Myší embryonální fibroblasty - Mouse embryonic fibroblast

MEF (myší embryonální fibroblasty) na misce pro tkáňové kultury.
Fotografie člověka embryonální kmenové buňky (kolonie buněk uprostřed). Vřetenové buňky obklopující kolonii kmenových buněk jsou MEF.

Myší embryonální fibroblasty (MEF) jsou typem fibroblasty připraveno z myši embryo. MEF vykazují při kultivaci tvar vřetena in vitro, typický rys fibroblastů. MEF je omezená buněčná linie. Po několika přenosech MEF stárnou a nakonec odumírají. Vědci však mohou použít několik strategií, jako virus infekce nebo opakovaný přenos k imortalizaci buněk MEF, což může nechat MEF růst neomezeně navzdory některým změnám znaků.[1][2]

MEF jsou široce používány při výzkumu přírodních věd, zejména v kmenová buňka biologie.

Příprava a kultura

K přípravě MEF jsou zapotřebí březí samice myší. Po obětování myši by měl výzkumník vyříznout žaludek samice myši a poté oddělit embryo od placenta v biohazard kapuce. Pak játra a hlava by měla být vyjmuta. Nakonec zbytky strávte enzymy, abyste získali jednotlivé izolované buňky a buňky kultivujte v a tkáňová kultura nádobí. Buňky MEF lze kultivovat in vitro v DMEM střední s 10% FBS. K přenosu MEF by měly používat výzkumy trypsin trávit buňky (čímž se oddělují od povrchu) a přenášet 1/5 buněk štěpených do nové misky.[3][1]

Aplikace v biologii

V roce 1962, George Todaro a Howard Green, dva vědci v Newyorská univerzita, zvěčněné MEF opakovaným přenosem. Tyto buňky se vyvinuly v běžně používanou buněčnou linii NIH 3T3.[4]

MEF ošetřené mitomycin nebo gama paprsky (takové ošetření zastaví MEF mitóza ) jsou široce používány jako podavač v embryonální kmenová buňka kultury, protože mohou napodobovat mikroprostředí v embryu.[5]V roce 2006 Shinya Yamanaka přeprogramoval MEF na iPSC zavedením 4 faktorů, které jsou pozoruhodné ve vývoji biologie kmenových buněk.[6]

Viz také

Reference

  1. ^ A b Jian-ming Xu (2005). "Příprava, kultivace a imortalizace myších embryonálních fibroblastů". Současné protokoly v molekulární biologii. 28 (1): 1–8.
  2. ^ Melissa M. St. Amand; John A. Hanover2; Joseph Shiloach1 (2016). "Srovnání strategií pro imortalizaci myších embryonálních fibroblastů". J Biol Methods. 3 (2): e41.
  3. ^ LANCTÔT. „PŘÍPRAVA A ZMRAZOVÁNÍ MYŠÍ EMBRYONICKÝCH FIBROBLASTŮ“ (PDF). LANCTÔT laboratoř, MIT.[trvalý mrtvý odkaz ]
  4. ^ TODARO GJ, GREEN H (1963). „Kvantitativní studie růstu buněk myších embryí v kultuře a jejich vývoj do zavedených linií“. J. Cell Biol. 17 (2): 299–313. doi:10.1083 / jcb.17.2.299. PMC  2106200. PMID  13985244.
  5. ^ Regad T, Sayers T, Rees R, eds. (2015). Principy biologie kmenových buněk a rakoviny: budoucí aplikace a terapeutika. John Wiley & Sons. s. 3–5. ISBN  978-1-118-67062-0.
  6. ^ Kazutoshi Takahashi, Shinya Yamanaka (2006-08-25). "Indukce pluripotentních kmenových buněk z myších embryonálních a dospělých fibroblastových kultur definovanými faktory". Buňka. 126 (4): 663–676. doi:10.1016 / j.cell.2006.07.024. hdl:2433/159777. PMID  16904174.