Nitrocefin - Nitrocefin

Nitrocefin
Nitrocefin.svg
Identifikátory
Číslo CAS
PubChem CID
ChemSpider
UNII
ChEMBL
Informační karta ECHA100.164.734 Upravte to na Wikidata
Chemické a fyzikální údaje
VzorecC21H16N4Ó8S2
Molární hmotnost516.50 g · mol−1
  (ověřit)


Nitrocefin je chromogenní cefalosporin substrát běžně používaný k detekci přítomnosti beta-laktamáza enzymy produkované různými mikroby. Beta-laktamáza zprostředkovaný odpor vůči beta-laktam antibiotika jako např penicilin je rozšířený mechanismus rezistence u řady bakterie včetně členů rodiny Enterobacteriaceae, hlavní skupina enterosolventních Gramnegativní bakterie. Další metody pro beta-laktamáza detekce existují včetně PCR; nitrocefin však umožňuje rychlé beta-laktamáza detekce pomocí několika materiálů a levného vybavení.[1][2]

Struktura

Jako cefalosporin, nitrocefin obsahuje a beta-laktam prsten, který je citlivý na beta-laktamáza zprostředkovaný hydrolýza. Po hydrolýze degradovaná nitrocefinová sloučenina rychle mění barvu ze žluté na červenou. Ačkoli je nitrocefin považován za cefalosporin, nezdá se, že by měl antimikrobiální vlastnosti.[3]

Degradace a chromogenní vlastnosti

Neporušený beta-laktam antibiotika působí vazbou na proteiny vázající penicilin (PBP) zapojené do peptidoglykan syntéza. Beta-laktamázy hydrolyzovat amide vazba mezi karbonyl uhlík a dusík v beta-laktam kruh vnímavých beta-laktamů a členů beta-laktam podtřídy (včetně určitých cefalosporinů). Po hydrolýze amidové vazby nemá antibiotikum schopnost vázat bakteriální PBP a je zbytečné. Vizuální detekce tohoto procesu je u většiny v zásadě nemožná cefalosporiny protože posun ultrafialový absorpce z intaktního versus hydrolyzovaného produktu probíhá mimo viditelné spektrum. Hydrolýza nitrocefinu však vede k posunu o ultrafialový absorpce ve spektru viditelného světla od neporušeného (žlutého) nitrocefinu (~ 380 nm) po degradovaný (červený) nitrocefin (~ 500 nm), což umožňuje vizuální detekci beta-laktamáza činnost na makroskopické úrovni.[4]

Detekční testy

Následující testy popisují metody, ve kterých lze nitrocefin použít k detekci beta-laktamáza enzymy využívající levné materiály a zařízení.[5] Pracovní roztoky nitrocefinu leží v rozmezí 0,5 mg / ml až 1,0 mg / ml.

Slide Surface Assay

  1. Přidejte jednu kapku 0,5 mg / ml nitrocefinu na povrch čistého skleněného sklíčka.
  2. Vybrat kolonie z povrchu agaru pomocí sterilní smyčky a promíchejte s kapkou.
  3. Vzhled červené barvy během 20-30 minut. označuje beta-laktamáza aktivita.

Test přímého kontaktu

  1. Umístěte jednu kapku 0,5 mg / ml nitrocefinu přímo na povrch izolované kolonie.
  2. Vzhled červené barvy během 20-30 minut. označuje beta-laktamáza aktivita.

Stanovení suspenze vývaru

  1. Přidejte 3 - 5 kapek 0,5 mg / ml nitrocefinu do 1 ml suspenze bujónu.
  2. Vzhled červené barvy během 20-30 minut. označuje beta-laktamáza aktivita.

Stanovení lyzovaných buněk

  1. Lyžiujte 1 ml buněčné suspenze sonikací.
  2. Přidejte 3 až 5 kapek 0,5 mg / ml nitrocefinu do suspenze lyžovaných buněk.
  3. Vzhled červené barvy během 20-30 minut. označuje beta-laktamáza aktivita.

Stanovení filtračního papíru

  1. Vložte malý kousek filtračního papíru (~ 3 x 3 cm) do čisté Petriho misky nebo jiného čistého izolovaného povrchu a nasyťte (3-5 ml) 0,5 mg / ml nitrocefinu
  2. Vyberte izolovaný kolonie a potřete povrch impregnovaného filtračního papíru.
  3. Vzhled červené barvy během 20-30 minut. označuje beta-laktamáza aktivita

[6]

Viz také

Reference

  1. ^ O'Callaghan, Cynthia H. a kol. „Nová metoda detekce B-laktamáz pomocí chromogenního cefalosporinového substrátu.“ Antimicrobial Agents and Chemotherapy 1.4 (1972): 283-88. Ncbi.gov. Web. 10. října 2012.
  2. ^ Coudron, P. E., E. S. Moland a C. C. Sanders. „Výskyt a detekce beta-laktamáz s rozšířeným spektrem u členů čeledi Enterobacteriaceae ve Veterans Medical Center: Hledejte a můžete najít.“ Journal of Clinical Microbiology 35.10 (1997): 2593-597. Jcm.asm.org. Web. 9. ledna 2013
  3. ^ O'Callaghan, Cynthia H. a kol. „Nová metoda detekce B-laktamáz pomocí chromogenního cefalosporinového substrátu.“ Antimicrobial Agents and Chemotherapy 1.4 (1972): 283-88. Ncbi.gov. Web. 10. října 2012. 35.10 (1997): 2593-597. Jcm.asm.org. Web. 9. ledna 2013
  4. ^ O'Callaghan, Cynthia H. a kol. „Nová metoda detekce B-laktamáz pomocí chromogenního cefalosporinového substrátu.“ Antimicrobial Agents and Chemotherapy 1.4 (1972): 283-88. Ncbi.gov. Web. 10. října 2012
  5. ^ Parr, T. R., Jr. "Jednoduchá metoda screeningu na beta-laktamázu pozitivní a negativní na ampicilin rezistentní izoláty Haemophilus Influenzae." Journal of Clinical Microbiology 20.1 (1984): 131-32. Ncbi.gov. Web. 10. října 2012.
  6. ^ http://www.toku-e.com/Assets/Protocols/Nitrocefin_Protocol.pdf