Analýza fosfoaminokyseliny - Phosphoamino acid analysis - Wikipedia

Analýza fosfoaminokyselinyPAA je experimentální technika používaná v molekulární biologie k určení, které aminokyseliny nebo kyseliny jsou fosforylovaný v proteinu.

Technika

Protein je nejprve fosforylován za použití ³²P-značená ATP, obvykle prostřednictvím in vitro kinázový test. Většina aminokyselin v proteinu se poté hydrolyzuje, obvykle za použití silné kyseliny, jako je kyselina chlorovodíková. Tyto aminokyseliny se poté oddělí pomocí 2-dimenzionálního tenkovrstvá chromatografie spolu s aminokyselinovými standardy pro tři aminokyseliny, které jsou fosforylovány v eukaryotech: serin, threonin, a tyrosin. Tyto aminokyselinové standardy lze vizualizovat na TLC substrátu vystavením ninhydrin, která při zahřátí na ~ 100 ° C zbarví aminokyseliny viditelnou fialovou. Radioaktivní aminokyseliny lze detekovat autoradiografií a překrytí těchto dvou obrázků ukáže, které aminokyseliny jsou fosforylované.

Reference

• Rothberg, P.G., Harris, T.J.R., Nomoto, A. a Wimmer, E. (1978) O4- (5'-uridylyl) tyrosin je vazbou mezi proteinem spojeným s genomem a RNA polioviru. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 75, 4868-4872.
• Eckhart, W., Hutchinson, M.A. a Hunter, T. (1979) Aktivita fosforylace tyrosinu v imunoprecipitátech antigenu polyomu T. Buňka 18, 925-933.