Protein L. - Protein L
| Doména proteinu L b1 | |
|---|---|
 Struktura vazby proteinu L na lehký řetězec myší Fab.[1] | |
| Identifikátory | |
| Symbol | PpL |
| Pfam | PF02246 |
| InterPro | IPR003147 |
| SCOP2 | 1MHH / Rozsah / SUPFAM |
Protein L. byl nejprve izolován z povrchu bakteriálních druhů Peptostreptococcus magnus a bylo zjištěno, že se váže na imunoglobuliny L řetěz interakce, ze které byl název navržen.[2] Skládá se ze 719 aminokyselinových zbytků.[3] Molekulová hmotnost proteinu L purifikovaného z buněčných stěn Peptostreptoccus magnus byla nejprve odhadnuta jako 95 kD pomocí SDS-PAGE v přítomnosti redukčního činidla 2-merkaptoethanolu, zatímco molekulová hmotnost byla stanovena na 76 kD gelovou chromotografií v přítomnosti 6 M guanidinu HCI. Protein L neobsahuje žádné mezireřetězcové disulfidové smyčky ani se neskládá z podjednotek spojených disulfidem. Je to kyselá molekula s a pI 4.0.[4] Na rozdíl od Protein A a Protein G., které se váží na Fc oblast imunoglobulinů (protilátky ), Protein L váže protilátky skrz lehký řetěz interakce. Protože žádná část těžkého řetězce není zapojena do vazebné interakce, váže se protein L na širší škálu tříd protilátek než protein A nebo G. Protein L se váže na zástupce všech tříd protilátek, včetně IgG, IgM, IgA, IgE a IgD. Variabilní fragmenty s jedním řetězcem (scFv ) a fragmenty Fab se také vážou na protein L.
Přes tento široký rozsah vazby není protein L univerzálním vázáním protilátek protein. Vazba na protein L je omezena na ty protilátky, které obsahují lehké řetězce kappa. U lidí a myší obsahuje většina molekul protilátek lehké řetězce kappa (κ) a zbytek má lehké řetězce lambda (λ). Protein L je účinný pouze při vazbě určitých podtypů lehkých řetězců kappa. Například váže lidské podtypy VkI, VKIII a VKIV, ale neváže podtyp VKII. Vazba myších imunoglobulinů je omezena na ty, které mají lehké řetězce VkI.[5]
Vzhledem k těmto specifickým požadavkům na účinnou vazbu je hlavní aplikací pro imobilizovaný protein L čištění monoklonální protilátky z ascites nebo buněčná kultura supernatant o kterých je známo, že mají lehký řetězec kappa. Protein L je mimořádně užitečný pro čištění monoklonálních protilátek obsahujících VLκ ze supernatantu kultury, protože se neváže hovězí imunoglobuliny, které jsou v médiích často přítomny jako a sérum doplněk. Protein L také neinterferuje s vazebným místem antigenu protilátky, takže je vhodný pro imunoprecipitace testy, dokonce i za použití IgM.
Gen pro protein L.
Gen pro protein L obsahuje pět složek: signální sekvenci 18 aminokyselin; NH2-koncová oblast ("A") 79 zbytků; pět homologních "B" opakování po 72-76 aminokyselinách; koncová oblast COOH dvou dalších „C“ opakování (každá po 52 aminokyselinách); hydrofilní, na prolin bohatou domnělou oblast překlenující buněčnou stěnu ("W") po C opakování; hydrofobní membránová kotva ("M"). Bylo zjištěno, že B interakce (36 kD) jsou odpovědné za interakci s lehkými řetězci Ig.[2]
Jiné proteiny vázající protilátky
Kromě proteinu L mohou být použity i jiné bakteriální proteiny vázající imunoglobuliny Protein A, Protein G. a Protein A / G všechny se běžně používají k čištění, imobilizaci nebo detekci imunoglobulinů. Každý z těchto proteinů vázajících imunoglobulin má odlišný profil vazby protilátek, pokud jde o část protilátky, která je rozpoznána, a druh a typ protilátek, na které se bude vážit.
Reference
- ^ Graille M, Harrison S, Crump MP, Findlow SC, Housden NG, Muller BH, Battail-Poirot N, Sibaï G, Sutton BJ, Taussig MJ, Jolivet-Reynaud C, Gore MG, Stura EA (prosinec 2002). "Důkaz plasticity a strukturní mimikry na rozhraní L imunoglobulinového lehkého řetězce s proteinem". J Biol Chem. 277 (49): 47500–6. doi:10,1074 / jbc.M206105200. PMID 12221088.
- ^ Björck L (únor 1988). "Protein L. Nový bakteriální protein buněčné stěny s afinitou k Ig L řetězcům". J. Immunol. 140 (4): 1194–7. PMID 3125250.
- ^ Kastern W, Sjöbring U, Björck L (červen 1992). "Struktura pepttostreptokokového proteinu L a identifikace opakované vazebné domény lehkého řetězce imunoglobulinu". J. Biol. Chem. 267 (18): 12820–5. PMID 1618782.
- ^ Akerström B, Björck L (listopad 1989). „Protein L: bakteriální protein vázající lehký řetězec imunoglobulinu. Charakterizace vazebných a fyzikálně-chemických vlastností“. J. Biol. Chem. 264 (33): 19740–6. PMID 2479638.
- ^ Nilson BH, Lögdberg L, Kastern W, Björck L, Akerström B (srpen 1993). "Čištění protilátek pomocí strukturních struktur vázajících protein L ve variabilní doméně lehkého řetězce". J. Immunol. Metody. 164 (1): 33–40. doi:10.1016 / 0022-1759 (93) 90273-a. PMID 8360508.