Reakce smíšených lymfocytů - Mixed lymphocyte reaction


Reakce smíšených lymfocytů (MLR) je test používaný farmaceutickými a biotechnologickými organizacemi k prokázání bezpečnosti léčiva nebo implantovatelného materiálu. Obvykle se používá jako součást procesu odbavení FDA.[1] Jednoduše řečeno, je to míchání populací T-lymfocytů (kategorie bílých krvinek) dohromady a měření reakce, ke které dochází. Technicky se jedná o ex-vivo buněčný imunitní test, který se vyskytuje mezi dvěma alogenními lymfocytů populace (stejný druh, ale geneticky odlišný).[2] V jednosměrném MLR může reagovat nebo proliferovat pouze jedna populace lymfocytů. V dvousměrném MLR mohou obě populace proliferovat. MLR se provádějí za účelem posouzení, jak T-buňky reagují na vnější podněty. T buňky jsou typem bílých krvinek, které skenují buněčné abnormality a infekce. Jsou nezbytné pro imunitu člověka.[3]

Historie a pozadí

MLR byl poprvé rozpoznán, když vědci v kultuře smíchali leukocyty od dvou nepříbuzných dárců.[4][5] Po několika dnech podstoupily lymfocyty blastovou transformaci, syntézu DNA a buněčnou proliferaci v reakci na hlavní histokompatibilita rozdíly mezi antigeny (MHC třídy I a II) mezi dvěma populacemi buněk označenými jako buňky respondéru a stimulátoru. Buňky respondéru proliferovaly bez předchozí expozice antigenům stimulátoru MHC. Tato reakce se stala kvantifikovatelnou po zabudování radioaktivního [3H] značeného thymidinu nebo 5-brom-2'-deoxyuridinu (BrdU) do suspenze smíšených buněk. Tato buněčná odpověď na histokompatibilní antigeny, která se vyskytuje v MLR, je také zahrnuta buněčně zprostředkované imunitní odpovědi u jedince a nabídl in vitro korelát buněčné imunitní funkce.[6][7] Standardní testy MLR byly provedeny u lidí a většiny ostatních druhů zvířat.

Subpopulace leukocytů zapojené do MLR byly nejprve charakterizovány použitím buněk z novorozence thymectomized a bursectomized kuřata. Když buňky respondéru pocházely z thymektomizovaných zvířat, nedošlo k MLR, zatímco kuřecí leukocyty s bursektomií reagovaly v kultuře a prokázaly, že T-buňky byly hlavním buněčným typem v populacích buněk respondéru.[8]

Původně se tento test používal ke studiu možných nekompatibility dárce - příjemce pro transplantace štěpu, která pomůže předpovědět lepší výsledky.[9] Standard pro porovnávání štěpů však nyní závisí na řadě HLA - porovnávání prováděné metodami molekulární typizace.[10]

Zásada

Nastavení testu sestává z čištění lymfocytů reagujících z periferní krve, brzlíku, lymfatické uzliny nebo slezina a společná kultivace se stimulačními buňkami. Populace stimulačních buněk, které také obsahují T-buňky (dvoucestná smíšená reakce lymfocytů), se replikují v přítomnosti buněk Responder, proto u jednosměrné smíšené reakce lymfocytů se stimulačním buňkám zabrání v replikaci ozářením nebo ošetřením mitomycin C., zesíťovač DNA, aby se zabránilo replikaci buněk. Maximální měřitelná buněčná proliferace nastává kolem 5–7 dnů.

Aplikace

Pro výzkumné účely test založený na MLR buňkách nadále poskytuje in vitro korelát funkce T buněk. Byla provedena další charakterizace lymfocytů, doplňkových buněk (dendritické buňky, makrofágy) a cytokinů, které se účastní MLR, protože tento test se nadále používá k definování mechanismů pro pochopení buněčné imunitní funkce in vitro.[11]

Reference

  1. ^ „Proč se provádějí smíšené reakce lymfocytů?“. Citováno 7. ledna 2017.
  2. ^ 1. Meo, T .: Test MLR u myši. 1979. In Immunological Methods, Academic Press, Inc., New York, NY.
  3. ^ „Průvodce pro začátečníky po T buňkách“. Citováno 7. ledna 2017.
  4. ^ 2. Bain, B., Vas, M. a L. Lowenstein. 1963. Reakce mezi leukocyty ve smíšených kulturách periferní krve. Fed. Proc. 22: 4281.
  5. ^ 3. Bach, F.H. a K. Hirschhorn. 1964. Interakce lymfocytů: Potenciální test histokompatibility in vitro. Science 143: 813.
  6. ^ 4. Benacerraf, B. a H.O. McDevitt. 1972. Geny pro imunitní odpověď byly spojeny s histokompatibilitou. Science (Wash D.C.) 175: 273.
  7. ^ 5. Katz, D.H. a B. Benacerraf, redaktor. 1976. Role produktů komplexu histokompatibility genu v imunitní odpovědi. Academic Press, Inc., New York.
  8. ^ 6. Alm, G.V. a R. D. Peterson: Vliv thymektomie a bursektomie a in vitro reakce buněk kuřecí sleziny na ovčí erytrocyty PHA a alogenní buňky. Fed. Proc. 29: 430, 1970.
  9. ^ 7. Bach, F.H. 1970. Transplantace: párování dárce a příjemce. Science 168; 1170.
  10. ^ 8. Olerup, O a H. Zetterquist. 1992. Typizace HLA-DR pomocí amplifikace PCR pomocí sekvenčně specifických primerů (PCR-SSP) za 2 hodiny: Alternativa k sérologické DR typizaci v klinické praxi, včetně shody dárce-příjemce při kadaverické transplantaci. Tkáňové antigeny. 39: 225.
  11. ^ 9. Lindemann M. 2014. Ex vivo hodnocení funkce buněčné imunity - aplikace v péči o pacienta a klinické studie. Tkáňové antigeny 84: 439