Přenos chromozomů zprostředkovaný mikrobuňkami - Microcell-mediated chromosome transfer - Wikipedia

Přenos chromosomů zprostředkovaný mikrobuňkami (nebo MMCT) je technika používaná v buněčná biologie a genetika převést a chromozóm od definovaného dárce buněčná linie do buněčné linie příjemce. MMCT se používá od 70. let a přispěla k mnoha objevům včetně nádor, metastáza a telomeráza supresorové geny stejně jako informace o epigenetika, x-inaktivace, mitochondriální funkce a aneuploidie.[1][2] MMCT se řídí základním postupem, při kterém jsou dárcovské buňky (tj. Buňky poskytující jeden nebo více chromozomů nebo fragmentů buňce příjemce) indukovány k vícejaderný jejich chromozomy. Tato jádra jsou poté protlačována buněčná membrána vytvořit mikrobuňky, který může být fúzován s buněčnou linií příjemce.[1]

Dějiny

Termín MMCT poprvé použili Fournier a Ruddle v roce 1977.[3] Jejich metoda byla založena na předchozí práci Ege, Ringertze, Veometta a kolegů z roku 1974,[4][5] syntéza technik používaných v té době k vyvolání vícejaderné reakce v buňkách, odstraňování jader a fúze buňka-buňka. Další důležitý krok v MMCT přišel v 80. letech, kdy byl nový transfekce k zavedení byly použity techniky volitelné značky na chromozomy, což umožňuje výběr pro zavedení konkrétních chromozomů a snadnější vytváření definovaných hybridy.[1]

Postup

Postupy pro MMCT se mírně liší, ale všechny vyžadují: indukci vícejaderné reakce, enukleace (jaderné odstranění) a fúze. Multinukleace se obvykle provádí tím, že způsobí prodlouženou mitotickou zástavu colcemid léčba. Určité buňky poté „vyklouznou“ ven mitóza a tvoří více jader. Tato jádra lze poté odstranit pomocí cytochalasin B. narušit cytoskelet a centrifugace v gradient hustoty vynutit enukleaci. Nově vytvořené mikrobuňky lze poté fúzovat na buňky příjemce (cílové) vystavením působení polyethylenglykolu, použití viru Sendai nebo elektrofúze.[1][6]

Variace nyní umožňují konstrukci „humanizovaných“ myší s velkými kusy z lidských chromozomů[7] stejně jako nové metody pro lidské a myší umělé chromozomy.[8]

Reference

  1. ^ A b C d Doherty AM, Fisher EM (září 2003). „Přenos chromozomů zprostředkovaný mikrobuňkami (MMCT): malé buňky s velkým potenciálem“. Mamm genom. 14 (9): 583–92. doi:10.1007 / s00335-003-4002-0.
  2. ^ Sengupta K .; et al. (Únor 2007). „Uměle zavedené aneuploidní chromozomy zaujímají konzervovanou pozici v buňkách rakoviny tlustého střeva“. PLOS ONE. 2 (2): e199. doi:10.1371 / journal.pone.0000199. PMC  1805818. PMID  17332847.
  3. ^ Fournier RE, Ruddle FH (leden 1977). „Mikrobuněčný přenos myších chromozomů do myších, čínských křečků a lidských somatických buněk“. Proc Natl Acad Sci USA. 74 (1): 319–23. doi:10.1073 / pnas.74.1.319. PMC  393251. PMID  264685.
  4. ^ Ege T, Ringertz NR (srpen 1974). "Příprava mikrobuněk enukleací buněk mikronukleátů". Exp. Cell Res. 87 (2): 378–82. doi:10.1016/0014-4827(74)90494-7. PMID  4370277.
  5. ^ Veomett G, Prescott DM, Shay J, Porter KR (květen 1974). "Rekonstrukce savčích buněk z jaderných a cytoplazmatických složek oddělených působením cytochalasinu B". Proc Natl Acad Sci USA. 71 (5): 1999–2002. doi:10.1073 / pnas.71.5.1999. PMC  388372. PMID  4525471.
  6. ^ Killary AM, Lott ST (únor 1996). "Výroba hybridních mikrobuněk". Metody. 9 (1): 3–11. doi:10.1006 / meth.1996.0002. PMID  9245337.
  7. ^ Tomizuka K, Shinohara T, Yoshida H, Uejima H, Ohguma A, Tanaka S, Sato K, Oshimura M, Ishida I (leden 2000). „Dvojité trans-chromozomální myši: udržování dvou jednotlivých fragmentů lidského chromozomu obsahujících Ig těžké a kappa loci a exprese plně lidských protilátek“. Proc Natl Acad Sci USA. 97 (2): 722–7. doi:10.1073 / pnas.97.2.722. PMC  15397. PMID  10639146.
  8. ^ Oshimura M, Uno N, Kazuki Y, Katoh M, Inoue T (únor 2015). „Cesta od přenosu chromozomů k inženýrství, jejímž výsledkem jsou lidské a myší umělé chromozomy pro různé aplikace v biologicko-lékařských výzvách“. Chromosome Res. 23 (1): 111–33. doi:10.1007 / s10577-014-9459-z. PMC  4365188. PMID  25657031.