Fyziologický roztok pufrovaný fosfáty - Phosphate-buffered saline
Fyziologický roztok pufrovaný fosfáty (zkráceně PBS) je pufrovací roztok běžně používané v biologický výzkum. Jedná se o vodný solný roztok obsahující hydrogenfosforečnan sodný, chlorid sodný a v některých formulacích chlorid draselný a dihydrogenfosforečnan draselný. Pufr pomáhá udržovat konstantní pH. The osmolarita a iontové koncentrace roztoků se shodují s koncentracemi v lidském těle (izotonický ).
Aplikace
PBS má mnoho použití, protože je izotonický a netoxický pro většinu buněk. Tato použití zahrnují ředění látek a oplachování buněčných nádob. PBS s EDTA se také používá k odpojení připojených a shlukovaných buněk. Dvojmocné kovy jako zinek však nelze přidat, protože to bude mít za následek srážení. U těchto typů aplikací Dobré nárazníky jsou doporučeny. Ukázalo se, že PBS je přijatelnou alternativou virového transportního média, pokud jde o transport a skladování RNA virů, jako je SARS-CoV-2[1]
Příprava
Existuje mnoho různých způsobů, jak připravit řešení PBS (jedním z nich je Dulbecco fosfátem pufrovaný fyziologický roztok (DPBS), který má stejné složení než standardní PBS[2]). Některé formulace neobsahují draslík a hořčík, zatímco jiné obsahují vápník a / nebo hořčík (v závislosti na tom, zda se pufr používá nebo nepoužívá na živou nebo fixovanou tkáň: ta nevyžaduje KCl ani MgCl2 ).
Sůl | Koncentrace (mmol / l) | Koncentrace (g / l) |
---|---|---|
NaCl | 137 | 8.0 |
KCl | 2.7 | 0.2 |
Na2HPO4 | 10 | 1.44 |
KH2PO4 | 1.8 | 0.24 |
Začněte s 800 ml destilované vody, aby se rozpustily všechny soli. Přidejte destilovanou vodu do celkového objemu 1 litr. Výsledný 1 × PBS bude mít konečnou koncentraci 157 mM Na+140 mM Cl−, 4,45 mM K.+, 10,1 mM HPO42−, 1,76 mM H2PO4− a pH 7,96. Přidáním 2,84 mM HCI se pufr posune na 7,3 mM HPO42− a 4,6 mM H2PO4− pro konečné pH 7,4 a Cl− koncentrace 142 mM.
činidlo | MW | hmotnost (g) 10 × | [M] 10 × | hmotnost (g) 5 × | [M] 5 × | hmotnost (g) 1 × | [M] 1 × |
---|---|---|---|---|---|---|---|
Na2HPO4 | 141.95897 | 14.1960 | 0.1000 | 7.0980 | 0.0500 | 1.41960 | 0.0100 |
KH2PO4 | 136.08569 | 2.4496 | 0.0180 | 1.2248 | 0.0090 | 0.24496 | 0.0018 |
NaCl | 58.44300 | 80.0669 | 1.3700 | 40.0335 | 0.6850 | 8.00669 | 0.1370 |
KCl | 74.55150 | 2.0129 | 0.0270 | 1.0064 | 0.0135 | 0.20129 | 0.0027 |
pH = 7,4 |
PH PBS je ~ 7,4. Při výrobě pufrových roztoků je dobré měřit pH vždy přímo pomocí pH metru. V případě potřeby lze pH upravit pomocí kyseliny chlorovodíkové nebo hydroxidu sodného.
PBS lze také připravit použitím komerčně vyrobených PBS pufrovacích tablet nebo sáčků.[4]
Pokud se použije při buněčné kultivaci, lze roztok rozdělit na alikvoty a sterilizovat pomocí autoklávování nebo filtrace. V závislosti na jeho použití nemusí být nutná sterilizace. PBS lze skladovat při pokojové teplotě nebo v chladničce. Koncentrované zásobní roztoky však mohou sraženina po ochlazení a měl by být udržován při pokojové teplotě, dokud se sraženina před použitím úplně nerozpustí.
Viz také
Reference
- ^ Perchetti, GA; et al. (2020). „Stability of SARS-CoV-2 RNA in Phosphate-Buffered Saline“. Journal of Clinical Microbiology. 58 (8): e01094-20. doi:10.1128 / JCM.01094-20. PMC 7383534. PMID 32414839.
- ^ Dulbecco, R .; et al. (1954). "Tvorba plaku a izolace čistých linií s viry poliomyelitidy". J. Exp. Med. 99 (2): 167–182. doi:10.1084 / jem.99.2.167. PMC 2180341. PMID 13130792.
- ^ Protokol CSH: Recept na fyziologický roztok pufrovaný fosfáty (PBS)
- ^ Medicago AB, (2010) Specifikační list solného roztoku pufrovaného fosfáty