:10.1073 / pnas.71.2.260. JSTOR  62751. PMC  387981. PMID  4150020.
  3. ^ Kuo MC, Sogn JA, Max EE, Kindt TJ (duben 1985). "Hybridomy králičí a myší vylučující intaktní králičí imunoglobulin". Molekulární imunologie. 22 (4): 351–9. doi:10.1016/0161-5890(85)90119-1. PMID  4033662.
  4. ^ A b Spieker-Polet H, Sethupathi P, Yam PC, Knight KL (září 1995). „Králičí monoklonální protilátky: tvorba fúzního partnera k produkci hybridomů králík-králík“. Sborník Národní akademie věd Spojených států amerických. 92 (20): 9348–52. Bibcode:1995PNAS ... 92.9348S. doi:10.1073 / pnas.92.20.9348. PMC  40982. PMID  7568130.
  5. ^ Liguori MJ, Hoff-Velk JA, Ostrow DH (červen 2001). „Rekombinantní lidský interleukin-6 zvyšuje sekreci imunoglobulinu hybridomu králík-králík“. Hybridom. 20 (3): 189–98. doi:10.1089/027245701750293529. PMID  11461668.
  6. ^ Howard GC, Kaser MR, eds. (2007). Tvorba a používání protilátek: praktická příručka. CRC Press. ISBN  9780849335280.
  7. ^ Harlow E, Lane D (1988). Protilátky: Laboratorní příručka. Cold Spring Harbor Laboratory. ISBN  978-1-936113-81-1.
  8. ^ Coligan JE, Kruisbeek AM a kol., Eds. (1994). Současné protokoly v imunologii. Greene a Wiley.
  9. ^ Zhang YF, Phung Y, Gao W, Kawa S, Hassan R, Pastan I, Ho M (květen 2015). „Nové vysoce afinitní monoklonální protilátky rozpoznávají nepřekrývající se epitopy na mezotelinu pro monitorování a léčbu mezoteliomu“. Vědecké zprávy. 5: 9928. Bibcode:2015NatSR ... 5E9928Z. doi:10.1038 / srep09928. PMC  4440525. PMID  25996440. CC-BY icon.svg Materiál byl zkopírován z tohoto zdroje, který je k dispozici pod a Mezinárodní licence Creative Commons Attribution 4.0.
  10. ^ A b Zhang YF, Ho M (duben 2017). „Humanizace králičích monoklonálních protilátek pomocí roubování kombinovaných oblastí určujících komplementaritu Kabat / IMGT / Paratome: Odůvodnění a příklady“. mAb. 9 (3): 419–429. doi:10.1080/19420862.2017.1289302. PMC  5384799. PMID  28165915. Tento článek včlení text z tohoto zdroje, který je v veřejná doména.
  11. ^ Zhang Z, Jiang D, Yang H, He Z, Liu X, Qin W a kol. (Červen 2019). "Modifikované CAR T buňky zaměřené na membránově-proximální epitop mesothelinu zvyšují protinádorovou funkci proti velkému solidnímu nádoru". Buněčná smrt a nemoc. 10 (7): 476. doi:10.1038 / s41419-019-1711-1. PMC  6572851. PMID  31209210.

externí odkazy

externí odkazy